问个关于crispr/cas9的问题# Biology - 生物学
s*n
1 楼
很naive 的问题。cas9切了double strand DNA 后，留一个口，如果这个口是通过non-
homologous end joining连起来，不就又恢复到原样了? 怎么说会导致deletion/
insertion呢?
homologous end joining连起来，不就又恢复到原样了? 怎么说会导致deletion/
insertion呢?
N*e
2 楼
干这个活的酶，经常会加点减点吧？
不像T4 ligase一样吧？
不像T4 ligase一样吧？
x*6
3 楼
1. 野生型cas9切出来的break,不是平末端，有一个碱基的overhang。这种情况下，
NHEJ发生的频率在50%左右（？）。
2. 有人做了cas9突变子，只能切单链；那么联用两个切单链的cas9就能制造一个
overhang很长（>>1 bp）的break, 这总情况下NHEJ的频率~1%（?）。
https://www.addgene.org/crispr/nick/
NHEJ发生的频率在50%左右（？）。
2. 有人做了cas9突变子，只能切单链；那么联用两个切单链的cas9就能制造一个
overhang很长（>>1 bp）的break, 这总情况下NHEJ的频率~1%（?）。
https://www.addgene.org/crispr/nick/
H*0
4 楼
NHEJ是error prone的~~~~~
w*a
5 楼
肯定绝大部分修复都是恢复原样，
问题是恢复原样不就又被切了么？直到修复出错了才会停。
non-
【在 s******n 的大作中提到】
: 很naive 的问题。cas9切了double strand DNA 后，留一个口，如果这个口是通过non-
: homologous end joining连起来，不就又恢复到原样了? 怎么说会导致deletion/
: insertion呢?
问题是恢复原样不就又被切了么？直到修复出错了才会停。
non-
【在 s******n 的大作中提到】
: 很naive 的问题。cas9切了double strand DNA 后，留一个口，如果这个口是通过non-
: homologous end joining连起来，不就又恢复到原样了? 怎么说会导致deletion/
: insertion呢?
i*0
6 楼
正解。
【在 H***0 的大作中提到】
: NHEJ是error prone的~~~~~
【在 H***0 的大作中提到】
: NHEJ是error prone的~~~~~
i*0
7 楼
正解。
【在 H***0 的大作中提到】
: NHEJ是error prone的~~~~~
【在 H***0 的大作中提到】
: NHEJ是error prone的~~~~~
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