p*y
2 楼
实验室当年发现了个蛋白，所有试验都是用overexpressioin做的，endogenous的蛋白
原来也做出来过，但是当年那个抗体不行了。老板又定了新的抗体，但是咋测都测不出
来。现在只有先IP再WB，但是即使用到2mg的蛋白做IP，还是测不到.TransctriptsS是
肯定有的，做过immunostaining 也饿凑凑活活能看见。就是WB不行。已经捣鼓了很长
时间了，很郁闷的说，请问大家有什么方法可以解决这个问题吗。谢谢大家。
原来也做出来过，但是当年那个抗体不行了。老板又定了新的抗体，但是咋测都测不出
来。现在只有先IP再WB，但是即使用到2mg的蛋白做IP，还是测不到.TransctriptsS是
肯定有的，做过immunostaining 也饿凑凑活活能看见。就是WB不行。已经捣鼓了很长
时间了，很郁闷的说，请问大家有什么方法可以解决这个问题吗。谢谢大家。
w*2
3 楼
done.
f*n
4 楼
换特异性抗体.
有时侯抗TAG,FLAG或者非特异部分的抗体做不出来,换成特异性抗体就可以做出来.
我们还是膜蛋白呢,换了之后就做出来了.
有时侯抗TAG,FLAG或者非特异部分的抗体做不出来,换成特异性抗体就可以做出来.
我们还是膜蛋白呢,换了之后就做出来了.
x*s
5 楼
木哈哈，历史遗留问题。。。
【在 a***y 的大作中提到】
: 2011年没有发iPad 3
【在 a***y 的大作中提到】
: 2011年没有发iPad 3
h*o
6 楼
western 信号强化３步流
１）转膜完了用Ｑentix强化一把
２）Ｄevelop的时候用femto substrates
３）用传统胶片取代ＣＣＤ的电子系统
都不行的话，换抗体吧
【在 p******y 的大作中提到】
: 实验室当年发现了个蛋白，所有试验都是用overexpressioin做的，endogenous的蛋白
: 原来也做出来过，但是当年那个抗体不行了。老板又定了新的抗体，但是咋测都测不出
: 来。现在只有先IP再WB，但是即使用到2mg的蛋白做IP，还是测不到.TransctriptsS是
: 肯定有的，做过immunostaining 也饿凑凑活活能看见。就是WB不行。已经捣鼓了很长
: 时间了，很郁闷的说，请问大家有什么方法可以解决这个问题吗。谢谢大家。
１）转膜完了用Ｑentix强化一把
２）Ｄevelop的时候用femto substrates
３）用传统胶片取代ＣＣＤ的电子系统
都不行的话，换抗体吧
【在 p******y 的大作中提到】
: 实验室当年发现了个蛋白，所有试验都是用overexpressioin做的，endogenous的蛋白
: 原来也做出来过，但是当年那个抗体不行了。老板又定了新的抗体，但是咋测都测不出
: 来。现在只有先IP再WB，但是即使用到2mg的蛋白做IP，还是测不到.TransctriptsS是
: 肯定有的，做过immunostaining 也饿凑凑活活能看见。就是WB不行。已经捣鼓了很长
: 时间了，很郁闷的说，请问大家有什么方法可以解决这个问题吗。谢谢大家。
o*4
7 楼
你们的新抗体应该有问题
【在 p******y 的大作中提到】
: 实验室当年发现了个蛋白，所有试验都是用overexpressioin做的，endogenous的蛋白
: 原来也做出来过，但是当年那个抗体不行了。老板又定了新的抗体，但是咋测都测不出
: 来。现在只有先IP再WB，但是即使用到2mg的蛋白做IP，还是测不到.TransctriptsS是
: 肯定有的，做过immunostaining 也饿凑凑活活能看见。就是WB不行。已经捣鼓了很长
: 时间了，很郁闷的说，请问大家有什么方法可以解决这个问题吗。谢谢大家。
【在 p******y 的大作中提到】
: 实验室当年发现了个蛋白，所有试验都是用overexpressioin做的，endogenous的蛋白
: 原来也做出来过，但是当年那个抗体不行了。老板又定了新的抗体，但是咋测都测不出
: 来。现在只有先IP再WB，但是即使用到2mg的蛋白做IP，还是测不到.TransctriptsS是
: 肯定有的，做过immunostaining 也饿凑凑活活能看见。就是WB不行。已经捣鼓了很长
: 时间了，很郁闷的说，请问大家有什么方法可以解决这个问题吗。谢谢大家。
p*y
8 楼
哎，我也怀疑是抗体有问题的，但是这个抗体可以用来做IP，能IP外原的蛋白。所以老
板始终不渝的相信这个抗体是没有问题的。
板始终不渝的相信这个抗体是没有问题的。
h*n
9 楼
Antibody used in IP does not necessarily work for Western Blot.
p*y
10 楼
有道理额。那我就还是overexpress这个蛋白，看看能不能用这个抗体把exogenous的检
测出来。
测出来。
r*g
11 楼
1. Load more sample (100-200 ug).
2. Use fresh sample (AFAP).
3. Positive control.
4. Do not boil your sample or shorten the boiling time (less than 3 min)
5. Increase primary antibody concentration.
6. Change antibody.
7. Give up if you still cannot detect it after trying 3-5 antibodies.
2. Use fresh sample (AFAP).
3. Positive control.
4. Do not boil your sample or shorten the boiling time (less than 3 min)
5. Increase primary antibody concentration.
6. Change antibody.
7. Give up if you still cannot detect it after trying 3-5 antibodies.
p*y
12 楼
谢谢楼上的。我最后都加到300UG的蛋白了，还是啥都么有~
我试试SHORTEN BOIL TIME 这次~
这个蛋白应该是能测到的，原来的AB就可以，但是原来那个FROZEN AND THAW了很多次
以后就彻底罢工了~哎
我试试SHORTEN BOIL TIME 这次~
这个蛋白应该是能测到的，原来的AB就可以，但是原来那个FROZEN AND THAW了很多次
以后就彻底罢工了~哎
r*g
13 楼
FROZEN AND THAW killed the antibody.
【在 p******y 的大作中提到】
: 谢谢楼上的。我最后都加到300UG的蛋白了，还是啥都么有~
: 我试试SHORTEN BOIL TIME 这次~
: 这个蛋白应该是能测到的，原来的AB就可以，但是原来那个FROZEN AND THAW了很多次
: 以后就彻底罢工了~哎
【在 p******y 的大作中提到】
: 谢谢楼上的。我最后都加到300UG的蛋白了，还是啥都么有~
: 我试试SHORTEN BOIL TIME 这次~
: 这个蛋白应该是能测到的，原来的AB就可以，但是原来那个FROZEN AND THAW了很多次
: 以后就彻底罢工了~哎
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