c*7
2 楼
金牛座（招财猫）
双子座（加菲猫）
巨蟹座（龙猫）
狮子座（黑猫警长），
处女座（叮当猫）
天秤座（大脸猫）
天蝎座（喵喵）
射手座（多啦美）
摩羯座（功夫熊猫）
水瓶座（蓝猫）
双鱼座（hello kitty）。
各位猫猫，你们都是神马品种的呢……
双子座（加菲猫）
巨蟹座（龙猫）
狮子座（黑猫警长），
处女座（叮当猫）
天秤座（大脸猫）
天蝎座（喵喵）
射手座（多啦美）
摩羯座（功夫熊猫）
水瓶座（蓝猫）
双鱼座（hello kitty）。
各位猫猫，你们都是神马品种的呢……
C*e
3 楼
我们实验室用Thermo Scitific的Glutathione Agarose纯化GST-tag蛋白
他们的手册上说用Tris buffer
想问问看有没有人用过别的buffer
比如HEPES，phosphate，Bicine之类的？
打电话去tech support已经下班了：（
他们的手册上说用Tris buffer
想问问看有没有人用过别的buffer
比如HEPES，phosphate，Bicine之类的？
打电话去tech support已经下班了：（
T*w
4 楼
你和他们的利益短期内是一致的。。。。。。
b*t
5 楼
黑猫警长。。。。
【在 c*******7 的大作中提到】
: 金牛座（招财猫）
: 双子座（加菲猫）
: 巨蟹座（龙猫）
: 狮子座（黑猫警长），
: 处女座（叮当猫）
: 天秤座（大脸猫）
: 天蝎座（喵喵）
: 射手座（多啦美）
: 摩羯座（功夫熊猫）
: 水瓶座（蓝猫）
【在 c*******7 的大作中提到】
: 金牛座（招财猫）
: 双子座（加菲猫）
: 巨蟹座（龙猫）
: 狮子座（黑猫警长），
: 处女座（叮当猫）
: 天秤座（大脸猫）
: 天蝎座（喵喵）
: 射手座（多啦美）
: 摩羯座（功夫熊猫）
: 水瓶座（蓝猫）
s*y
6 楼
这个我好像一般都是用HEPES buffer
【在 C*******e 的大作中提到】
: 我们实验室用Thermo Scitific的Glutathione Agarose纯化GST-tag蛋白
: 他们的手册上说用Tris buffer
: 想问问看有没有人用过别的buffer
: 比如HEPES，phosphate，Bicine之类的？
: 打电话去tech support已经下班了：（
【在 C*******e 的大作中提到】
: 我们实验室用Thermo Scitific的Glutathione Agarose纯化GST-tag蛋白
: 他们的手册上说用Tris buffer
: 想问问看有没有人用过别的buffer
: 比如HEPES，phosphate，Bicine之类的？
: 打电话去tech support已经下班了：（
C*e
7 楼
前辈分享个方子？
lysate/binding buffer
和elute buffer
你都用同一个么？
我看说明说binding最好pH 7.4，elute pH 8.0
可是我试过
效果并不比两个都是pH 8.0好多少
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个我好像一般都是用HEPES buffer
lysate/binding buffer
和elute buffer
你都用同一个么？
我看说明说binding最好pH 7.4，elute pH 8.0
可是我试过
效果并不比两个都是pH 8.0好多少
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个我好像一般都是用HEPES buffer
S*s
8 楼
我用的和你一样的 beads，试过 RIPA 和 PBS，都 work。实在不放心建议你用点样品
试一下。
试一下。
C*e
9 楼
谢谢！
不过这里我还是不太想用PBS buffer
因为要跟在cation exchange chromatography后面做
所以最理想的是用HEPES之类
【在 S*****s 的大作中提到】
: 我用的和你一样的 beads，试过 RIPA 和 PBS，都 work。实在不放心建议你用点样品
: 试一下。
不过这里我还是不太想用PBS buffer
因为要跟在cation exchange chromatography后面做
所以最理想的是用HEPES之类
【在 S*****s 的大作中提到】
: 我用的和你一样的 beads，试过 RIPA 和 PBS，都 work。实在不放心建议你用点样品
: 试一下。
s*s
10 楼
应该可以吧。GST还是比较容易纯化的，不想histag
【在 C*******e 的大作中提到】
: 谢谢！
: 不过这里我还是不太想用PBS buffer
: 因为要跟在cation exchange chromatography后面做
: 所以最理想的是用HEPES之类
【在 C*******e 的大作中提到】
: 谢谢！
: 不过这里我还是不太想用PBS buffer
: 因为要跟在cation exchange chromatography后面做
: 所以最理想的是用HEPES之类
s*y
11 楼
我很久以前做的了，一下子还找不出来了。不过，肯定是用同一个buffer,
我好像就是直接用pH 7.5.
GST purification 的关键点是Glutathione 最好要新鲜配，其他的基本无所谓
【在 C*******e 的大作中提到】
: 前辈分享个方子？
: lysate/binding buffer
: 和elute buffer
: 你都用同一个么？
: 我看说明说binding最好pH 7.4，elute pH 8.0
: 可是我试过
: 效果并不比两个都是pH 8.0好多少
我好像就是直接用pH 7.5.
GST purification 的关键点是Glutathione 最好要新鲜配，其他的基本无所谓
【在 C*******e 的大作中提到】
: 前辈分享个方子？
: lysate/binding buffer
: 和elute buffer
: 你都用同一个么？
: 我看说明说binding最好pH 7.4，elute pH 8.0
: 可是我试过
: 效果并不比两个都是pH 8.0好多少
C*e
12 楼
HEPES 25 mM
250-300 mM NaCl
pH 7.4
你看靠谱不？
我们不用glutathione洗脱
而是用GST tag的precision protease切
所以问题不大
【在 s******y 的大作中提到】
: 我很久以前做的了，一下子还找不出来了。不过，肯定是用同一个buffer,
: 我好像就是直接用pH 7.5.
: GST purification 的关键点是Glutathione 最好要新鲜配，其他的基本无所谓
250-300 mM NaCl
pH 7.4
你看靠谱不？
我们不用glutathione洗脱
而是用GST tag的precision protease切
所以问题不大
【在 s******y 的大作中提到】
: 我很久以前做的了，一下子还找不出来了。不过，肯定是用同一个buffer,
: 我好像就是直接用pH 7.5.
: GST purification 的关键点是Glutathione 最好要新鲜配，其他的基本无所谓
s*y
13 楼
盐有点高了。这个GST tag 纯化还是很特异的，不需要那么多盐吧？
【在 C*******e 的大作中提到】
: HEPES 25 mM
: 250-300 mM NaCl
: pH 7.4
: 你看靠谱不？
: 我们不用glutathione洗脱
: 而是用GST tag的precision protease切
: 所以问题不大
【在 C*******e 的大作中提到】
: HEPES 25 mM
: 250-300 mM NaCl
: pH 7.4
: 你看靠谱不？
: 我们不用glutathione洗脱
: 而是用GST tag的precision protease切
: 所以问题不大
I*y
14 楼
I, too think the salt is too high. The critical thing is adjust the pH to 8
for the reduced form of glutathione, because it's very acidic - if I
remember right.
【在 s******y 的大作中提到】
: 盐有点高了。这个GST tag 纯化还是很特异的，不需要那么多盐吧？
for the reduced form of glutathione, because it's very acidic - if I
remember right.
【在 s******y 的大作中提到】
: 盐有点高了。这个GST tag 纯化还是很特异的，不需要那么多盐吧？
i*g
15 楼
用Tris buffer 也可以 无关紧要，最多吸附量低一些.除非下一步做crosslink，Tris buffer 有干扰
beads 有sigma和GE healthcare两种，要买GE healthcare的那种，大概1990s 有人比
较过两种，GE吸附量可以大一倍
beads 有sigma和GE healthcare两种，要买GE healthcare的那种，大概1990s 有人比
较过两种，GE吸附量可以大一倍
C*e
16 楼
呃。。。。怎么说呢
我已经说了以前一直用Tris Buffer
这次不能用
因为要用阳离子交换柱，Tris有干扰
跟你说的crosslink有干扰相似又不尽然
（只有做primary amine基团的crosslinking才不能用Tris，crosslink不限于光做
primary
amine基团）
另外Glutathione Agarose不止sigma和GE两家
就像我原帖说的
我用的Thermo的(原Pierce)
Tris
buffer 有干扰
【在 i*****g 的大作中提到】
: 用Tris buffer 也可以 无关紧要，最多吸附量低一些.除非下一步做crosslink，Tris buffer 有干扰
: beads 有sigma和GE healthcare两种，要买GE healthcare的那种，大概1990s 有人比
: 较过两种，GE吸附量可以大一倍
我已经说了以前一直用Tris Buffer
这次不能用
因为要用阳离子交换柱，Tris有干扰
跟你说的crosslink有干扰相似又不尽然
（只有做primary amine基团的crosslinking才不能用Tris，crosslink不限于光做
primary
amine基团）
另外Glutathione Agarose不止sigma和GE两家
就像我原帖说的
我用的Thermo的(原Pierce)
Tris
buffer 有干扰
【在 i*****g 的大作中提到】
: 用Tris buffer 也可以 无关紧要，最多吸附量低一些.除非下一步做crosslink，Tris buffer 有干扰
: beads 有sigma和GE healthcare两种，要买GE healthcare的那种，大概1990s 有人比
: 较过两种，GE吸附量可以大一倍
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