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问个关于蛋白浓度定量的方法

问个关于蛋白浓度定量的方法# Biology - 生物学

l*g2011-03-11 08:03

1 楼

新工作，大老板招的，小老板管，小老板不喜欢我，有可能过不了3个月试用期的话，
是不是应该马上QUIT以免留下不好的记录？因为刚租了一年的房子不能退，经济上有一
定的压力。没有身份问题。真心求建议。

c*e2011-03-11 08:03

2 楼

假设第二个故事是真的，在大海上漂流，死人的尸体上是怎么有的蛆？哪来的苍蝇？

s*32011-03-11 08:03

3 楼

貌似网上有人写了个但是不定期开放下载。。。至今也没下到

r*f2011-03-11 08:03

4 楼

http://www.newsmth.net/bbstcon.php?board=Apple&gid=521170&start
怎样的小受才会有这样独到的眼光阿。原文作者在水木被尊称为“名媛”。应该和
aaaty惺惺相惜吧

j*32011-03-11 08:03

5 楼

最近想给蛋白浓度定量
但是浓度很低，大概0.1ug/ml左右的样子
试了下spectrophotometer和nano drop
好像灵敏度都不够
网上查了下bio-rad和pierce的kit，貌似下限都在2-5ug/ml
请教大家还有别的啥简单的办法，样品比较多
实在不想去做WB
thanks

l*u2011-03-11 08:03

6 楼

No
尽量适应。做的越久，才会越＂适应＂。

【在 l*********g 的大作中提到】

: 新工作，大老板招的，小老板管，小老板不喜欢我，有可能过不了3个月试用期的话，
: 是不是应该马上QUIT以免留下不好的记录？因为刚租了一年的房子不能退，经济上有一
: 定的压力。没有身份问题。真心求建议。

u*r2011-03-11 08:03

7 楼

haha, good thinking

【在 c***e 的大作中提到】

: 假设第二个故事是真的，在大海上漂流，死人的尸体上是怎么有的蛆？哪来的苍蝇？

d*z2011-03-11 08:03

8 楼

我倒，一般人败家败出来的东西俗归俗但是至少上相啊，这个还真不是一般的丑！

g*y2011-03-11 08:03

9 楼

我不知道这个几个方法对你可行不，1. 将你的蛋白和不同浓度的standard比如BSA一起
跑胶然后silver stain. 之后用一般
胶stain的quantitation method 来粗略定量。 2. 将你的蛋白dialyze 到底盐或者
dh2o里。 lyophilize 成powder然后从
新溶解到small volume的buffer里来提高浓度再定量。

【在 j******3 的大作中提到】

: 最近想给蛋白浓度定量
: 但是浓度很低，大概0.1ug/ml左右的样子
: 试了下spectrophotometer和nano drop
: 好像灵敏度都不够
: 网上查了下bio-rad和pierce的kit，貌似下限都在2-5ug/ml
: 请教大家还有别的啥简单的办法，样品比较多
: 实在不想去做WB
: thanks

C*g2011-03-11 08:03

10 楼

跟小老板沟通一下，了解他的期望。可以在Job market上看一看，but don't quit
before you get new job.

c*e2011-03-11 08:03

11 楼

好笑么，我可是认真的

haha, good thinking

【在 u*********r 的大作中提到】

: haha, good thinking

U*n2011-03-11 08:03

12 楼

手机镶钻这种事，恐怕只有傻瓜才干得出来。无他，软硬件发展太快。比如当年最好的
黑白屏镶钻，今天你敢拿出来么？

s*s2011-03-11 08:03

13 楼

millipore有脱盐浓缩的小柱子，挑个分子量cutoff低的，
大概就是加0.5ml, spin个30min, 倒扣在干净管子里spin
两分钟就行了，能浓缩二三十倍，够你用了

【在 j******3 的大作中提到】

f*d2011-03-11 08:03

14 楼

小老板没面试你吗？我们公司再大的老板要招人如果下面有noise还是得黄啊

c*e2011-03-11 08:03

15 楼

斑马刚跳船上的时候确实身上有苍蝇，要是第二个故事是真的，人身上会绕着苍蝇么

haha, good thinking

【在 u*********r 的大作中提到】

: haha, good thinking

T*n2011-03-11 08:03

16 楼

老乔会高兴还是生气？

【在 r******f 的大作中提到】

: http://www.newsmth.net/bbstcon.php?board=Apple&gid=521170&start
: 怎样的小受才会有这样独到的眼光阿。原文作者在水木被尊称为“名媛”。应该和
: aaaty惺惺相惜吧

j*32011-03-11 08:03

17 楼

谢谢
我也想这么做，
但自己老板没啥钱，
我一次就有36个样品，
实验估计要做十几二十次，还不算重复
老板不同意，想让我做WB，然后想办法定量
ft啊，果然人力不值钱

【在 s******s 的大作中提到】

: millipore有脱盐浓缩的小柱子，挑个分子量cutoff低的，
: 大概就是加0.5ml, spin个30min, 倒扣在干净管子里spin
: 两分钟就行了，能浓缩二三十倍，够你用了

s*12011-03-11 08:03

18 楼

我觉得应该尽量适应，倒不是为了这份工作，而是要锻炼自己，提升自己。并且，为什
么小老板不喜欢你？是你的原因吗，还是他的原因？

s*32011-03-11 08:03

19 楼

船上的苍蝇

e*d2011-03-11 08:03

20 楼

这就是你狭隘了，人家这是生活态度。。。

【在 U***n 的大作中提到】

: 手机镶钻这种事，恐怕只有傻瓜才干得出来。无他，软硬件发展太快。比如当年最好的
: 黑白屏镶钻，今天你敢拿出来么？

j*32011-03-11 08:03

21 楼

这个浓度的蛋白silver stain一般都看不见
如果dialyze再lyophilize的话，工作量太大了
几十上百个sample呢

【在 g*****y 的大作中提到】

: 我不知道这个几个方法对你可行不，1. 将你的蛋白和不同浓度的standard比如BSA一起
: 跑胶然后silver stain. 之后用一般
: 胶stain的quantitation method 来粗略定量。 2. 将你的蛋白dialyze 到底盐或者
: dh2o里。 lyophilize 成powder然后从
: 新溶解到small volume的buffer里来提高浓度再定量。

p*g2011-03-11 08:03

22 楼

看着像假的

【在 e********d 的大作中提到】

: 这就是你狭隘了，人家这是生活态度。。。

m*z2011-03-11 08:03

23 楼

maybe absorbtion of the backbone? that should be very sensitive. but you
would need to calculate the extinction coefficient...
One way to do that maybe concentrate one of your sample, use that as a
standard to calculate the coefficient... that may work. Make sure everything
is in the same buffer though since some solvents will absorb at 220 nm or
so.

【在 j******3 的大作中提到】

: 这个浓度的蛋白silver stain一般都看不见
: 如果dialyze再lyophilize的话，工作量太大了
: 几十上百个sample呢

s*n2011-03-11 08:03

24 楼

那就做ELISA吧，96-well plate会快很多。

s*s2011-03-11 08:03

25 楼

透析再抽干，其实不麻烦，只要你的蛋白够稳定就行了。
买根tube，几十个样品也就一个小时就装完了，剩下的就是
放在buffer里面stir，换buffer, 抽出来真空离心，时间
虽然长，但是都不用人看着，动手时间也就两三个小时。

【在 j******3 的大作中提到】

: 这个浓度的蛋白silver stain一般都看不见
: 如果dialyze再lyophilize的话，工作量太大了
: 几十上百个sample呢

N22011-03-11 08:03

26 楼

0.1ug/mL 的样品,要定量,看起来是太低了.没有什么好方法准确定量.
LZ是什么样品?.其实用WB,是很快的, 尤其是很多样品.用semi-dry转膜,用SNAP-id 做
hybrid.但也只是一个估计.

【在 j******3 的大作中提到】

N22011-03-11 08:03

27 楼

这点蛋白,还不够膜沾啊.0.1ug/ml, 用colormetric method的话,至少也得有几ug,LZ得
有几十mL的样品才够测一个点.

【在 j******3 的大作中提到】

: 谢谢
: 我也想这么做，
: 但自己老板没啥钱，
: 我一次就有36个样品，
: 实验估计要做十几二十次，还不算重复
: 老板不同意，想让我做WB，然后想办法定量
: ft啊，果然人力不值钱

c*r2011-03-11 08:03

28 楼

silver stain不能定量。

j*32011-03-11 08:03

29 楼

多谢大家回复
我的样品体积大概500ul，所以其实总量也比较少
但是我不需要定绝对量
我只需要比较不同样品之间的相对量就可以了
目前看来可能elisa是比较方便的选择

j*32011-03-11 08:03

30 楼

一共可能100ng不到的蛋白
这样折腾下来是不是都没了？
没有经验

【在 s******s 的大作中提到】

: 透析再抽干，其实不麻烦，只要你的蛋白够稳定就行了。
: 买根tube，几十个样品也就一个小时就装完了，剩下的就是
: 放在buffer里面stir，换buffer, 抽出来真空离心，时间
: 虽然长，但是都不用人看着，动手时间也就两三个小时。

s*s2011-03-11 08:03

31 楼

那是呀，所以原来建议你用小柱子

【在 j******3 的大作中提到】

: 一共可能100ng不到的蛋白
: 这样折腾下来是不是都没了？
: 没有经验

j*32011-03-11 08:03

32 楼

直接上wb肯定是不行的
我现在做了下预试验，从200ul里面用TCA把蛋白沉淀下来
然后全load到page gel里，这样wb是可以比较容易检测到的
我现在的想法是能不能找个啥软件，能够根据WB条带的浓度来进行个初略的定量
我知道这样不准，但是想先试试
不知道有没有这样的软件

【在 N2 的大作中提到】

: 这点蛋白,还不够膜沾啊.0.1ug/ml, 用colormetric method的话,至少也得有几ug,LZ得
: 有几十mL的样品才够测一个点.

j*32011-03-11 08:03

33 楼

唉，没办法
和老板谈过了
不同意

【在 s******s 的大作中提到】

: 那是呀，所以原来建议你用小柱子