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Re: His tag的蛋白质不能纯化，救命

Re: His tag的蛋白质不能纯化，救命# Biology - 生物学

c*t2003-11-27 08:11

1 楼

你可以把你的elute和beads都跑western,看看你要得条带在哪里,然后
决定下一步如何.说不定是你的蛋白被降解了

r*o2003-11-27 08:11

2 楼

跑跑western，用anti-His-tag 抗体看看有没有蛋白。另外Ni-NTA与his-tag
的结合非常不特异。你biacore的结果其实不可信。
很难相信300mM的imidazole还洗不下来.我觉得要么是根本没有蛋白表达
，或者没结合上去。如果是后者，你检查一下你的Ni beads是不是好的。