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做荧光的tetramer# Biology - 生物学
y*r
1
我打算关我的帐户,要DEPOSIT的时候被告知必须BALANCE是0才能在电话里关,要不得
写信给CS,然后他们给我寄check。
银行有这种规定??打电话关帐户必须花光所有帐户里的钱?!!
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p*i
2
计划做一个protein的tetramer,然后用tetramer做binding.
思路是:
1) express protein from 293T supernatant,purify by HIS column
2)in vitro biotinylation by BirA biotin ligase (site-specific)
3) add streptavidin-PE to make TETRAMER
请问大家觉得我这个思路可以吗?
哪位做过TETRAMER的,还请不吝赐教啊~~~多谢了~~~
另外,能请各位看看下面的内容给提点意见吗?因为克隆测过序没问题,但是现在还没
看到secretion的表达 = =
在protein的N端加上:
kozak-preprotrypsin signal peptide(for secretion,貌似这样产量会高一些,而
且可能提纯好做一些), AviTag peptide (AviTag 是BirA ligase的识别site,可以用
来做site specific的biotinylation)
preprotrypsin signal peptide序列是我直接copy pCMV-FLAG-1的序列……
C端加上 6XHIS 和c-myc tag
直接跑lysate westernHIS可以看到表达,直接跑supernatant westernHIS看不到
昨天过了个HIS column,用0.5M imidazole去elute,
结果这下子lysate和supernatant 都看不见了……
我用的是Genscript的polyclonal anti-his,价钱很便宜……
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d*o
3
某些小型银行是有这种规定的.
以前我旧公司,找了家有关系的小银行做DIRECT DEPOSIT.后来我离开这家公司了,把帐
户取剩$0.01,心想即使他们扣掉也没所谓.
打电话去关的时候,他们说必须用完才会给我关.于是又给自己写了张一分钱的CHECK.
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F*D
4
wellsfargo都是这样,不是小银行吧

【在 d****o 的大作中提到】
: 某些小型银行是有这种规定的.
: 以前我旧公司,找了家有关系的小银行做DIRECT DEPOSIT.后来我离开这家公司了,把帐
: 户取剩$0.01,心想即使他们扣掉也没所谓.
: 打电话去关的时候,他们说必须用完才会给我关.于是又给自己写了张一分钱的CHECK.

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