Redian新闻
>
有没有人做western用Biorad的半干转移,给点指示吧
avatar
A*g
2
最近在做western,不想用湿转,可是这个半干转效率也太差了呀,用的是Biorad的
Precision plus双色的预染marker,结果怎样延长时间(15v 22min 或者10v 36 min,
protocol是建议15v 15min or 10v 30min的), 那个75kd以上的基本上都还留在胶上
,没能转到膜上。目的条带说是在76KD的,这样的转膜效率让我怎么往下做啊。
我用的是PVDF膜。
恳请赐教啊,转膜buffer, 滤纸 有什么要注意的吗
avatar
i*e
3
不是去年bso过了么?
avatar
D*U
4
还是miniblot湿转吧
着急的话40-50v/gel 冷室加冰 20%甲醇 2-3hrs
250-5kd转的刚刚的
Nitrocellulose膜好点 就是杂交时不禁造
WB这玩意 这么多年 各种新设备都试了 还是老办法效率最好
avatar
B*D
5
去年是H10而且没有拿到editor choice

【在 i*****e 的大作中提到】
: 不是去年bso过了么?
avatar
i*a
6
一般是15v一个小时,不要用他们建议的,20v一个小时也行
avatar
q*n
8
Did you pre-sock and activate your PVDF with Methanol?
Check your transfer buffers? Were they made correctly?
We use:
25 mA per membrane and maximum voltage set at 35V for 0.5 hour.
It transferred really well.
avatar
p*3
10
我一般是40mA 每块胶 三小时,或者10mA每块脚过夜的。如果蛋白小于20kd就稍微缩短。
做过几百回,没问题的。
avatar
J*r
12
我觉得以上说的有道理,同时提醒一下:
check the PI of your protein
因为buffer的ph是一定的,所以半干的buffer不试用于所有的protein
avatar
i*e
13
给回帖板油一人送一个吧,哈哈
avatar
B*o
14
你说的Semi-Dry? 效率挺高的啊。
俺一般0.18A constant for 35min。基本上marker都转过去,偶尔有一丝还留在gel里
buffer就是普通的transfer buffer+甲醇. 滤纸用的也是biorad的8x13.5cm那种

,

【在 A***g 的大作中提到】
: 最近在做western,不想用湿转,可是这个半干转效率也太差了呀,用的是Biorad的
: Precision plus双色的预染marker,结果怎样延长时间(15v 22min 或者10v 36 min,
: protocol是建议15v 15min or 10v 30min的), 那个75kd以上的基本上都还留在胶上
: ,没能转到膜上。目的条带说是在76KD的,这样的转膜效率让我怎么往下做啊。
: 我用的是PVDF膜。
: 恳请赐教啊,转膜buffer, 滤纸 有什么要注意的吗

avatar
A*s
15
哈哈

【在 i*****e 的大作中提到】
: 给回帖板油一人送一个吧,哈哈
avatar
s*v
16
有米的上iBlot,tmd的真快。

【在 D******U 的大作中提到】
: 还是miniblot湿转吧
: 着急的话40-50v/gel 冷室加冰 20%甲醇 2-3hrs
: 250-5kd转的刚刚的
: Nitrocellulose膜好点 就是杂交时不禁造
: WB这玩意 这么多年 各种新设备都试了 还是老办法效率最好

avatar
t*s
17
整个机箱都是散热片,全区fanless的唯一方法
avatar
O*e
18
效果如何?

【在 s*****v 的大作中提到】
: 有米的上iBlot,tmd的真快。
avatar
p*t
19
说实话我觉得追求fanless有些偏执了
就没人想过搞个特别大的低速风扇么?现在标准的case fan还是太小了

【在 t*****s 的大作中提到】
: 整个机箱都是散热片,全区fanless的唯一方法
avatar
A*g
20
我的蛋白就是抽提的不同human cell line的核蛋白,不是什么特定的蛋白。不过可能
buffer会有问题。

【在 J******r 的大作中提到】
: 我觉得以上说的有道理,同时提醒一下:
: check the PI of your protein
: 因为buffer的ph是一定的,所以半干的buffer不试用于所有的protein

avatar
A*s
21
风扇越大制作工艺越难,特大低俗又安静又耐久的风扇应该很贵。。。

【在 p****t 的大作中提到】
: 说实话我觉得追求fanless有些偏执了
: 就没人想过搞个特别大的低速风扇么?现在标准的case fan还是太小了

avatar
A*g
22
Yes, I activated my PVDF with Methanol for 5 min.
I will try to set up 25 MA next time.
For voltage, since the protocol said: Do not exceed 25 volts, so I never try
higher voltage.

【在 q*****n 的大作中提到】
: Did you pre-sock and activate your PVDF with Methanol?
: Check your transfer buffers? Were they made correctly?
: We use:
: 25 mA per membrane and maximum voltage set at 35V for 0.5 hour.
: It transferred really well.

avatar
d*o
23
上面没有刻你的mitbbs id,不能证明是你的设计
avatar
A*g
24
下次会延长时间。
我一般也就是设定电压,但发现转膜过程中,电流会逐渐降低,会降到很低,就以为时
间延长没有什么用。
还有,再请教下,跟滤纸会不会也有关系呢,我用了Biorad的Extra thick blot paper
滤纸。

【在 i**********a 的大作中提到】
: 一般是15v一个小时,不要用他们建议的,20v一个小时也行
avatar
o*o
25
beautiful design, I love it, to be honest.
But as a WSN, I will still go for low end big box cases

【在 B*D 的大作中提到】
: 忍不住来BSO一下
: http://www.silentpcreview.com/HDPLEX_H3.SODD

avatar
d*y
26
是不是transfer buffer干掉了?

paper

【在 A***g 的大作中提到】
: 下次会延长时间。
: 我一般也就是设定电压,但发现转膜过程中,电流会逐渐降低,会降到很低,就以为时
: 间延长没有什么用。
: 还有,再请教下,跟滤纸会不会也有关系呢,我用了Biorad的Extra thick blot paper
: 滤纸。

avatar
c*e
28
semi dry的话, 应该是constant current
wet transfer才应该是恒压的
avatar
B*D
29
其实我也认为全部fanless没啥必要
隔开1m多,正常环境下,都听不见
不过当初设计这个的时候,一个为了做的薄,没办法,只能用fanless
Clarkdale等的散热器都过高了,装不进55cm的内部高度
另外一个是商业考虑,因为没法和大比价格和量,不同的生意模式
大厂背后每年有几千万的订单,类似Lian-Li Silverstone背后都是那种厂的内部衍生体
所以设计成为fanless能提高一些售价,逃避和大厂直接竞争
最后一个考虑是工控有些地方,没有风扇可能有用,而且可靠性高
不怕风扇坏了

【在 p****t 的大作中提到】
: 说实话我觉得追求fanless有些偏执了
: 就没人想过搞个特别大的低速风扇么?现在标准的case fan还是太小了

avatar
Z*5
30
100mA 一个小时,50kD以下都没问题。 75kD的可以考虑延长到一个半小时。
avatar
q*n
31
要是不要光驱是不是还能再小些?
还是说再小了散热效果会不够?

生体

【在 B*D 的大作中提到】
: 其实我也认为全部fanless没啥必要
: 隔开1m多,正常环境下,都听不见
: 不过当初设计这个的时候,一个为了做的薄,没办法,只能用fanless
: Clarkdale等的散热器都过高了,装不进55cm的内部高度
: 另外一个是商业考虑,因为没法和大比价格和量,不同的生意模式
: 大厂背后每年有几千万的订单,类似Lian-Li Silverstone背后都是那种厂的内部衍生体
: 所以设计成为fanless能提高一些售价,逃避和大厂直接竞争
: 最后一个考虑是工控有些地方,没有风扇可能有用,而且可靠性高
: 不怕风扇坏了

avatar
s*u
32
i compared the result side by side for a 300kd protein transfer.
traditional wet transfer 1hr vs. iblot 7+1 additional minutes
conclusion: traditional way beat iblot by at least 5 fold.

【在 s*****v 的大作中提到】
: 有米的上iBlot,tmd的真快。
avatar
q*g
33
照片里的整机下来总共多少刀?哪里有卖的?
avatar
A*e
34
你用的是什么transfer buffer阿, 我一般20V 18MIN,都转的干干净净的,这一步从
来没有出过问题。标准的mini gel,刚开始的时候电流达到300mA 以上吧, 然后逐渐
下降。PVDF膜我一般甲醇里面过一下然后水洗 再在buffer里面泡, 滤纸胶也一起泡
泡几分钟看心情,然后就转了
avatar
B*D
35
因为磨具要通用,热管套件也要通用
所以不带光驱的和带光驱的大小是一样的
没有光驱肯定可以小,不过感觉消费者制品来说10.5"和13.5"的差别不是那么大

【在 q*****n 的大作中提到】
: 要是不要光驱是不是还能再小些?
: 还是说再小了散热效果会不够?
:
: 生体

avatar
a*c
36
我也有楼主说的问题,是不是buffer有问题呢?
我用的是Towbin buffer(25 mM Tris, 192 mM glycine (20% methanol)),Bio-Rad
的机器,测了buffer的pH8.5,似乎没有问题。
你的buffer配方是什么?

【在 A*******e 的大作中提到】
: 你用的是什么transfer buffer阿, 我一般20V 18MIN,都转的干干净净的,这一步从
: 来没有出过问题。标准的mini gel,刚开始的时候电流达到300mA 以上吧, 然后逐渐
: 下降。PVDF膜我一般甲醇里面过一下然后水洗 再在buffer里面泡, 滤纸胶也一起泡
: 泡几分钟看心情,然后就转了

avatar
B*D
37
宅男市场太小!

【在 a*****s 的大作中提到】
: 下次照成都秋山凌设计一个
avatar
a*c
38
顶一下
avatar
d*0
40
牛人啊,恭喜
avatar
N*w
41
发包子吧...
看着有果子饭盒的影子

【在 d*****0 的大作中提到】
: 牛人啊,恭喜
avatar
B*D
42
恩,没有办法简约的设计,在机箱这个上面
难免相似,尤其是都用吸入式光驱的话

【在 N****w 的大作中提到】
: 发包子吧...
: 看着有果子饭盒的影子

avatar
N*d
43
NB哪里可以买到
avatar
N*w
44
按 MSRP 肯定可以买到

【在 N**********d 的大作中提到】
: NB哪里可以买到
avatar
z*h
45
这个是真牛!买卖提卧虎藏龙啊。
囊中羞涩,要是100刀拿下肯定买来玩玩。还有上次那个H10把电源部分改改,整个升级版也不错。

【在 B*D 的大作中提到】
: 忍不住来BSO一下
: http://www.silentpcreview.com/HDPLEX_H3.SODD

avatar
l*l
46
nice design! 能搞个mitbbs团购价吗:)
avatar
a*e
47
不错啊,站内优惠不:P...
电线山寨了点:)
外面加层网套会好很多
另外,电源还是应该上个盖子,
特别是高压端,碰到了电到人麻烦就大了
这年头找碴的人可不在少数
对了,这种电源的啸叫怎么处理?俺的几个机器放近了都能听到

【在 B*D 的大作中提到】
: 忍不住来BSO一下
: http://www.silentpcreview.com/HDPLEX_H3.SODD

avatar
a*e
48
要达到这个效果底和边得一体
不知道搂住这个是螺钉上的还是焊的

【在 t*****s 的大作中提到】
: 整个机箱都是散热片,全区fanless的唯一方法
avatar
B*D
49
对,我下一批电源线会加网套,其实价格相差也就是10-20RMB左右
电源的IEC/C14头有接地和绝缘橡胶套保护
选择这个电源最重要的原因,除了电源U型外壳可以结合散热片散热
就是没有任何电磁高频噪声。
我尝试了很多个open frame电源
FSP的就不行

【在 a***e 的大作中提到】
: 不错啊,站内优惠不:P...
: 电线山寨了点:)
: 外面加层网套会好很多
: 另外,电源还是应该上个盖子,
: 特别是高压端,碰到了电到人麻烦就大了
: 这年头找碴的人可不在少数
: 对了,这种电源的啸叫怎么处理?俺的几个机器放近了都能听到

avatar
B*D
50
螺钉...
我发现,高负荷的时间长乐,前面板会热

【在 a***e 的大作中提到】
: 要达到这个效果底和边得一体
: 不知道搂住这个是螺钉上的还是焊的

avatar
r*3
51
牛!赞!
这东西是自己画好效果图然后主办方加工么?得不少银子吧。。。。
avatar
B*D
53
这个是开模针对批量生产的

【在 r*******3 的大作中提到】
: 牛!赞!
: 这东西是自己画好效果图然后主办方加工么?得不少银子吧。。。。

avatar
i*c
54
其实全黑更cool一些,银色面板有点不协调。
avatar
B*D
55
业余作的生意

【在 i*c 的大作中提到】
: 很牛啊! 这个是业余爱好还是工作?
avatar
B*D
56
有黑色的
我没有贴照片出来,因为没有好好拍
我发现亚洲这里的喜好银色多一些
欧美的喜好全黑的多
工控领域的一般都是全黑

【在 i*c 的大作中提到】
: 其实全黑更cool一些,银色面板有点不协调。
avatar
r*3
57
俺记得你是做电子的啊,看过你在startup贴的你公司的网页,做单片机外包?不过这
也算是你的领域了。。。很牛啊

【在 B*D 的大作中提到】
: 这个是开模针对批量生产的
avatar
y*b
58
前端面板如果同机箱一样大小是不是更酷?

【在 B*D 的大作中提到】
: 有黑色的
: 我没有贴照片出来,因为没有好好拍
: 我发现亚洲这里的喜好银色多一些
: 欧美的喜好全黑的多
: 工控领域的一般都是全黑

avatar
B*D
59
看错了,我和电子毫无关系,一窍不通
不过几年前代理过高清机

【在 r*******3 的大作中提到】
: 俺记得你是做电子的啊,看过你在startup贴的你公司的网页,做单片机外包?不过这
: 也算是你的领域了。。。很牛啊

avatar
B*D
60
本来是一样大小,
但后来觉得盖板插入到前面板,设计安装上来说更加合理
因为我的前面板有15mm的厚度

【在 y**b 的大作中提到】
: 前端面板如果同机箱一样大小是不是更酷?
avatar
r*3
61
你身上流着创业的血液。。。。

【在 B*D 的大作中提到】
: 看错了,我和电子毫无关系,一窍不通
: 不过几年前代理过高清机

avatar
N*7
62
看着是不错,价格不包括电源吗?fan less power supply需要多少钱呀?
avatar
z*h
63
能给硬件版的粉丝们个内部价不?反正就几十个ID,光卖零件我们自己装就得。顺便给
你宣传宣传。

【在 B*D 的大作中提到】
: 业余作的生意
avatar
a*s
64
count me in.

【在 z**h 的大作中提到】
: 能给硬件版的粉丝们个内部价不?反正就几十个ID,光卖零件我们自己装就得。顺便给
: 你宣传宣传。

avatar
i*c
65
还是黑色的养眼啊

【在 B*D 的大作中提到】
: 有黑色的
: 我没有贴照片出来,因为没有好好拍
: 我发现亚洲这里的喜好银色多一些
: 欧美的喜好全黑的多
: 工控领域的一般都是全黑

avatar
i*c
66
如果想做一两个机箱自己用,有工厂可以代加工吗?

【在 B*D 的大作中提到】
: 这个是开模针对批量生产的
avatar
j*e
67
你不是倒apple的吗~~
avatar
a*s
68
哈哈,没说k-on,说的是成都那个
也不是要你照那个样子做,而是说可以弄个看起来很民的造型,
用老美的话big bad a$$

【在 B*D 的大作中提到】
: 宅男市场太小!
avatar
c*h
69
avatar
c*t
70
cool case. 如果不考虑电源,散热对cpu的tdp有limit吗?最大支持多少瓦?
avatar
B*D
71
我个人建议不要超过65W TDP
不过现在的CPU似乎过热后,自己降频...

【在 c****t 的大作中提到】
: cool case. 如果不考虑电源,散热对cpu的tdp有limit吗?最大支持多少瓦?
相关阅读
logo
联系我们隐私协议©2024 redian.news
Redian新闻
Redian.news刊载任何文章,不代表同意其说法或描述,仅为提供更多信息,也不构成任何建议。文章信息的合法性及真实性由其作者负责,与Redian.news及其运营公司无关。欢迎投稿,如发现稿件侵权,或作者不愿在本网发表文章,请版权拥有者通知本网处理。