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【蛋白表达】4对二硫键的蛋白,有什么简单的办法表达呀?
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【蛋白表达】4对二硫键的蛋白,有什么简单的办法表达呀?# Biology - 生物学
s*3
1
蛋白本身不长,才50个不到aa,但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达,切了
之后就沉淀啦,估计是二硫键氧化后聚集啦,后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢
氧化,再切,发现切不掉啦,没办法,老板让做真菌和植物,觉得不怎么靠谱呀,因为
蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧,这个做包涵体然后复性有戏吗?或者其
他什么比较高效点的表达系统?有人做过类似的东西么?谢谢呀
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p*s
2
我觉得这老板胡出主意,要是真菌植物那么好做大家都还用大肠杆菌干嘛?关键你没说
清楚,蛋白是可溶的还是在包涵体里?如果是可溶的为什么能用包涵体复性?“切”是
什么意思?cysteine这种东西不能用过氧化氢吧,很容易氧化成磺酸。以前没人做过这
个蛋白么?找找类似的文章。

【在 s******3 的大作中提到】
: 蛋白本身不长,才50个不到aa,但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达,切了
: 之后就沉淀啦,估计是二硫键氧化后聚集啦,后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢
: 氧化,再切,发现切不掉啦,没办法,老板让做真菌和植物,觉得不怎么靠谱呀,因为
: 蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧,这个做包涵体然后复性有戏吗?或者其
: 他什么比较高效点的表达系统?有人做过类似的东西么?谢谢呀

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C*m
3
查granulin 的NMR 结构文章在protein science上,是用变性复性,HPLC纯化的。

【在 s******3 的大作中提到】
: 蛋白本身不长,才50个不到aa,但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达,切了
: 之后就沉淀啦,估计是二硫键氧化后聚集啦,后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢
: 氧化,再切,发现切不掉啦,没办法,老板让做真菌和植物,觉得不怎么靠谱呀,因为
: 蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧,这个做包涵体然后复性有戏吗?或者其
: 他什么比较高效点的表达系统?有人做过类似的东西么?谢谢呀

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C*m
4
还有,可以用thioredoxin-tag试试,纯化的时候不加还原剂。

【在 C*********m 的大作中提到】
: 查granulin 的NMR 结构文章在protein science上,是用变性复性,HPLC纯化的。
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W*o
5
Vector pET22b is good at expression of soluble proteins with disulfide bonds
in E.coli without any tag.
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C*4
6
是不是还要看表达蛋白的e.coli,可以试试rosetta-gami,这种细菌表达含有二硫键的蛋
白好像不错
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m*a
7
先试试这个
我们以前一个类似的蛋白就是用pET22b在
periplasmic表达的
纯化的时候freeze/thaw,不用破菌

bonds

【在 W*****o 的大作中提到】
: Vector pET22b is good at expression of soluble proteins with disulfide bonds
: in E.coli without any tag.

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