Help me !!!DNase I hypersensitive assay - 未名空间MITBBS历史存档

Help me !!!DNase I hypersensitive assay# Biology - 生物学

g*n2012-02-26 08:02

1 楼

【以下文字转载自 ME 讨论区】
发信人: growpen (growpen), 信区: ME
标题: 求教侄女被密苏里大学哥伦比亚分校机械工程专业录取读博士
关键字: 机械工程就业计算机 MECS Master
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Oct 31 11:28:51 2014, 美东)
求教她被密苏里大学哥伦比亚分校机械工程专业录取读博士
想问问这个专业毕业之后就业前景如何。
我估计她做发考题是不可能了。
我想给她建议，读PHD的同时拿个CS的Master，但她和她娘目前对CS好像都不怎么感冒
唉，信息鸿沟，没办法。
小姑娘如果过来之后，再跟了一个mean老板，这辈子还不就交代了.

b*82012-02-26 08:02

2 楼

最近开始做这个实验，大概流程如下，RSB+0.5% NP-40 分离nuclei，然后用NEB 公司
的 DNase I （浓度分别为0,8,16,32,64,128 Units/ml）在37度切25min，加EDTA(
final conc 5mM)混合后75度10min终止反应，蛋白酶k 56度过夜消化，酚氯仿抽提。取
2ug 基因组DNA跑0.8% TBE 胶，理论上随着DNase I 酶量加大，应该能看到一个DNA逐
渐变碎的过程，可是我做了几次，都只看到一个很微弱的趋势，我现在有两个问题想请
教大家，
1）是否一定要在DNase I 处理后看到一个明显的基因组DNA变碎的趋势？
2）NEB网站上建议的DNase I处理完毕后需要加一定量的的EDTA，再75度10min，但是我
看别的文献里说EDTA是用来保护mRNA不受降解的，适用于做reverse transcription之
前去处RNA样品中残留的基因组DNA。我这个实验里需呀尽量除去RNA，是否可以不加
EDTA而直接做heat inactivation？
请大家帮助，谢谢

s*y2012-02-26 08:02

3 楼

这个学校还可以吧，这个专业也还不赖啊。而且男生特别多，实在不想做发考题了还可
以果断嫁人。

【在 g*****n 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 ME 讨论区】
: 发信人: growpen (growpen), 信区: ME
: 标题: 求教侄女被密苏里大学哥伦比亚分校机械工程专业录取读博士
: 关键字: 机械工程就业计算机 MECS Master
: 发信站: BBS 未名空间站 (Fri Oct 31 11:28:51 2014, 美东)
: 求教她被密苏里大学哥伦比亚分校机械工程专业录取读博士
: 想问问这个专业毕业之后就业前景如何。
: 我估计她做发考题是不可能了。
: 我想给她建议，读PHD的同时拿个CS的Master，但她和她娘目前对CS好像都不怎么感冒
: 唉，信息鸿沟，没办法。

s*t2012-02-26 08:02

4 楼

DNAase I 这个assay的结果好像是要做southern才能知道的把，光看胶好像没用，不说
明问题。

【在 b**********8 的大作中提到】

: 最近开始做这个实验，大概流程如下，RSB+0.5% NP-40 分离nuclei，然后用NEB 公司
: 的 DNase I （浓度分别为0,8,16,32,64,128 Units/ml）在37度切25min，加EDTA(
: final conc 5mM)混合后75度10min终止反应，蛋白酶k 56度过夜消化，酚氯仿抽提。取
: 2ug 基因组DNA跑0.8% TBE 胶，理论上随着DNase I 酶量加大，应该能看到一个DNA逐
: 渐变碎的过程，可是我做了几次，都只看到一个很微弱的趋势，我现在有两个问题想请
: 教大家，
: 1）是否一定要在DNase I 处理后看到一个明显的基因组DNA变碎的趋势？
: 2）NEB网站上建议的DNase I处理完毕后需要加一定量的的EDTA，再75度10min，但是我
: 看别的文献里说EDTA是用来保护mRNA不受降解的，适用于做reverse transcription之
: 前去处RNA样品中残留的基因组DNA。我这个实验里需呀尽量除去RNA，是否可以不加

g*n2012-02-26 08:02

5 楼

感谢回复
她问我是因为说看了个什么微博，说机械工程师未来就业难的10大专业之一，还说这个
排名是硕博士的。
我问她谁排的，她说她忘了哪里看到的.. 云丝

【在 s******y 的大作中提到】

: 这个学校还可以吧，这个专业也还不赖啊。而且男生特别多，实在不想做发考题了还可
: 以果断嫁人。

s*s2012-02-26 08:02

6 楼

直接加热过程中dnase的活性不好控制，加了edta应该直接灭了。

【在 b**********8 的大作中提到】

: 最近开始做这个实验，大概流程如下，RSB+0.5% NP-40 分离nuclei，然后用NEB 公司
: 的 DNase I （浓度分别为0,8,16,32,64,128 Units/ml）在37度切25min，加EDTA(
: final conc 5mM)混合后75度10min终止反应，蛋白酶k 56度过夜消化，酚氯仿抽提。取
: 2ug 基因组DNA跑0.8% TBE 胶，理论上随着DNase I 酶量加大，应该能看到一个DNA逐
: 渐变碎的过程，可是我做了几次，都只看到一个很微弱的趋势，我现在有两个问题想请
: 教大家，
: 1）是否一定要在DNase I 处理后看到一个明显的基因组DNA变碎的趋势？
: 2）NEB网站上建议的DNase I处理完毕后需要加一定量的的EDTA，再75度10min，但是我
: 看别的文献里说EDTA是用来保护mRNA不受降解的，适用于做reverse transcription之
: 前去处RNA样品中残留的基因组DNA。我这个实验里需呀尽量除去RNA，是否可以不加

w*x2012-02-26 08:02

7 楼

为啥说机械专业难找工作……？随便想了下，生物技术里面的生物力学，各种新型汽车
的结构强度设计，航母等大型设备，以及各种电子元器件的散热分析……
窃以为，可预见的未来里面，传统工程还不至于找不到工作吧……

【在 g*****n 的大作中提到】

: 感谢回复
: 她问我是因为说看了个什么微博，说机械工程师未来就业难的10大专业之一，还说这个
: 排名是硕博士的。
: 我问她谁排的，她说她忘了哪里看到的.. 云丝

b*82012-02-26 08:02

8 楼

谢谢回复，最终肯定是要做southern 才对。但是我现在的问题是DNase 处理之后，
southtern
blot之前，那个基因组DNA是不是在电泳胶上应该看出明显的逐渐碎裂的趋势？我现在
的样品，即使DNAse 浓度已经高达128U/ml，（类似的paper最高只用到16或者32U/ml）
，可是跑胶后DNA还是集中在最顶上方的一团。【在 sickcat (sickcat) 的大作中提
到: 】

d*02012-02-26 08:02

9 楼

机械在工科里面工作机会只比cs少。比其他专业都多。

【在 g*****n 的大作中提到】

: 感谢回复
: 她问我是因为说看了个什么微博，说机械工程师未来就业难的10大专业之一，还说这个
: 排名是硕博士的。
: 我问她谁排的，她说她忘了哪里看到的.. 云丝

L*s2012-02-26 08:02

10 楼

她自己是哪里毕业的？

【在 g*****n 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 ME 讨论区】
: 发信人: growpen (growpen), 信区: ME
: 标题: 求教侄女被密苏里大学哥伦比亚分校机械工程专业录取读博士
: 关键字: 机械工程就业计算机 MECS Master
: 发信站: BBS 未名空间站 (Fri Oct 31 11:28:51 2014, 美东)
: 求教她被密苏里大学哥伦比亚分校机械工程专业录取读博士
: 想问问这个专业毕业之后就业前景如何。
: 我估计她做发考题是不可能了。
: 我想给她建议，读PHD的同时拿个CS的Master，但她和她娘目前对CS好像都不怎么感冒
: 唉，信息鸿沟，没办法。

g*n2012-02-26 08:02

11 楼

Ok, 我全文转给她下下

【在 w*x 的大作中提到】

: 为啥说机械专业难找工作……？随便想了下，生物技术里面的生物力学，各种新型汽车
: 的结构强度设计，航母等大型设备，以及各种电子元器件的散热分析……
: 窃以为，可预见的未来里面，传统工程还不至于找不到工作吧……

g*n2012-02-26 08:02

12 楼

太好了。跟她说让她放心。

【在 d*****0 的大作中提到】

: 机械在工科里面工作机会只比cs少。比其他专业都多。

g*n2012-02-26 08:02

13 楼

科大的
挂一下，我觉得她在90后里面也算长得不错身材也挺好的，不知道当时为啥要选机械。
哦对了，上面有朋友提到找男人的问题，她不用了，她很可能双飞过来。侄女婿是机械
猛男一枚。话说回来，现在机械猛男的比例明显比当年要小的多，不知点解。

【在 L***s 的大作中提到】

: 她自己是哪里毕业的？

L*s2012-02-26 08:02

14 楼

双飞...
话说专业和长相身材有什么关系？

【在 g*****n 的大作中提到】

: 科大的
: 挂一下，我觉得她在90后里面也算长得不错身材也挺好的，不知道当时为啥要选机械。
: 哦对了，上面有朋友提到找男人的问题，她不用了，她很可能双飞过来。侄女婿是机械
: 猛男一枚。话说回来，现在机械猛男的比例明显比当年要小的多，不知点解。

s*y2012-02-26 08:02

15 楼

晕，你侄女既然是磕打的，出路不会太差的。你就放心吧。
话说磕打的机械系，女生很少，但是都是猛女。当年和我同级的那届好像是60多人里面
就5，6个女生，后来踢的那个什么巾葛杯女足赛的时候是把两个级的女生都加起来才凑
够了上场人数。但是照样把我们这种女生很多的生物系打得鬼哭狼嚎抱头鼠窜。

【在 g*****n 的大作中提到】

: 科大的
: 挂一下，我觉得她在90后里面也算长得不错身材也挺好的，不知道当时为啥要选机械。
: 哦对了，上面有朋友提到找男人的问题，她不用了，她很可能双飞过来。侄女婿是机械
: 猛男一枚。话说回来，现在机械猛男的比例明显比当年要小的多，不知点解。

g*n2012-02-26 08:02

16 楼

我本来以为她回去读个什么中戏，美院之类的，
结果小妮子喜欢理工，就整了个机械
专业和长相身材，我觉得有相关性存在，当然，这样说的前提是，样貌身材可以量化，
尤其对于女孩而言。
定性讨论，就是某些专业的女孩子长得好看的更多一些，身材好的更多一些，比如舞蹈
系；
某些专业的女孩子长相一般的多谢，身材一般的多谢，比如化学系，机械系；
有些专业的女孩子长相偏差的多谢，身材一般的多谢，比如物理系，数学系.
唉，得罪人啊
当然，不排除，机械系也出美女，机械系也出五短身材情商低下的四眼索南，小概率事
件而已。
唉，又得罪人啊，真是罪过啊。

【在 L***s 的大作中提到】

: 双飞...
: 话说专业和长相身材有什么关系？

L*s2012-02-26 08:02

17 楼

女孩只要长得好...都会不得了

【在 g*****n 的大作中提到】

: 我本来以为她回去读个什么中戏，美院之类的，
: 结果小妮子喜欢理工，就整了个机械
: 专业和长相身材，我觉得有相关性存在，当然，这样说的前提是，样貌身材可以量化，
: 尤其对于女孩而言。
: 定性讨论，就是某些专业的女孩子长得好看的更多一些，身材好的更多一些，比如舞蹈
: 系；
: 某些专业的女孩子长相一般的多谢，身材一般的多谢，比如化学系，机械系；
: 有些专业的女孩子长相偏差的多谢，身材一般的多谢，比如物理系，数学系.
: 唉，得罪人啊
: 当然，不排除，机械系也出美女，机械系也出五短身材情商低下的四眼索南，小概率事

g*n2012-02-26 08:02

18 楼

哈哈，“把我们这种女生很多的生物系打得鬼哭狼嚎抱头鼠窜” 太好笑了。
话说，你们还有女足，够邪恶的啊！体育部的索南该打，太坏了。
她奶奶的，你算说对了。
刚跟这小妮子微信，小妞说等什么更好的学校呢，这个密苏里大学校她都没听说过，是
中介帮她申的，就让我帮着问问。
我问她，你丫为啥找中介，丢不丢人，她跟我说，现在国内都找中介
我姥姥的》。。

【在 s******y 的大作中提到】

: 晕，你侄女既然是磕打的，出路不会太差的。你就放心吧。
: 话说磕打的机械系，女生很少，但是都是猛女。当年和我同级的那届好像是60多人里面
: 就5，6个女生，后来踢的那个什么巾葛杯女足赛的时候是把两个级的女生都加起来才凑
: 够了上场人数。但是照样把我们这种女生很多的生物系打得鬼哭狼嚎抱头鼠窜。

s*y2012-02-26 08:02

19 楼

呵呵，不要紧，这里的人都不是那么容易被得罪的。

【在 g*****n 的大作中提到】

: 我本来以为她回去读个什么中戏，美院之类的，
: 结果小妮子喜欢理工，就整了个机械
: 专业和长相身材，我觉得有相关性存在，当然，这样说的前提是，样貌身材可以量化，
: 尤其对于女孩而言。
: 定性讨论，就是某些专业的女孩子长得好看的更多一些，身材好的更多一些，比如舞蹈
: 系；
: 某些专业的女孩子长相一般的多谢，身材一般的多谢，比如化学系，机械系；
: 有些专业的女孩子长相偏差的多谢，身材一般的多谢，比如物理系，数学系.
: 唉，得罪人啊
: 当然，不排除，机械系也出美女，机械系也出五短身材情商低下的四眼索南，小概率事

s*y2012-02-26 08:02

20 楼

你侄女太给磕打丢脸了，居然找中介。是转学出来读本科还是出来读研究生？
这个学校还凑合，但算不上特别好的地方。如果是读本科还凑合，如果是读研究生她应
该去个更好的。

【在 g*****n 的大作中提到】

: 哈哈，“把我们这种女生很多的生物系打得鬼哭狼嚎抱头鼠窜” 太好笑了。
: 话说，你们还有女足，够邪恶的啊！体育部的索南该打，太坏了。
: 她奶奶的，你算说对了。
: 刚跟这小妮子微信，小妞说等什么更好的学校呢，这个密苏里大学校她都没听说过，是
: 中介帮她申的，就让我帮着问问。
: 我问她，你丫为啥找中介，丢不丢人，她跟我说，现在国内都找中介
: 我姥姥的》。。

g*n2012-02-26 08:02

21 楼

她出来读博得，我跟她说要不就读博士，要么直接工作去。
如果出来读硕士，那就直选CS，人家还说什么CS就是个工具呢，我说你个小妮子也不知
道哪里来的这么大的自信。
关于中介，我也骂她呢。她跟我说，现在都找，科大的区别就是背地里昭，明面上都说
自己
DIY。
我说你胡说，她说让我回国去看看》。。。
我擦，这个90后啊！云丝

【在 s******y 的大作中提到】

: 你侄女太给磕打丢脸了，居然找中介。是转学出来读本科还是出来读研究生？
: 这个学校还凑合，但算不上特别好的地方。如果是读本科还凑合，如果是读研究生她应
: 该去个更好的。

g*n2012-02-26 08:02

22 楼

本科我查了，USNEWS说100，还没查他们的排名依据。
不知道这个地方的研究生，尤其是机械能多少，放狗去咬一下。

【在 s******y 的大作中提到】

: 你侄女太给磕打丢脸了，居然找中介。是转学出来读本科还是出来读研究生？
: 这个学校还凑合，但算不上特别好的地方。如果是读本科还凑合，如果是读研究生她应
: 该去个更好的。

s*y2012-02-26 08:02

23 楼

哈哈，磕打一直有这个女足赛的传统，每个系都参与的。唯一的例外就是数学系，因为
他们的女生实在是太少了，有时候一年才有一个，所以实在凑不出一个队来。

【在 g*****n 的大作中提到】

: 哈哈，“把我们这种女生很多的生物系打得鬼哭狼嚎抱头鼠窜” 太好笑了。
: 话说，你们还有女足，够邪恶的啊！体育部的索南该打，太坏了。
: 她奶奶的，你算说对了。
: 刚跟这小妮子微信，小妞说等什么更好的学校呢，这个密苏里大学校她都没听说过，是
: 中介帮她申的，就让我帮着问问。
: 我问她，你丫为啥找中介，丢不丢人，她跟我说，现在国内都找中介
: 我姥姥的》。。

g*n2012-02-26 08:02

24 楼

为啥不五人制？
哈哈哈，我也够坏了。

【在 s******y 的大作中提到】

: 哈哈，磕打一直有这个女足赛的传统，每个系都参与的。唯一的例外就是数学系，因为
: 他们的女生实在是太少了，有时候一年才有一个，所以实在凑不出一个队来。

g*e2012-02-26 08:02

25 楼

Are you also from 磕打? :)

【在 s******y 的大作中提到】

: 晕，你侄女既然是磕打的，出路不会太差的。你就放心吧。
: 话说磕打的机械系，女生很少，但是都是猛女。当年和我同级的那届好像是60多人里面
: 就5，6个女生，后来踢的那个什么巾葛杯女足赛的时候是把两个级的女生都加起来才凑
: 够了上场人数。但是照样把我们这种女生很多的生物系打得鬼哭狼嚎抱头鼠窜。

l*r2012-02-26 08:02

26 楼

应该让你侄女跟着老李混，有前途，老李对女学生又好。

p*l2012-02-26 08:02

27 楼

哈哈！把你们生物系打得鬼哭狼嚎的那几个女生我很熟。
当年他们的那个前锋争球的时候非常猛，把你们生物系的守门员都撞哭了。而且人踢球
猛脾气也猛，冠亚军决赛的时候，因为裁判偏心跟裁判吵架，被红牌罚下了。科大女生
足球赛是半场五人制的，罚下一人他们也不过是输了个二比零。除了她，我真再没听说
过学校比赛吃红牌的人了。

【在 s******y 的大作中提到】

: 晕，你侄女既然是磕打的，出路不会太差的。你就放心吧。
: 话说磕打的机械系，女生很少，但是都是猛女。当年和我同级的那届好像是60多人里面
: 就5，6个女生，后来踢的那个什么巾葛杯女足赛的时候是把两个级的女生都加起来才凑
: 够了上场人数。但是照样把我们这种女生很多的生物系打得鬼哭狼嚎抱头鼠窜。

p*l2012-02-26 08:02

28 楼

是五人制，可是五人制一个队也得有七个人吧，数学系从来凑不齐。物理系机械系基本
百米能及格的都得上。生物系最奇怪，女生大把抓，但是比赛成绩总是不好。
我记得有一年生物系的男生还是下了大功夫的，守门员mm连侧扑都练了，可是碰上机械
系，被单刀无数次，当场哭了。

【在 g*****n 的大作中提到】

: 为啥不五人制？
: 哈哈哈，我也够坏了。

t*g2012-02-26 08:02

29 楼

你脑子里面想什么呦，你以为双飞就是3P啊？

【在 L***s 的大作中提到】

: 双飞...
: 话说专业和长相身材有什么关系？