做荧光的tetramer# Biology - 生物学
y*r
1 楼
我打算关我的帐户，要DEPOSIT的时候被告知必须BALANCE是0才能在电话里关，要不得
写信给CS，然后他们给我寄check。
银行有这种规定？？打电话关帐户必须花光所有帐户里的钱？！！
写信给CS，然后他们给我寄check。
银行有这种规定？？打电话关帐户必须花光所有帐户里的钱？！！
p*i
2 楼
计划做一个protein的tetramer，然后用tetramer做binding.
思路是：
1) express protein from 293T supernatant，purify by HIS column
2）in vitro biotinylation by BirA biotin ligase (site-specific)
3) add streptavidin-PE to make TETRAMER
请问大家觉得我这个思路可以吗？
哪位做过TETRAMER的，还请不吝赐教啊～～～多谢了～～～
另外，能请各位看看下面的内容给提点意见吗？因为克隆测过序没问题，但是现在还没
看到secretion的表达 = =
在protein的N端加上：
kozak-preprotrypsin signal peptide（for secretion，貌似这样产量会高一些，而
且可能提纯好做一些）, AviTag peptide (AviTag 是BirA ligase的识别site，可以用
来做site specific的biotinylation)
preprotrypsin signal peptide序列是我直接copy pCMV-FLAG-1的序列……
C端加上 6XHIS 和c-myc tag
直接跑lysate westernHIS可以看到表达，直接跑supernatant westernHIS看不到
昨天过了个HIS column，用0.5M imidazole去elute,
结果这下子lysate和supernatant 都看不见了……
我用的是Genscript的polyclonal anti-his，价钱很便宜……
思路是：
1) express protein from 293T supernatant，purify by HIS column
2）in vitro biotinylation by BirA biotin ligase (site-specific)
3) add streptavidin-PE to make TETRAMER
请问大家觉得我这个思路可以吗？
哪位做过TETRAMER的，还请不吝赐教啊～～～多谢了～～～
另外，能请各位看看下面的内容给提点意见吗？因为克隆测过序没问题，但是现在还没
看到secretion的表达 = =
在protein的N端加上：
kozak-preprotrypsin signal peptide（for secretion，貌似这样产量会高一些，而
且可能提纯好做一些）, AviTag peptide (AviTag 是BirA ligase的识别site，可以用
来做site specific的biotinylation)
preprotrypsin signal peptide序列是我直接copy pCMV-FLAG-1的序列……
C端加上 6XHIS 和c-myc tag
直接跑lysate westernHIS可以看到表达，直接跑supernatant westernHIS看不到
昨天过了个HIS column，用0.5M imidazole去elute,
结果这下子lysate和supernatant 都看不见了……
我用的是Genscript的polyclonal anti-his，价钱很便宜……
d*o
3 楼
某些小型银行是有这种规定的.
以前我旧公司,找了家有关系的小银行做DIRECT DEPOSIT.后来我离开这家公司了,把帐
户取剩$0.01,心想即使他们扣掉也没所谓.
打电话去关的时候,他们说必须用完才会给我关.于是又给自己写了张一分钱的CHECK.
以前我旧公司,找了家有关系的小银行做DIRECT DEPOSIT.后来我离开这家公司了,把帐
户取剩$0.01,心想即使他们扣掉也没所谓.
打电话去关的时候,他们说必须用完才会给我关.于是又给自己写了张一分钱的CHECK.
F*D
4 楼
wellsfargo都是这样，不是小银行吧
【在 d****o 的大作中提到】
: 某些小型银行是有这种规定的.
: 以前我旧公司,找了家有关系的小银行做DIRECT DEPOSIT.后来我离开这家公司了,把帐
: 户取剩$0.01,心想即使他们扣掉也没所谓.
: 打电话去关的时候,他们说必须用完才会给我关.于是又给自己写了张一分钱的CHECK.
【在 d****o 的大作中提到】
: 某些小型银行是有这种规定的.
: 以前我旧公司,找了家有关系的小银行做DIRECT DEPOSIT.后来我离开这家公司了,把帐
: 户取剩$0.01,心想即使他们扣掉也没所谓.
: 打电话去关的时候,他们说必须用完才会给我关.于是又给自己写了张一分钱的CHECK.
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