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问一个病毒载体的问题

问一个病毒载体的问题# Biology - 生物学

a*y2012-11-09 08:11

1 楼

【以下文字转载自 MiddleSchool 讨论区】
发信人: NWWolf (西北の狼), 信区: MiddleSchool
标题: 中秋忆旧 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 23 12:34:59 2010, 美东)
发信人: LL168888 (yamatoukiyo), 信区: LosAngeles
标题: 中秋忆旧
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Sep 22 02:37:02 2010, 美东)
9/22/10
现在每到中秋好像没什么快乐的，没什么人可想，也没什么旧可怀，看看月亮还圆
，也比往日亮了许多，知道中秋近了。
但在大陆的日子里好像没看到过几次圆月，每到中秋该赏月了，想作诗了，可天总是
阴的，漫天漆黑，结果只剩下坐在屋里沙发上吃月饼了。
那时月饼种类很多，可吃着好像味道都差不多。广东则有里面塞咸鸭蛋黄或皮蛋的，
真亏他们想得出来，好像月饼是拿来喝粥的。有一种五仁儿月饼

f*n2012-11-09 08:11

2 楼

懒得去看，在这问问

C*S2012-11-09 08:11

3 楼

用病毒载体做瞬转，载体的DNA整合效率也会很高吗？我的理解是病毒载体包装成病毒
只是增强其进入细胞的效率，整合入基因组DNA的效率取决于病毒载体的序列本身。是
这样吧？
我们这里对涉及到病毒的规矩很复杂，所以想可不可以直接把载体做瞬转。要用的细胞
系挺容易做瞬转的，载体也有筛选标记。

a*y2012-11-09 08:11

4 楼

这娃又可怜又可爱，哈哈

j*x2012-11-09 08:11

5 楼

你所描述的基本概念很成问题啊，呵呵
如果你的意思是，用包装病毒（慢病毒?）所使用的表达质粒做瞬时转染，那么和普通
质粒转染没有什么区别，整合的几率很小，因为整合不仅仅靠特意性序列，更关键的是
整合酶的作用，只有包装好的慢病毒才存在这种整合机制。
直接用pLenti质粒做瞬时转染当然可以，但是在你的描述中看不出你的目的究竟是什么
？获得稳定整合的细胞系？那么还是需要筛选，而且效率并不比普通质粒更高。

【在 C**S 的大作中提到】

: 用病毒载体做瞬转，载体的DNA整合效率也会很高吗？我的理解是病毒载体包装成病毒
: 只是增强其进入细胞的效率，整合入基因组DNA的效率取决于病毒载体的序列本身。是
: 这样吧？
: 我们这里对涉及到病毒的规矩很复杂，所以想可不可以直接把载体做瞬转。要用的细胞
: 系挺容易做瞬转的，载体也有筛选标记。

S*N2012-11-09 08:11

6 楼

这老奶奶太坏了！吃不到，就说是苍蝇？
我怀疑是黑莓。

【在 a********y 的大作中提到】

: 这娃又可怜又可爱，哈哈

C*S2012-11-09 08:11

7 楼

不好意思，我对病毒的了解只限于卡通图片里面描述的：病毒把尾巴插入细胞，把DNA
注射到细胞里。
你所说的整合酶是从什么地方来的，是包装质粒吗？
我是需要做稳定整合的细胞系，载体retro和lenti的都有。

R*a2012-11-09 08:11

8 楼

那会儿有黑莓么？

【在 S*********N 的大作中提到】

:
: 这老奶奶太坏了！吃不到，就说是苍蝇？
: 我怀疑是黑莓。

j*x2012-11-09 08:11

9 楼

呵呵，卡通基本也就够了。建议找到你所用的载体系统的说明书（比如invitrogen的
pLenti系统）看看就行了，原理不复杂
做稳定整合细胞系，当然用病毒转导比质粒转染的效率高多了，BSL2级实验室就可以操
作了，没啥大不了的

DNA

【在 C**S 的大作中提到】

: 不好意思，我对病毒的了解只限于卡通图片里面描述的：病毒把尾巴插入细胞，把DNA
: 注射到细胞里。
: 你所说的整合酶是从什么地方来的，是包装质粒吗？
: 我是需要做稳定整合的细胞系，载体retro和lenti的都有。

b*a2012-11-09 08:11

10 楼

难不成这还是新物种？

【在 R***a 的大作中提到】

: 那会儿有黑莓么？

C*S2012-11-09 08:11

11 楼

谢谢, 我在前一个实验室做过病毒.新研究所规章制度很复杂。

【在 j****x 的大作中提到】

: 呵呵，卡通基本也就够了。建议找到你所用的载体系统的说明书（比如invitrogen的
: pLenti系统）看看就行了，原理不复杂
: 做稳定整合细胞系，当然用病毒转导比质粒转染的效率高多了，BSL2级实验室就可以操
: 作了，没啥大不了的
:
: DNA

R*a2012-11-09 08:11

12 楼

没人种啊

【在 b*****a 的大作中提到】

: 难不成这还是新物种？

b*o2012-11-09 08:11

13 楼

Why not? You even don't have to use viral vector for transient transfection.

b*a2012-11-09 08:11

14 楼

也许是桑椹

【在 R***a 的大作中提到】

: 没人种啊

C*S2012-11-09 08:11

15 楼

谢谢。我是担心这样筛，会不会像pcDNA质粒一样，出现好多假阳性的克隆。
刚刚想起来retro和lenti都是RNA病毒，我前面几贴的显得很白痴，让大家笑话了。

transfection.

【在 b*****o 的大作中提到】

: Why not? You even don't have to use viral vector for transient transfection.

a*y2012-11-09 08:11

16 楼

也许的的确确是苍蝇呢

【在 b*****a 的大作中提到】

: 也许是桑椹

p*e2012-11-09 08:11

17 楼

Be careful about the promoter.

【在 C**S 的大作中提到】

R*a2012-11-09 08:11

18 楼

干桑椹不会是微甜了，应该是很甜。
苍蝇没细尝过味道，不过闻起来的确是有甜味

【在 b*****a 的大作中提到】

: 也许是桑椹

h*n2012-11-09 08:11

19 楼

说说看

【在 p*****e 的大作中提到】

: Be careful about the promoter.

R*a2012-11-09 08:11

20 楼

月饼厂里刚吃饱糖的苍蝇？
倒是有可能

【在 a********y 的大作中提到】

: 也许的的确确是苍蝇呢

t*k2012-11-09 08:11

21 楼

a*y2012-11-09 08:11

22 楼

那么是不是很好笑呢

【在 R***a 的大作中提到】

: 月饼厂里刚吃饱糖的苍蝇？
: 倒是有可能

f*f2012-11-09 08:11

23 楼

病毒载体主要是转染效率高，甚至可以接近100%。但一般整合基因组的效率和普通的基
本一致，所以要构建稳定表达系的话一般要抗性筛选。
病毒载体也可以做瞬时转染后直接抗性筛选，只是初始转染效率要低些。病毒转染筛选
一样也有假阳性。
提高基因组整合效率需要特定序列，如flp-in system。

【在 C**S 的大作中提到】

b*a2012-11-09 08:11

24 楼

闻见的是蛋白质+氨水的气味吧

【在 R***a 的大作中提到】

: 干桑椹不会是微甜了，应该是很甜。
: 苍蝇没细尝过味道，不过闻起来的确是有甜味

r*e2012-11-09 08:11

25 楼

有的病毒载体不整合（比如adeno），但是能整合的（比如lenti），只要进去了就是～
100%整合，因为它们有帮助整合的元件。
你说的瞬转和筛选没问题。

【在 f*****f 的大作中提到】

: 病毒载体主要是转染效率高，甚至可以接近100%。但一般整合基因组的效率和普通的基
: 本一致，所以要构建稳定表达系的话一般要抗性筛选。
: 病毒载体也可以做瞬时转染后直接抗性筛选，只是初始转染效率要低些。病毒转染筛选
: 一样也有假阳性。
: 提高基因组整合效率需要特定序列，如flp-in system。

b*a2012-11-09 08:11

26 楼

这并不重要，重要的是学术探讨

【在 a********y 的大作中提到】

: 那么是不是很好笑呢

C*S2012-11-09 08:11

27 楼

谢谢楼上的各位。无论整合效率怎样，我反正都要试一下。

a*y2012-11-09 08:11

28 楼

学术探讨个毛啊
你们公车上书
替我讨个包子吧
就算不好笑
也给你们提供了谈资啊

【在 b*****a 的大作中提到】

: 这并不重要，重要的是学术探讨