Re: 目前最常用的点突变方法是什么?# Biology - 生物学
a*e
1 楼
偶用的是two-step PCR, 把要突变的点设计在一对互补的引物上,最好在中间,第一步用
normal 5' primer+mutant 3'primer以及mutant 5'primer+normal 3'primer分别得到基
因前段和后段的PCR产物,第二步用正常的5' and 3' primers 做引物,以第一步PCR的两
个产物为模板,得到含有突变的全长DNA,再clone到质粒上拿去测序鉴定就行乐。
normal 5' primer+mutant 3'primer以及mutant 5'primer+normal 3'primer分别得到基
因前段和后段的PCR产物,第二步用正常的5' and 3' primers 做引物,以第一步PCR的两
个产物为模板,得到含有突变的全长DNA,再clone到质粒上拿去测序鉴定就行乐。