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蛋白纯化求助

蛋白纯化求助# Biology - 生物学

o*p2013-08-19 07:08

1 楼

两本电子书(3M), 10个包子, 有兴趣可以留电邮, 记住先转包子.
1. Wiley Finance 080 Quantitative Methods in Derivatives Pricing
Publisher: Wiley; 1st edition (April 19, 2002)
Language: English
http://www.amazon.com/Quantitative-Methods-Derivatives-Pricing-
2. Wiley Finance 035 Pairs Trading-Quantitative Methods and Analysis
Publisher: Wiley (August 30, 2004)
Language: English
http://www.amazon.com/Pairs-Trading-Quantitative-Methods-Analys

e*e2013-08-19 07:08

2 楼

我的蛋白是高尔基体上膜蛋白复合体。大概４００－５００Dka。
我用NP４０溶解后，用６０％的（NH４）２SO４沉淀可以得到６０％的活性。现在
过分子筛柱。
我有个（LKB Triacryl GF２００）的柱子（１。６ x ６０cm）（１２０，０００－
１５，０００，０００）。我用Hepes buffer （１ml／min的流速。我在用Blue
Dextran （MW ２，０００，０００）和BSA 的时候，发现他们同时一起出来了。
这个柱子可以分离吗？还有别的建议吗？

e*s2013-08-19 07:08

3 楼

不是完全看懂了。
你应该是问分子筛能不能用来分离你这个大的Complex,是从cell lysate还是纯蛋白
reconstructed的complex?
如果是salt cut 后的样品直接上gel filtration, 应该是不行的。分子筛通常也极少
用于第一步的初提。
如果是pure protein重构的复合物，那就看单体的大小了。明显BSA左右的蛋白（~
60kd?）是分不开的，都在死体积里出来了。

【在 e**e 的大作中提到】

: 我的蛋白是高尔基体上膜蛋白复合体。大概４００－５００Dka。
: 我用NP４０溶解后，用６０％的（NH４）２SO４沉淀可以得到６０％的活性。现在
: 过分子筛柱。
: 我有个（LKB Triacryl GF２００）的柱子（１。６ x ６０cm）（１２０，０００－
: １５，０００，０００）。我用Hepes buffer （１ml／min的流速。我在用Blue
: Dextran （MW ２，０００，０００）和BSA 的时候，发现他们同时一起出来了。
: 这个柱子可以分离吗？还有别的建议吗？

e*e2013-08-19 07:08

4 楼

谢谢你的答复
我的蛋白复合体是植物组织中提取的天然蛋白。我测到其中的一个糖基转移酶活性很
高，所以想纯化出来做proteomics. 我的设想是cell lysate 做盐析，然后过sec gel
filtration
最后做离子交换柱。请问你有什么好的建议吗？
谢谢

e*s2013-08-19 07:08

5 楼

你的复合物是什么概念，会这么稳定？！
比如离子柱要用高盐洗脱，高盐会不会破坏你的复合物呢？
Anyway,如果是分子筛+离子的话，我会先试离子柱子，然后分子筛。
离子柱子有很好的浓缩作用，如果盐析没有对纯度有太大帮助的化，直接上离子柱子。
反过来，分子筛比较时候最后的精细纯化。你的样品体积不能太大，量不能太高。所以
，分子筛不适合当第一个柱子，样品太脏。

gel

【在 e**e 的大作中提到】

: 谢谢你的答复
: 我的蛋白复合体是植物组织中提取的天然蛋白。我测到其中的一个糖基转移酶活性很
: 高，所以想纯化出来做proteomics. 我的设想是cell lysate 做盐析，然后过sec gel
: filtration
: 最后做离子交换柱。请问你有什么好的建议吗？
: 谢谢

e*e2013-08-19 07:08

6 楼

你的建议很好。我的蛋白复合体应该是二硫键结合的。我的蛋白盐析以后用PD１０去
盐，浓缩用Amicon。活性保持的还可以。所以离子柱应该不会破坏蛋白。
请问离子柱和分子筛你有什么推荐的产品吗？