g*s
2 楼
最近实验室有人在做一个蛋白激酶,这个激酶是和cell adhesion有关,但是不是膜蛋
白,应该只是membrane associated。我们想IP这个蛋白,buffer是1% triton,后来还
加了点SDS。结果每次裂解后,发现离心后上清中蛋白非常少。也尝试过不同的PH,所
以应该也不是等电点沉淀的问题。不知道各位有遇到过类似的问题吗,有什么好的尝试
条件?非常感谢
白,应该只是membrane associated。我们想IP这个蛋白,buffer是1% triton,后来还
加了点SDS。结果每次裂解后,发现离心后上清中蛋白非常少。也尝试过不同的PH,所
以应该也不是等电点沉淀的问题。不知道各位有遇到过类似的问题吗,有什么好的尝试
条件?非常感谢
d*u
4 楼
你可以试试组份分离,把膜组份整个分离出来,这样蛋白质的相互作用不会被打断,可
能(只是可能啊)能拿到可溶的蛋白质。
能(只是可能啊)能拿到可溶的蛋白质。
B*e
5 楼
居然不是卖卖提,老邢向外交部提出严重抗议。
j*s
7 楼
居然是真的。。。 现在第一是卖盐了
s*x
10 楼
你的detergent应该可以溶膜了,沉淀主要是细胞骨架。
看看你的蛋白是不是和骨架结合吧。
还有可能是过表达 折叠不好 根本不溶。
看看免疫荧光是不是有聚集。
看看你的蛋白是不是和骨架结合吧。
还有可能是过表达 折叠不好 根本不溶。
看看免疫荧光是不是有聚集。
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