构建ZhangFeng Lab Crisper Vector 求助# Biology - 生物学
h*u
1 楼
大家在网上找工作的时候想必都看到过cybercode这个公司，而且是大篇幅的工作职位
，一看就知道是consulting公司，最近收到一个职位很match，请问有没有学长学姐之
前在他旗下工作过的？靠谱吗？十分感谢 ：）
，一看就知道是consulting公司，最近收到一个职位很match，请问有没有学长学姐之
前在他旗下工作过的？靠谱吗？十分感谢 ：）
y*c
2 楼
一年多没用了
刚才用点数定了一家，居然cancellation需要收费
以前6：00pm前都可以随便免费cancel
刚才用点数定了一家，居然cancellation需要收费
以前6：00pm前都可以随便免费cancel
p*e
3 楼
兄台，你坐在贺龙墓前干吗？你这是敌对势力啊，快到新余市委找他们书记自首吧。
@王瑞峰v：@于建嵘 于贺龙墓前坐了许久。元帅为何两把菜刀闹革命的事情广为人知。
今夏反抗城管而被判死刑。因反抗而发生悲剧的事情越来越多。革命的意义在于不断的
革新思想。让人民成为主人而不是体制下的悲剧。社会发展太快。我们需要改革派而不
是温良派。不知这墓下的元帅是否一样认同。
@王瑞峰v：@于建嵘 于贺龙墓前坐了许久。元帅为何两把菜刀闹革命的事情广为人知。
今夏反抗城管而被判死刑。因反抗而发生悲剧的事情越来越多。革命的意义在于不断的
革新思想。让人民成为主人而不是体制下的悲剧。社会发展太快。我们需要改革派而不
是温良派。不知这墓下的元帅是否一样认同。
s*t
4 楼
各位大侠，小妹正在做Zhangfeng的LentiCrisper-V2 Vector，
已经按照ZhangFeng lab的Protocol把退火的Primer Pair连接到了
Lenti-Crisper-V2 Vector上。可是怎么知道我的Insert 连到vector上去了呢？
protocol说原载体上两个BsmB1之间有2Kb insert。 我现在把我连出来的Vector
作了个酶切，发现没有这个2kb insert了，但是怎么能排除原载体自连呢？
另外，我自己的insert连进去以后要不要考虑正反向的问题？
已经按照ZhangFeng lab的Protocol把退火的Primer Pair连接到了
Lenti-Crisper-V2 Vector上。可是怎么知道我的Insert 连到vector上去了呢？
protocol说原载体上两个BsmB1之间有2Kb insert。 我现在把我连出来的Vector
作了个酶切，发现没有这个2kb insert了，但是怎么能排除原载体自连呢？
另外，我自己的insert连进去以后要不要考虑正反向的问题？
D*E
5 楼
每家酒店都有各自的CANCELLATION POLICY，没有一个叫SPG CANCELLATION POLICY的东西
【在 y****c 的大作中提到】
: 一年多没用了
: 刚才用点数定了一家，居然cancellation需要收费
: 以前6：00pm前都可以随便免费cancel
【在 y****c 的大作中提到】
: 一年多没用了
: 刚才用点数定了一家，居然cancellation需要收费
: 以前6：00pm前都可以随便免费cancel
s*r
6 楼
测序啊
【在 s*****t 的大作中提到】
: 各位大侠，小妹正在做Zhangfeng的LentiCrisper-V2 Vector，
: 已经按照ZhangFeng lab的Protocol把退火的Primer Pair连接到了
: Lenti-Crisper-V2 Vector上。可是怎么知道我的Insert 连到vector上去了呢？
: protocol说原载体上两个BsmB1之间有2Kb insert。 我现在把我连出来的Vector
: 作了个酶切，发现没有这个2kb insert了，但是怎么能排除原载体自连呢？
: 另外，我自己的insert连进去以后要不要考虑正反向的问题？
【在 s*****t 的大作中提到】
: 各位大侠，小妹正在做Zhangfeng的LentiCrisper-V2 Vector，
: 已经按照ZhangFeng lab的Protocol把退火的Primer Pair连接到了
: Lenti-Crisper-V2 Vector上。可是怎么知道我的Insert 连到vector上去了呢？
: protocol说原载体上两个BsmB1之间有2Kb insert。 我现在把我连出来的Vector
: 作了个酶切，发现没有这个2kb insert了，但是怎么能排除原载体自连呢？
: 另外，我自己的insert连进去以后要不要考虑正反向的问题？
l*n
7 楼
没变，这跟酒店有关，有的需要三天之外.
d*k
8 楼
这个vector多大，你的insert多大？这个2kb insert怎么回事？sorry，完全没明白你
的问题？
的问题？
y*c
9 楼
同样的酒店，以前订过，没记错的话cancel是不用收钱的
东西
【在 D*****E 的大作中提到】
: 每家酒店都有各自的CANCELLATION POLICY，没有一个叫SPG CANCELLATION POLICY的东西
东西
【在 D*****E 的大作中提到】
: 每家酒店都有各自的CANCELLATION POLICY，没有一个叫SPG CANCELLATION POLICY的东西
s*t
10 楼
Zhang Feng lab 给的Lenti-Crisper-v2 载体里面两个BsmB1位点之间有一个2kb
Insert。
是方便别人克隆用的，也就是只要把这个原来的２ｋｂ切掉，放入你自己退火的Ｐｒｉ
ｍｅｒＰａｉｒ就行了。我就是问连进去以后怎么鉴定？
Insert。
是方便别人克隆用的，也就是只要把这个原来的２ｋｂ切掉，放入你自己退火的Ｐｒｉ
ｍｅｒＰａｉｒ就行了。我就是问连进去以后怎么鉴定？
y*c
11 楼
看来确实这家店改了
我其他随便点了一家店，用点数定cancel还是免费的
我其他随便点了一家店，用点数定cancel还是免费的
l*y
12 楼
测序，能连进去的都是一个方向的
另外clone之后的质粒不应该再有BsmBI位点
【在 s*****t 的大作中提到】
: 各位大侠，小妹正在做Zhangfeng的LentiCrisper-V2 Vector，
: 已经按照ZhangFeng lab的Protocol把退火的Primer Pair连接到了
: Lenti-Crisper-V2 Vector上。可是怎么知道我的Insert 连到vector上去了呢？
: protocol说原载体上两个BsmB1之间有2Kb insert。 我现在把我连出来的Vector
: 作了个酶切，发现没有这个2kb insert了，但是怎么能排除原载体自连呢？
: 另外，我自己的insert连进去以后要不要考虑正反向的问题？
另外clone之后的质粒不应该再有BsmBI位点
【在 s*****t 的大作中提到】
: 各位大侠，小妹正在做Zhangfeng的LentiCrisper-V2 Vector，
: 已经按照ZhangFeng lab的Protocol把退火的Primer Pair连接到了
: Lenti-Crisper-V2 Vector上。可是怎么知道我的Insert 连到vector上去了呢？
: protocol说原载体上两个BsmB1之间有2Kb insert。 我现在把我连出来的Vector
: 作了个酶切，发现没有这个2kb insert了，但是怎么能排除原载体自连呢？
: 另外，我自己的insert连进去以后要不要考虑正反向的问题？
y*o
13 楼
没变呀
【在 y****c 的大作中提到】
: 看来确实这家店改了
: 我其他随便点了一家店，用点数定cancel还是免费的
【在 y****c 的大作中提到】
: 看来确实这家店改了
: 我其他随便点了一家店，用点数定cancel还是免费的
d*k
14 楼
能不能切完走胶看size变化，或者直接点，测序，象楼上说的？
k*o
15 楼
直接测序。
空载体的几率很低。
【在 s*****t 的大作中提到】
: 各位大侠，小妹正在做Zhangfeng的LentiCrisper-V2 Vector，
: 已经按照ZhangFeng lab的Protocol把退火的Primer Pair连接到了
: Lenti-Crisper-V2 Vector上。可是怎么知道我的Insert 连到vector上去了呢？
: protocol说原载体上两个BsmB1之间有2Kb insert。 我现在把我连出来的Vector
: 作了个酶切，发现没有这个2kb insert了，但是怎么能排除原载体自连呢？
: 另外，我自己的insert连进去以后要不要考虑正反向的问题？
空载体的几率很低。
【在 s*****t 的大作中提到】
: 各位大侠，小妹正在做Zhangfeng的LentiCrisper-V2 Vector，
: 已经按照ZhangFeng lab的Protocol把退火的Primer Pair连接到了
: Lenti-Crisper-V2 Vector上。可是怎么知道我的Insert 连到vector上去了呢？
: protocol说原载体上两个BsmB1之间有2Kb insert。 我现在把我连出来的Vector
: 作了个酶切，发现没有这个2kb insert了，但是怎么能排除原载体自连呢？
: 另外，我自己的insert连进去以后要不要考虑正反向的问题？
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