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问一个UV和克隆的问题

问一个UV和克隆的问题# Biology - 生物学

s*a2011-11-16 08:11

1 楼

现在大部分实验室还是用EB染DNA吧
大家做克隆的时候DNA割胶纯化会把DNA暴露在UV下吗？
我以前一直在UV下速战速决切胶
现在在的新实验室好麻烦
在一块胶两边各留一个lane，load相同的东西，然后两边的两个lane先切下来在UV下
mark目的条带位置，最后用mark的位置blindly切目的条带。
这么短暂的UV暴露导致的突变会显著影响结果吗？

j*x2011-11-16 08:11

2 楼

这个真没啥意义吧，一般的建议都是尽量缩短UV下暴露的时间，把UV的功率调小然后速
战速决即可，这个影响几乎可以忽略，至少不会显著影响克隆结果。

【在 s******a 的大作中提到】

: 现在大部分实验室还是用EB染DNA吧
: 大家做克隆的时候DNA割胶纯化会把DNA暴露在UV下吗？
: 我以前一直在UV下速战速决切胶
: 现在在的新实验室好麻烦
: 在一块胶两边各留一个lane，load相同的东西，然后两边的两个lane先切下来在UV下
: mark目的条带位置，最后用mark的位置blindly切目的条带。
: 这么短暂的UV暴露导致的突变会显著影响结果吗？

s*a2011-11-16 08:11

3 楼

这么短的时间DNA真的就能突变吗？

【在 j****x 的大作中提到】

: 这个真没啥意义吧，一般的建议都是尽量缩短UV下暴露的时间，把UV的功率调小然后速
: 战速决即可，这个影响几乎可以忽略，至少不会显著影响克隆结果。

b*y2011-11-16 08:11

4 楼

【在 s******a 的大作中提到】

b*y2011-11-16 08:11

5 楼

Sequencing is needed regardless. No need to worry for a majority of cases.

b*y2011-11-16 08:11

6 楼

【在 s******a 的大作中提到】

j*x2011-11-16 08:11

7 楼

理论上当然是可能的，只是程度上的差别。片段越长暴露时间越久突变的几率和程度自
然就越高。只不过大部分情况下突变的DNA链只占总数的很小一部分比例，绝大多数重
组子仍然是未突变的。只要不是特别点背正好中奖。
如果插入片段很长对突变又非常敏感，又不想重组之后再完整测序确认，那么你们实验
室的做法也是可取的，或者用UV free purification.

【在 s******a 的大作中提到】

: 这么短的时间DNA真的就能突变吗？