z*e
2 楼
我和lp去年上半年分别从A州和B州搬到C州。我在A和C都有收入，老婆去年没有收入。
我们联合报税，A州和C州肯定要报，B州要报么？多谢！
我们联合报税，A州和C州肯定要报，B州要报么？多谢！
r*n
3 楼
【 以下文字转载自 Travel 讨论区 】
发信人: rfan (你这个没有心的王八蛋), 信区: Travel
标 题: 请问纽约荷兰使馆申根签证用的机票
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Oct 18 23:03:45 2011, 美东)
看到板上很多人都提到荷兰申根签的机票光有itinery还不行，要confirmed的机票（有
E-ticket number），这个要怎么搞呢？在哪里才能定到这种confirmed之后又可以
cancel的机票呢？
谢谢！！
发信人: rfan (你这个没有心的王八蛋), 信区: Travel
标 题: 请问纽约荷兰使馆申根签证用的机票
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Oct 18 23:03:45 2011, 美东)
看到板上很多人都提到荷兰申根签的机票光有itinery还不行，要confirmed的机票（有
E-ticket number），这个要怎么搞呢？在哪里才能定到这种confirmed之后又可以
cancel的机票呢？
谢谢！！
s*e
4 楼
还是要不前之前，要不之后？
s*m
5 楼
看了冥王十二宫篇,和冥王篇...真是经典啊,黄金gg们,感动死我了:)
我最喜欢(按顺序)
第一梯队:
撒加
加隆
卡妙
米罗
第二梯队:
沙加
穆
[大艾]
小艾
[童虎]
修罗
我最喜欢(按顺序)
第一梯队:
撒加
加隆
卡妙
米罗
第二梯队:
沙加
穆
[大艾]
小艾
[童虎]
修罗
f*g
6 楼
很多秋葵叶子都快没了，还有笕菜，也都被吃的七七八八，都不长了。 更悲催的就是我
种了六七包花种子，前段时间都发芽了，可是最近越看越少，我才明白长出来的嫩芽也被
吃光了。
关键是我还没看到是什么虫子，请大姐帮帮忙，看看我该用什么东西对付他们。
种了六七包花种子，前段时间都发芽了，可是最近越看越少，我才明白长出来的嫩芽也被
吃光了。
关键是我还没看到是什么虫子，请大姐帮帮忙，看看我该用什么东西对付他们。
b*t
7 楼
腾龙90mm，很多年前的手动镜头。镜头本身是1：2。附件一个接圈可以到1：1。好像新
款可以不要附件。
早晨起来，雾气很大，结了不少露水。于是拿出这个镜头玩玩。很多年没有摸过了。手
动对焦还是有点吃力。有风，树枝晃的厉害，勉强拍了几张。看似还可以。
1
2
3
款可以不要附件。
早晨起来，雾气很大，结了不少露水。于是拿出这个镜头玩玩。很多年没有摸过了。手
动对焦还是有点吃力。有风，树枝晃的厉害，勉强拍了几张。看似还可以。
1
2
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O*1
8 楼
第一个问题，什么是“重庆模式”？
中国共产党的思想根基是马克思主义。马克思政治经济学揭示了“资本”的秘密，从而
指出了无产阶级与资产阶级之间不可调和的矛盾，而解决这一矛盾的唯一办法就是“阶
级斗争”。这个阶段，从马克思主义哲学的观点看，是“肯定”。
而邓小平同志的“改革开放”政策，恰恰是对马克思政治经学的“否定”，具体表现在
“社会主义社会也可以存在市场经济”和“鼓励一部分人先富起来”的论述中。邓小平
的这种对马克思主义经济学的否定，其根本动力就是马克思经济学的原教旨主义在中国
社会主义建设过程中的失败。
通过20多年的“改革开放”，中国的经济取得了巨大的成就。但是，邓小平理论也遇到
了巨大的危机，其中最主要的就是“贫富差距”的拉大和“社会主义精神文明建设”的
失败。在这个时候，薄熙来同志提出了提倡“共同富裕”和“唱红打黑”的“重庆模式
”，其本质就是对邓小平理论的这个“否定”，又进行了一次批判吸收的“否定之否定
”。
好了，在这里我们得出了结论，“马克思主义政治经济学--邓小平理论--重庆模式”三
者之间的关系就是“肯定-否定-否定之否定”的螺旋式上升模式。
第二个问题，基督教的改革
在历史上，最先扛起耶稣基督伟大思想这面大旗的是罗马天主教。借助于古罗马帝国的
强大，为基督教在全世界范围的发展奠定了良好的基础。这个阶段，是基督教对耶稣基
督伟大思想的“肯定”。
但是，随着天主教势力的逐步扩大，已经从一个宗教团体发展成控制整个欧洲的政治势
力，并且从意识形态上与耶稣基督的早期思想渐行渐远。这个时候，一个叫马丁·路德
的人，对天主教进行了一次“否定”，也就是创立的“新教”的宗教改革。这次宗教改
革从根本上是对天主教的错误路线进行了批判和修正，从而回归到耶稣基督思想的正确
道路上来。
当下，新教的发展也遇到了瓶颈，具体表现在“创世说与现代科学发现的矛盾”和“原
教旨主义与民主思想的矛盾”。因此，我认为，很有必要对基督教进行第二次改革，那
么这次改革的思想方针就是“解放思想，实事求是，与时俱进”。具体措施应该是：1.
对西方基督教历史做适当的切割，与他们划清界限。2.尊重科学，尊重天文学发现，尊
重进化论。对创世说重新解释。3.全盘考虑中国传统文化和目前具体国情。对于圣经和
基督教在中国传播的最终解释权在中国人自己手里。4.破除信仰里的封建迷信成分。
综上所述，根据马克思主义哲学中“肯定--否定--否定之否定”的螺旋式上升发展模式
以及其在中国经济发展模式中的科学运用，我们得出了一个推论，现在的基督教必然也
必须进行第二次改革。但是我们清醒的认识到，这种变革必然会引起巨大的抵制，目前
“重庆模式”遇到的困境充分说明了这个问题。但是，我想用毛泽东同志的一句诗来表
达我的对宗教改革的态度：“敢同恶鬼争高下，不向霸王让分寸。”
中国共产党的思想根基是马克思主义。马克思政治经济学揭示了“资本”的秘密，从而
指出了无产阶级与资产阶级之间不可调和的矛盾，而解决这一矛盾的唯一办法就是“阶
级斗争”。这个阶段，从马克思主义哲学的观点看，是“肯定”。
而邓小平同志的“改革开放”政策，恰恰是对马克思政治经学的“否定”，具体表现在
“社会主义社会也可以存在市场经济”和“鼓励一部分人先富起来”的论述中。邓小平
的这种对马克思主义经济学的否定，其根本动力就是马克思经济学的原教旨主义在中国
社会主义建设过程中的失败。
通过20多年的“改革开放”，中国的经济取得了巨大的成就。但是，邓小平理论也遇到
了巨大的危机，其中最主要的就是“贫富差距”的拉大和“社会主义精神文明建设”的
失败。在这个时候，薄熙来同志提出了提倡“共同富裕”和“唱红打黑”的“重庆模式
”，其本质就是对邓小平理论的这个“否定”，又进行了一次批判吸收的“否定之否定
”。
好了，在这里我们得出了结论，“马克思主义政治经济学--邓小平理论--重庆模式”三
者之间的关系就是“肯定-否定-否定之否定”的螺旋式上升模式。
第二个问题，基督教的改革
在历史上，最先扛起耶稣基督伟大思想这面大旗的是罗马天主教。借助于古罗马帝国的
强大，为基督教在全世界范围的发展奠定了良好的基础。这个阶段，是基督教对耶稣基
督伟大思想的“肯定”。
但是，随着天主教势力的逐步扩大，已经从一个宗教团体发展成控制整个欧洲的政治势
力，并且从意识形态上与耶稣基督的早期思想渐行渐远。这个时候，一个叫马丁·路德
的人，对天主教进行了一次“否定”，也就是创立的“新教”的宗教改革。这次宗教改
革从根本上是对天主教的错误路线进行了批判和修正，从而回归到耶稣基督思想的正确
道路上来。
当下，新教的发展也遇到了瓶颈，具体表现在“创世说与现代科学发现的矛盾”和“原
教旨主义与民主思想的矛盾”。因此，我认为，很有必要对基督教进行第二次改革，那
么这次改革的思想方针就是“解放思想，实事求是，与时俱进”。具体措施应该是：1.
对西方基督教历史做适当的切割，与他们划清界限。2.尊重科学，尊重天文学发现，尊
重进化论。对创世说重新解释。3.全盘考虑中国传统文化和目前具体国情。对于圣经和
基督教在中国传播的最终解释权在中国人自己手里。4.破除信仰里的封建迷信成分。
综上所述，根据马克思主义哲学中“肯定--否定--否定之否定”的螺旋式上升发展模式
以及其在中国经济发展模式中的科学运用，我们得出了一个推论，现在的基督教必然也
必须进行第二次改革。但是我们清醒的认识到，这种变革必然会引起巨大的抵制，目前
“重庆模式”遇到的困境充分说明了这个问题。但是，我想用毛泽东同志的一句诗来表
达我的对宗教改革的态度：“敢同恶鬼争高下，不向霸王让分寸。”
n*1
9 楼
打电话还是online chat?
算device upgrade还是就是免费给你换个新的啊
算device upgrade还是就是免费给你换个新的啊
f*e
10 楼
用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
两倍差异么？
两倍差异么？
q*p
11 楼
没人理啊。。。自己顶下～
P*1
12 楼
看B州规定
l*a
13 楼
那我7/31的pd会很郁闷
s*x
14 楼
大艾和童虎被加了中括号，有什么说法？
【在 s******m 的大作中提到】
: 看了冥王十二宫篇,和冥王篇...真是经典啊,黄金gg们,感动死我了:)
: 我最喜欢(按顺序)
: 第一梯队:
: 撒加
: 加隆
: 卡妙
: 米罗
: 第二梯队:
: 沙加
: 穆
【在 s******m 的大作中提到】
: 看了冥王十二宫篇,和冥王篇...真是经典啊,黄金gg们,感动死我了:)
: 我最喜欢(按顺序)
: 第一梯队:
: 撒加
: 加隆
: 卡妙
: 米罗
: 第二梯队:
: 沙加
: 穆
g*e
15 楼
最可能的是鼻涕虫和蜗牛，都是晚上出来。打电筒确认一下，手抓或者去home depot或
lowes买sluggo/slug bait, 有机农药，可以放心用。
lowes买sluggo/slug bait, 有机农药，可以放心用。
i*t
16 楼
佷好啊。第二张很赞
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.7
【在 b*****t 的大作中提到】
: 腾龙90mm，很多年前的手动镜头。镜头本身是1：2。附件一个接圈可以到1：1。好像新
: 款可以不要附件。
: 早晨起来，雾气很大，结了不少露水。于是拿出这个镜头玩玩。很多年没有摸过了。手
: 动对焦还是有点吃力。有风，树枝晃的厉害，勉强拍了几张。看似还可以。
: 1
: 2
: 3
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.7
【在 b*****t 的大作中提到】
: 腾龙90mm，很多年前的手动镜头。镜头本身是1：2。附件一个接圈可以到1：1。好像新
: 款可以不要附件。
: 早晨起来，雾气很大，结了不少露水。于是拿出这个镜头玩玩。很多年没有摸过了。手
: 动对焦还是有点吃力。有风，树枝晃的厉害，勉强拍了几张。看似还可以。
: 1
: 2
: 3
s*y
17 楼
Puke～～～马克思一边自己家里用着slave,一边揭示“资本“的秘密。
他的理论有很多问题，最大的问题在于把人群分成非常机械的两类，却忘了：1）人是
个体；2）人可以从一个阶层向另一个阶层移动；3）既然阶层都不是固定的，那就没有
什么“不可调和的矛盾“；4）解决问题永远都不会只有“斗争“这“唯一办法“。
如果我生在文革年代，我一定会死得很惨。幸好幸好，我来到地球的时候，文革早就结
束了～～～～
中国共产党的思想根基是马克思主义。马克思政治经济学揭示了“资本”的秘密，从而
指出了无产阶级与资产阶级之间不可调和的矛盾，而解决这一矛盾的唯一办法就是“阶
级斗争”。
【在 O******1 的大作中提到】
: 第一个问题，什么是“重庆模式”？
: 中国共产党的思想根基是马克思主义。马克思政治经济学揭示了“资本”的秘密，从而
: 指出了无产阶级与资产阶级之间不可调和的矛盾，而解决这一矛盾的唯一办法就是“阶
: 级斗争”。这个阶段，从马克思主义哲学的观点看，是“肯定”。
: 而邓小平同志的“改革开放”政策，恰恰是对马克思政治经学的“否定”，具体表现在
: “社会主义社会也可以存在市场经济”和“鼓励一部分人先富起来”的论述中。邓小平
: 的这种对马克思主义经济学的否定，其根本动力就是马克思经济学的原教旨主义在中国
: 社会主义建设过程中的失败。
: 通过20多年的“改革开放”，中国的经济取得了巨大的成就。但是，邓小平理论也遇到
: 了巨大的危机，其中最主要的就是“贫富差距”的拉大和“社会主义精神文明建设”的
他的理论有很多问题，最大的问题在于把人群分成非常机械的两类，却忘了：1）人是
个体；2）人可以从一个阶层向另一个阶层移动；3）既然阶层都不是固定的，那就没有
什么“不可调和的矛盾“；4）解决问题永远都不会只有“斗争“这“唯一办法“。
如果我生在文革年代，我一定会死得很惨。幸好幸好，我来到地球的时候，文革早就结
束了～～～～
中国共产党的思想根基是马克思主义。马克思政治经济学揭示了“资本”的秘密，从而
指出了无产阶级与资产阶级之间不可调和的矛盾，而解决这一矛盾的唯一办法就是“阶
级斗争”。
【在 O******1 的大作中提到】
: 第一个问题，什么是“重庆模式”？
: 中国共产党的思想根基是马克思主义。马克思政治经济学揭示了“资本”的秘密，从而
: 指出了无产阶级与资产阶级之间不可调和的矛盾，而解决这一矛盾的唯一办法就是“阶
: 级斗争”。这个阶段，从马克思主义哲学的观点看，是“肯定”。
: 而邓小平同志的“改革开放”政策，恰恰是对马克思政治经学的“否定”，具体表现在
: “社会主义社会也可以存在市场经济”和“鼓励一部分人先富起来”的论述中。邓小平
: 的这种对马克思主义经济学的否定，其根本动力就是马克思经济学的原教旨主义在中国
: 社会主义建设过程中的失败。
: 通过20多年的“改革开放”，中国的经济取得了巨大的成就。但是，邓小平理论也遇到
: 了巨大的危机，其中最主要的就是“贫富差距”的拉大和“社会主义精神文明建设”的
t*o
18 楼
co-curious...
【在 n****1 的大作中提到】
: 打电话还是online chat?
: 算device upgrade还是就是免费给你换个新的啊
【在 n****1 的大作中提到】
: 打电话还是online chat?
: 算device upgrade还是就是免费给你换个新的啊
p*n
19 楼
能
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
l*l
20 楼
真那样的话再多等1个月也就到了吧？这个月的pd可比你早大半年呢，这么想也还挺幸
运的。
【在 l**a 的大作中提到】
: 那我7/31的pd会很郁闷
运的。
【在 l**a 的大作中提到】
: 那我7/31的pd会很郁闷
s*m
21 楼
内容相对较少吧,比较难表现他俩的方方面面...我本来想把他们排在更前面,怕对不起
沙加和穆啊...
你喜欢谁呀? 拍拍序:)
【在 s**x 的大作中提到】
: 大艾和童虎被加了中括号，有什么说法？
沙加和穆啊...
你喜欢谁呀? 拍拍序:)
【在 s**x 的大作中提到】
: 大艾和童虎被加了中括号，有什么说法？
f*g
22 楼
前两天看了你的回帖，我马上买了有机农药，喷上了，好像没有被继续吃。
这两天长周末，我就计划抓鼻涕虫，抓了好多。除了草，松了土，希望剩下的苗能好好
活着，哈哈。
多谢多谢。
【在 g***e 的大作中提到】
: 最可能的是鼻涕虫和蜗牛，都是晚上出来。打电筒确认一下，手抓或者去home depot或
: lowes买sluggo/slug bait, 有机农药，可以放心用。
这两天长周末，我就计划抓鼻涕虫，抓了好多。除了草，松了土，希望剩下的苗能好好
活着，哈哈。
多谢多谢。
【在 g***e 的大作中提到】
: 最可能的是鼻涕虫和蜗牛，都是晚上出来。打电筒确认一下，手抓或者去home depot或
: lowes买sluggo/slug bait, 有机农药，可以放心用。
p*e
23 楼
有没有打灯?
s*y
24 楼
LOL，太欢乐了～～～
扶墙而出ing...
耶稣基督伟大思想这面大旗
【在 O******1 的大作中提到】
: 第一个问题，什么是“重庆模式”？
: 中国共产党的思想根基是马克思主义。马克思政治经济学揭示了“资本”的秘密，从而
: 指出了无产阶级与资产阶级之间不可调和的矛盾，而解决这一矛盾的唯一办法就是“阶
: 级斗争”。这个阶段，从马克思主义哲学的观点看，是“肯定”。
: 而邓小平同志的“改革开放”政策，恰恰是对马克思政治经学的“否定”，具体表现在
: “社会主义社会也可以存在市场经济”和“鼓励一部分人先富起来”的论述中。邓小平
: 的这种对马克思主义经济学的否定，其根本动力就是马克思经济学的原教旨主义在中国
: 社会主义建设过程中的失败。
: 通过20多年的“改革开放”，中国的经济取得了巨大的成就。但是，邓小平理论也遇到
: 了巨大的危机，其中最主要的就是“贫富差距”的拉大和“社会主义精神文明建设”的
扶墙而出ing...
耶稣基督伟大思想这面大旗
【在 O******1 的大作中提到】
: 第一个问题，什么是“重庆模式”？
: 中国共产党的思想根基是马克思主义。马克思政治经济学揭示了“资本”的秘密，从而
: 指出了无产阶级与资产阶级之间不可调和的矛盾，而解决这一矛盾的唯一办法就是“阶
: 级斗争”。这个阶段，从马克思主义哲学的观点看，是“肯定”。
: 而邓小平同志的“改革开放”政策，恰恰是对马克思政治经学的“否定”，具体表现在
: “社会主义社会也可以存在市场经济”和“鼓励一部分人先富起来”的论述中。邓小平
: 的这种对马克思主义经济学的否定，其根本动力就是马克思经济学的原教旨主义在中国
: 社会主义建设过程中的失败。
: 通过20多年的“改革开放”，中国的经济取得了巨大的成就。但是，邓小平理论也遇到
: 了巨大的危机，其中最主要的就是“贫富差距”的拉大和“社会主义精神文明建设”的
I*a
25 楼
可以吧，
搞好内参，
上样合适，
搞好内参，
上样合适，
m*r
26 楼
我觉得有这个可能
s*x
27 楼
嗯，你选的基本都是athena exclamation的对阵双方啊，不错。
我想了一下，不分顺序的话，穆 撒加 沙加。此外，小艾也很好。
【在 s******m 的大作中提到】
: 内容相对较少吧,比较难表现他俩的方方面面...我本来想把他们排在更前面,怕对不起
: 沙加和穆啊...
: 你喜欢谁呀? 拍拍序:)
我想了一下，不分顺序的话，穆 撒加 沙加。此外，小艾也很好。
【在 s******m 的大作中提到】
: 内容相对较少吧,比较难表现他俩的方方面面...我本来想把他们排在更前面,怕对不起
: 沙加和穆啊...
: 你喜欢谁呀? 拍拍序:)
s*d
28 楼
同问=。=
【在 p***e 的大作中提到】
: 有没有打灯?
【在 p***e 的大作中提到】
: 有没有打灯?
p*t
29 楼
我觉得lz其实是想start他自己的基督教分支，我建议可以起名为The Communist
Church of Christ.
【在 s****y 的大作中提到】
: LOL，太欢乐了～～～
: 扶墙而出ing...
:
: 耶稣基督伟大思想这面大旗
Church of Christ.
【在 s****y 的大作中提到】
: LOL，太欢乐了～～～
: 扶墙而出ing...
:
: 耶稣基督伟大思想这面大旗
p*i
30 楼
顶楼上
不放心就多跑几次，再QUANTIFY一下
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
不放心就多跑几次，再QUANTIFY一下
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
s*m
31 楼
你最喜欢穆啊! :) 好多人喜欢他,看来我喜欢复杂的,狠的,或者表面冷酷但隐藏很深感情的,哈哈哈...
他们是都太好了!太难选择了...
【在 s**x 的大作中提到】
: 嗯，你选的基本都是athena exclamation的对阵双方啊，不错。
: 我想了一下，不分顺序的话，穆 撒加 沙加。此外，小艾也很好。
他们是都太好了!太难选择了...
【在 s**x 的大作中提到】
: 嗯，你选的基本都是athena exclamation的对阵双方啊，不错。
: 我想了一下，不分顺序的话，穆 撒加 沙加。此外，小艾也很好。
b*t
32 楼
干嘛要打灯？
【在 p***e 的大作中提到】
: 有没有打灯?
【在 p***e 的大作中提到】
: 有没有打灯?
s*y
33 楼
太赞了～～～
阿桃，看这里我的回复，心有灵犀是不是？ ：P
http://www.mitbbs.com/article_t/Belief/31353593.html
【在 p*****t 的大作中提到】
: 我觉得lz其实是想start他自己的基督教分支，我建议可以起名为The Communist
: Church of Christ.
阿桃，看这里我的回复，心有灵犀是不是？ ：P
http://www.mitbbs.com/article_t/Belief/31353593.html
【在 p*****t 的大作中提到】
: 我觉得lz其实是想start他自己的基督教分支，我建议可以起名为The Communist
: Church of Christ.
a*n
34 楼
两杯的差异很容易看到的
不信你可以同样的样品上一倍和两杯的量试试
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
不信你可以同样的样品上一倍和两杯的量试试
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
s*x
35 楼
我没有最喜欢穆，穆尽管实力只是中上，但有准教皇的气质，关键时刻也能独当一面，
尽管性别不明，但也是很不错的。
当然，相比而言，撒加和沙加更属我意。
如果你问最不喜欢谁，想必就要容易一些了吧。。。
【在 s******m 的大作中提到】
: 你最喜欢穆啊! :) 好多人喜欢他,看来我喜欢复杂的,狠的,或者表面冷酷但隐藏很深感情的,哈哈哈...
: 他们是都太好了!太难选择了...
尽管性别不明，但也是很不错的。
当然，相比而言，撒加和沙加更属我意。
如果你问最不喜欢谁，想必就要容易一些了吧。。。
【在 s******m 的大作中提到】
: 你最喜欢穆啊! :) 好多人喜欢他,看来我喜欢复杂的,狠的,或者表面冷酷但隐藏很深感情的,哈哈哈...
: 他们是都太好了!太难选择了...
b*t
36 楼
好像画质还行。
【在 i*****t 的大作中提到】
: 佷好啊。第二张很赞
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.7
【在 i*****t 的大作中提到】
: 佷好啊。第二张很赞
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.7
E*m
37 楼
精辟！
【在 p*****t 的大作中提到】
: 我觉得lz其实是想start他自己的基督教分支，我建议可以起名为The Communist
: Church of Christ.
f*e
38 楼
谢谢楼上的！！ 对western不熟，听这么一说，有信心多了。
【在 a*****n 的大作中提到】
: 两杯的差异很容易看到的
: 不信你可以同样的样品上一倍和两杯的量试试
【在 a*****n 的大作中提到】
: 两杯的差异很容易看到的
: 不信你可以同样的样品上一倍和两杯的量试试
w*w
39 楼
性別不明？
居然喜歡撒加，哼哼
【在 s**x 的大作中提到】
: 我没有最喜欢穆，穆尽管实力只是中上，但有准教皇的气质，关键时刻也能独当一面，
: 尽管性别不明，但也是很不错的。
: 当然，相比而言，撒加和沙加更属我意。
: 如果你问最不喜欢谁，想必就要容易一些了吧。。。
居然喜歡撒加，哼哼
【在 s**x 的大作中提到】
: 我没有最喜欢穆，穆尽管实力只是中上，但有准教皇的气质，关键时刻也能独当一面，
: 尽管性别不明，但也是很不错的。
: 当然，相比而言，撒加和沙加更属我意。
: 如果你问最不喜欢谁，想必就要容易一些了吧。。。
F*s
40 楼
很赞很赞！
手持微距还没打灯，用光用得很好啊
两点想法
第一张能不能竖着构图，露出整个芽尖/花蕾，加上一点茎，在上方留出一点空，给人
一点向上生长的空间感。
第二张焦点放在后边的叶子上，前面的叶子模糊。而人的着眼点一般都是在前面，习惯
前面清楚，后边模糊的画面。看这张照片的时候要调整一下着眼点，稍微有点分散注意
力。当然，也许你是有意这样，也是可以的。
【在 b*****t 的大作中提到】
: 腾龙90mm，很多年前的手动镜头。镜头本身是1：2。附件一个接圈可以到1：1。好像新
: 款可以不要附件。
: 早晨起来，雾气很大，结了不少露水。于是拿出这个镜头玩玩。很多年没有摸过了。手
: 动对焦还是有点吃力。有风，树枝晃的厉害，勉强拍了几张。看似还可以。
: 1
: 2
: 3
手持微距还没打灯，用光用得很好啊
两点想法
第一张能不能竖着构图，露出整个芽尖/花蕾，加上一点茎，在上方留出一点空，给人
一点向上生长的空间感。
第二张焦点放在后边的叶子上，前面的叶子模糊。而人的着眼点一般都是在前面，习惯
前面清楚，后边模糊的画面。看这张照片的时候要调整一下着眼点，稍微有点分散注意
力。当然，也许你是有意这样，也是可以的。
【在 b*****t 的大作中提到】
: 腾龙90mm，很多年前的手动镜头。镜头本身是1：2。附件一个接圈可以到1：1。好像新
: 款可以不要附件。
: 早晨起来，雾气很大，结了不少露水。于是拿出这个镜头玩玩。很多年没有摸过了。手
: 动对焦还是有点吃力。有风，树枝晃的厉害，勉强拍了几张。看似还可以。
: 1
: 2
: 3
p*i
41 楼
用什么Mass spec测出来差不多2倍差异?
mass spect一般很难定量吧，除了特殊标记以外
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
mass spect一般很难定量吧，除了特殊标记以外
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
s*m
42 楼
我自言自语最让我感动的部分吧...版主不要封我:)
史昂和童虎告别的时候,很想和他聊聊,可是12小时的生命就到了,于是说都等了243年,
再等一些时候又怎样呢...(特别喜欢这个背景音乐)
加隆说: 如果伤害了敌人也算是罪过的话，等清除了世上的一切邪恶，再接受神的裁决
吧！在这之前只有战斗！ (加隆真够彪悍啊...)
加隆脱掉双子圣衣,玉石俱焚. (again...)
撒加三人化成灰的时候,最后还说,雅典娜,我的女神.
两个三人组AE对打的时候...然后冰河和子龙说相信卡妙和修罗的时候.
沙加死的时候,其实我更心疼这边三人被剥夺五感,忍辱负重...
沙加和佛的对话,沙加小时候太可爱了.
黄金圣衣从圣域飞出,去冥界的时候.
叹息之墙...
米罗打了加隆之后,说这里有的只是双子座的黄金圣斗士加隆的时候. (好拽啊...)
瞬掐着自己的脖子,让哥哥杀死附身哈迪斯的时候,这个是我最没预料到的.
撒加在双子宫,一拳打到教皇宫的时候,够震撼.
卡妙死的时候...
撒加自尽在雅典娜身边.
史昂和童虎告别的时候,很想和他聊聊,可是12小时的生命就到了,于是说都等了243年,
再等一些时候又怎样呢...(特别喜欢这个背景音乐)
加隆说: 如果伤害了敌人也算是罪过的话，等清除了世上的一切邪恶，再接受神的裁决
吧！在这之前只有战斗！ (加隆真够彪悍啊...)
加隆脱掉双子圣衣,玉石俱焚. (again...)
撒加三人化成灰的时候,最后还说,雅典娜,我的女神.
两个三人组AE对打的时候...然后冰河和子龙说相信卡妙和修罗的时候.
沙加死的时候,其实我更心疼这边三人被剥夺五感,忍辱负重...
沙加和佛的对话,沙加小时候太可爱了.
黄金圣衣从圣域飞出,去冥界的时候.
叹息之墙...
米罗打了加隆之后,说这里有的只是双子座的黄金圣斗士加隆的时候. (好拽啊...)
瞬掐着自己的脖子,让哥哥杀死附身哈迪斯的时候,这个是我最没预料到的.
撒加在双子宫,一拳打到教皇宫的时候,够震撼.
卡妙死的时候...
撒加自尽在雅典娜身边.
b*t
43 楼
你说的都属实。
第一张懒了，其实我也想拍个竖的。不知道为啥没拍。
第二张比较纠结。我也和你的想法一样，一般不太喜欢前景是虚的。最后这样拍，主要
是因为看到右侧的水珠和左侧的树叶基本在同一焦平面，并且光线还好。
这种东西要有耐心，耐心，耐心。
【在 F******s 的大作中提到】
: 很赞很赞！
: 手持微距还没打灯，用光用得很好啊
: 两点想法
: 第一张能不能竖着构图，露出整个芽尖/花蕾，加上一点茎，在上方留出一点空，给人
: 一点向上生长的空间感。
: 第二张焦点放在后边的叶子上，前面的叶子模糊。而人的着眼点一般都是在前面，习惯
: 前面清楚，后边模糊的画面。看这张照片的时候要调整一下着眼点，稍微有点分散注意
: 力。当然，也许你是有意这样，也是可以的。
第一张懒了，其实我也想拍个竖的。不知道为啥没拍。
第二张比较纠结。我也和你的想法一样，一般不太喜欢前景是虚的。最后这样拍，主要
是因为看到右侧的水珠和左侧的树叶基本在同一焦平面，并且光线还好。
这种东西要有耐心，耐心，耐心。
【在 F******s 的大作中提到】
: 很赞很赞！
: 手持微距还没打灯，用光用得很好啊
: 两点想法
: 第一张能不能竖着构图，露出整个芽尖/花蕾，加上一点茎，在上方留出一点空，给人
: 一点向上生长的空间感。
: 第二张焦点放在后边的叶子上，前面的叶子模糊。而人的着眼点一般都是在前面，习惯
: 前面清楚，后边模糊的画面。看这张照片的时候要调整一下着眼点，稍微有点分散注意
: 力。当然，也许你是有意这样，也是可以的。
K*S
44 楼
hehe, this is a very interesting issue. And lots of debating is going on on
both sides.
biology ppl always want to confirm mass spec result w/ western blot. Seems
like MS still have a long way to go to convince biology ppl that the MS
result is pretty confident.
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
both sides.
biology ppl always want to confirm mass spec result w/ western blot. Seems
like MS still have a long way to go to convince biology ppl that the MS
result is pretty confident.
【在 f*********e 的大作中提到】
: 用Mass spec测出来差不多2倍差异，想用western验证，可是我不知道western能分辨出
: 两倍差异么？
s*m
45 楼
光顾惊讶了,才看到不分顺序...:)最不喜欢螃蟹吧:)
【在 s**x 的大作中提到】
: 我没有最喜欢穆，穆尽管实力只是中上，但有准教皇的气质，关键时刻也能独当一面，
: 尽管性别不明，但也是很不错的。
: 当然，相比而言，撒加和沙加更属我意。
: 如果你问最不喜欢谁，想必就要容易一些了吧。。。
【在 s**x 的大作中提到】
: 我没有最喜欢穆，穆尽管实力只是中上，但有准教皇的气质，关键时刻也能独当一面，
: 尽管性别不明，但也是很不错的。
: 当然，相比而言，撒加和沙加更属我意。
: 如果你问最不喜欢谁，想必就要容易一些了吧。。。
i*f
46 楼
而且需要好的脚架和球头。。。
【在 b*****t 的大作中提到】
: 你说的都属实。
: 第一张懒了，其实我也想拍个竖的。不知道为啥没拍。
: 第二张比较纠结。我也和你的想法一样，一般不太喜欢前景是虚的。最后这样拍，主要
: 是因为看到右侧的水珠和左侧的树叶基本在同一焦平面，并且光线还好。
: 这种东西要有耐心，耐心，耐心。
【在 b*****t 的大作中提到】
: 你说的都属实。
: 第一张懒了，其实我也想拍个竖的。不知道为啥没拍。
: 第二张比较纠结。我也和你的想法一样，一般不太喜欢前景是虚的。最后这样拍，主要
: 是因为看到右侧的水珠和左侧的树叶基本在同一焦平面，并且光线还好。
: 这种东西要有耐心，耐心，耐心。
f*e
47 楼
不标记，关看peak area 和 spectral count都可以大概测出。虽然标记后会准一些，
但是也有很多不确定性。不标记，label free测，确实测不准差几倍，但是有无差异还
是可以看出来的。很多时候绝对差多少倍没什么意义，只要有差异就行了。
【在 p**i 的大作中提到】
: 用什么Mass spec测出来差不多2倍差异?
: mass spect一般很难定量吧，除了特殊标记以外
但是也有很多不确定性。不标记，label free测，确实测不准差几倍，但是有无差异还
是可以看出来的。很多时候绝对差多少倍没什么意义，只要有差异就行了。
【在 p**i 的大作中提到】
: 用什么Mass spec测出来差不多2倍差异?
: mass spect一般很难定量吧，除了特殊标记以外
m*l
48 楼
沙加。
没有排序，就只喜欢这一个。
没有排序，就只喜欢这一个。
b*t
49 楼
这个很重要。稳是第一位的。
【在 i***f 的大作中提到】
: 而且需要好的脚架和球头。。。
【在 i***f 的大作中提到】
: 而且需要好的脚架和球头。。。
f*e
50 楼
赫赫，确实阿。我觉得western确实应该是最准的golden standard. 只是sensitivity
和 high throughput上面差很多。又太依赖抗体了。
一般来说ms和western的结果还是挺一致的，至少差异方向是一致的。
on
【在 K******S 的大作中提到】
: hehe, this is a very interesting issue. And lots of debating is going on on
: both sides.
: biology ppl always want to confirm mass spec result w/ western blot. Seems
: like MS still have a long way to go to convince biology ppl that the MS
: result is pretty confident.
和 high throughput上面差很多。又太依赖抗体了。
一般来说ms和western的结果还是挺一致的，至少差异方向是一致的。
on
【在 K******S 的大作中提到】
: hehe, this is a very interesting issue. And lots of debating is going on on
: both sides.
: biology ppl always want to confirm mass spec result w/ western blot. Seems
: like MS still have a long way to go to convince biology ppl that the MS
: result is pretty confident.
a*2
51 楼
沙加
多cool，多有型，多内敛，死都那么唯美
多cool，多有型，多内敛，死都那么唯美
b*g
52 楼
我感觉bio ppl 真正懂MS的不过，至少现在看来，很多人是会用仪器，
但是知其然不知其所以然
不知道究竟哪种MS仪器，哪种MS方法适合准确定量
对他们来说WB 便宜简单直观，而且熟悉，很有信心
on
【在 K******S 的大作中提到】
: hehe, this is a very interesting issue. And lots of debating is going on on
: both sides.
: biology ppl always want to confirm mass spec result w/ western blot. Seems
: like MS still have a long way to go to convince biology ppl that the MS
: result is pretty confident.
但是知其然不知其所以然
不知道究竟哪种MS仪器，哪种MS方法适合准确定量
对他们来说WB 便宜简单直观，而且熟悉，很有信心
on
【在 K******S 的大作中提到】
: hehe, this is a very interesting issue. And lots of debating is going on on
: both sides.
: biology ppl always want to confirm mass spec result w/ western blot. Seems
: like MS still have a long way to go to convince biology ppl that the MS
: result is pretty confident.
p*e
53 楼
我的实力排名：
沙加，童虎，撒加，大艾，穆，小艾，卡妙，米罗，修罗，阿鲁迪巴，阿布罗迪，迪马
斯克
喜欢程度排名：
撒加，沙加，穆，小艾，卡妙，大艾，童虎，米罗，阿布罗迪，修罗，阿鲁迪巴，迪马
斯克
撒加沙加谁排第一难以取舍。沙加似佛似仙，最唯美，最神。撒加亦正亦邪，最阳刚，
最魔。
【在 s******m 的大作中提到】
: 看了冥王十二宫篇,和冥王篇...真是经典啊,黄金gg们,感动死我了:)
: 我最喜欢(按顺序)
: 第一梯队:
: 撒加
: 加隆
: 卡妙
: 米罗
: 第二梯队:
: 沙加
: 穆
沙加，童虎，撒加，大艾，穆，小艾，卡妙，米罗，修罗，阿鲁迪巴，阿布罗迪，迪马
斯克
喜欢程度排名：
撒加，沙加，穆，小艾，卡妙，大艾，童虎，米罗，阿布罗迪，修罗，阿鲁迪巴，迪马
斯克
撒加沙加谁排第一难以取舍。沙加似佛似仙，最唯美，最神。撒加亦正亦邪，最阳刚，
最魔。
【在 s******m 的大作中提到】
: 看了冥王十二宫篇,和冥王篇...真是经典啊,黄金gg们,感动死我了:)
: 我最喜欢(按顺序)
: 第一梯队:
: 撒加
: 加隆
: 卡妙
: 米罗
: 第二梯队:
: 沙加
: 穆
h*n
54 楼
能不能问一下, 你的MS是什么方法(电离和检测方法). MS仪器定量准确的不太多.
w*w
55 楼
擁抱minil，薯仔，我們都是沙加fans～～
h*n
56 楼
即使学化学的, 很懂MS的也不太多.
我以前学有机, 觉得已经基本上懂MS了, 后来很多问题问了LD(学MS的), 才知道差距啊.
【在 b*******g 的大作中提到】
: 我感觉bio ppl 真正懂MS的不过，至少现在看来，很多人是会用仪器，
: 但是知其然不知其所以然
: 不知道究竟哪种MS仪器，哪种MS方法适合准确定量
: 对他们来说WB 便宜简单直观，而且熟悉，很有信心
:
: on
我以前学有机, 觉得已经基本上懂MS了, 后来很多问题问了LD(学MS的), 才知道差距啊.
【在 b*******g 的大作中提到】
: 我感觉bio ppl 真正懂MS的不过，至少现在看来，很多人是会用仪器，
: 但是知其然不知其所以然
: 不知道究竟哪种MS仪器，哪种MS方法适合准确定量
: 对他们来说WB 便宜简单直观，而且熟悉，很有信心
:
: on
s*m
57 楼
擁抱petabyte，我們都是撒加fans～～
b*g
58 楼
lol
最搞笑的是学有机的，以为MS就是测个分子量。。。。
能做定量的MS及方法太多了，取决于你的样品，也许很简单也许很难
药厂招那么多学LCMS是有原因跟用处的
啊.
【在 h********n 的大作中提到】
: 即使学化学的, 很懂MS的也不太多.
: 我以前学有机, 觉得已经基本上懂MS了, 后来很多问题问了LD(学MS的), 才知道差距啊.
最搞笑的是学有机的，以为MS就是测个分子量。。。。
能做定量的MS及方法太多了，取决于你的样品，也许很简单也许很难
药厂招那么多学LCMS是有原因跟用处的
啊.
【在 h********n 的大作中提到】
: 即使学化学的, 很懂MS的也不太多.
: 我以前学有机, 觉得已经基本上懂MS了, 后来很多问题问了LD(学MS的), 才知道差距啊.
a*2
59 楼
擁抱，我們都是撒加fans！
O*e
60 楼
很多人是要看到WESTERN的带才放心的。MS都做出来了，WB不可能做不出来。
如果真做不出来了，MS的结果当然要打个问号。
如果真做不出来了，MS的结果当然要打个问号。
p*e
61 楼
喜欢阳刚冷酷坏坏牛逼的，就只剩撒加了。要是喜欢阴柔男，其实穆也不错，可以当
alternative。
【在 s******m 的大作中提到】
: 擁抱petabyte，我們都是撒加fans～～
alternative。
【在 s******m 的大作中提到】
: 擁抱petabyte，我們都是撒加fans～～
s*t
62 楼
根据我们实验室100多个蛋白western验证MS结果的经验看，在抗体好用的情况下，2倍
MS差异western的成功率低于30%。楼主慎重。MS要比抗体灵敏太多！
MS差异western的成功率低于30%。楼主慎重。MS要比抗体灵敏太多！
w*w
63 楼
你到底是沙加fans還是撒加fans啊？ 不要入錯fans club啊
【在 a********2 的大作中提到】
: 擁抱，我們都是撒加fans！
【在 a********2 的大作中提到】
: 擁抱，我們都是撒加fans！
f*e
64 楼
ESI-Ion Trap
我前面贴也说了，目的不是测差几倍，而是看有无差异，2倍，3倍，5倍，无太大意义。
【在 h********n 的大作中提到】
: 能不能问一下, 你的MS是什么方法(电离和检测方法). MS仪器定量准确的不太多.
我前面贴也说了，目的不是测差几倍，而是看有无差异，2倍，3倍，5倍，无太大意义。
【在 h********n 的大作中提到】
: 能不能问一下, 你的MS是什么方法(电离和检测方法). MS仪器定量准确的不太多.
h*c
65 楼
原来上中学看得时候最喜欢的是穆，米罗和卡妙，我还曾手工绘过一张卡妙衣袂飘飘带
着忧郁眼神仰望天空的图，由于五小强里面最喜欢冰河，所以那时候那时候真的很迷他.
后来打冥王了以后，比较迷撒加和童虎（庐山百龙霸太nb了），然后是史昂和沙加
着忧郁眼神仰望天空的图，由于五小强里面最喜欢冰河，所以那时候那时候真的很迷他.
后来打冥王了以后，比较迷撒加和童虎（庐山百龙霸太nb了），然后是史昂和沙加
f*e
66 楼
赫赫，100多个蛋白，你老板真能放血阿！！ 买那么多抗体，$300 x 100 = $30,000 ?
现在funding不好，所以买哪个抗体就很小心。但我也听说ms其实缩小了差异，所以wb
可能也能验证出来。
【在 s*****t 的大作中提到】
: 根据我们实验室100多个蛋白western验证MS结果的经验看，在抗体好用的情况下，2倍
: MS差异western的成功率低于30%。楼主慎重。MS要比抗体灵敏太多！
现在funding不好，所以买哪个抗体就很小心。但我也听说ms其实缩小了差异，所以wb
可能也能验证出来。
【在 s*****t 的大作中提到】
: 根据我们实验室100多个蛋白western验证MS结果的经验看，在抗体好用的情况下，2倍
: MS差异western的成功率低于30%。楼主慎重。MS要比抗体灵敏太多！
q*1
67 楼
支持 穆 和 童虎，他们俩谁当导师，学生的日子都不会太差。
l*y
68 楼
They could use tagged proteins.
but i agree MS is as good (or as bad) as WB.
?
wb
【在 f*********e 的大作中提到】
: 赫赫，100多个蛋白，你老板真能放血阿！！ 买那么多抗体，$300 x 100 = $30,000 ?
: 现在funding不好，所以买哪个抗体就很小心。但我也听说ms其实缩小了差异，所以wb
: 可能也能验证出来。
but i agree MS is as good (or as bad) as WB.
?
wb
【在 f*********e 的大作中提到】
: 赫赫，100多个蛋白，你老板真能放血阿！！ 买那么多抗体，$300 x 100 = $30,000 ?
: 现在funding不好，所以买哪个抗体就很小心。但我也听说ms其实缩小了差异，所以wb
: 可能也能验证出来。
m*2
69 楼
en. habit of convention ba.
when we first started to do qRT-PCR, my boss always wanted to see northern.
Now we have more modern technology, and she wants to see qRT-PCR.
【在 O******e 的大作中提到】
: 很多人是要看到WESTERN的带才放心的。MS都做出来了，WB不可能做不出来。
: 如果真做不出来了，MS的结果当然要打个问号。
when we first started to do qRT-PCR, my boss always wanted to see northern.
Now we have more modern technology, and she wants to see qRT-PCR.
【在 O******e 的大作中提到】
: 很多人是要看到WESTERN的带才放心的。MS都做出来了，WB不可能做不出来。
: 如果真做不出来了，MS的结果当然要打个问号。
b*g
70 楼
unfortunately, Ion trap is NOT good for quantification, which is the disadvatage of Ion Trap.
If your protein concnetration is high, you need be more careful, since your result may mislead you.
义。
【在 f*********e 的大作中提到】
: ESI-Ion Trap
: 我前面贴也说了，目的不是测差几倍，而是看有无差异，2倍，3倍，5倍，无太大意义。
If your protein concnetration is high, you need be more careful, since your result may mislead you.
义。
【在 f*********e 的大作中提到】
: ESI-Ion Trap
: 我前面贴也说了，目的不是测差几倍，而是看有无差异，2倍，3倍，5倍，无太大意义。
f*e
71 楼
是的，比如triple quad 肯定好滴多。但是出于综合考虑，对于initial screening，
ion trap还是最实用的。
我的样品浓度很低，我觉得就是低所以才可能不准，浓度高的话，random sampling到
的几率很高，重复性也好的多。
disadvatage of Ion Trap.
your result may mislead you.
【在 b*******g 的大作中提到】
: unfortunately, Ion trap is NOT good for quantification, which is the disadvatage of Ion Trap.
: If your protein concnetration is high, you need be more careful, since your result may mislead you.
:
: 义。
ion trap还是最实用的。
我的样品浓度很低，我觉得就是低所以才可能不准，浓度高的话，random sampling到
的几率很高，重复性也好的多。
disadvatage of Ion Trap.
your result may mislead you.
【在 b*******g 的大作中提到】
: unfortunately, Ion trap is NOT good for quantification, which is the disadvatage of Ion Trap.
: If your protein concnetration is high, you need be more careful, since your result may mislead you.
:
: 义。
b*g
72 楼
【在 f*********e 的大作中提到】
: 是的，比如triple quad 肯定好滴多。但是出于综合考虑，对于initial screening，
: ion trap还是最实用的。
: 我的样品浓度很低，我觉得就是低所以才可能不准，浓度高的话，random sampling到
: 的几率很高，重复性也好的多。
:
: disadvatage of Ion Trap.
: your result may mislead you.
K*S
73 楼
浓度有多低？
【在 f*********e 的大作中提到】
: 是的，比如triple quad 肯定好滴多。但是出于综合考虑，对于initial screening，
: ion trap还是最实用的。
: 我的样品浓度很低，我觉得就是低所以才可能不准，浓度高的话，random sampling到
: 的几率很高，重复性也好的多。
:
: disadvatage of Ion Trap.
: your result may mislead you.
【在 f*********e 的大作中提到】
: 是的，比如triple quad 肯定好滴多。但是出于综合考虑，对于initial screening，
: ion trap还是最实用的。
: 我的样品浓度很低，我觉得就是低所以才可能不准，浓度高的话，random sampling到
: 的几率很高，重复性也好的多。
:
: disadvatage of Ion Trap.
: your result may mislead you.
f*e
74 楼
Starting: total 1mg whole cell lysate
After glycoprotein enrichment, no idea.
Assume: 100 glycoprotein obtained after pull-down and total amount is 1% of
total whole cell lysate, so each glycoprotein would be 100ng. Then split
into 3 aliquots and reconstitue in 30ul, so around 30ng for each protein at
the concentration of 1ng/ul. My estimation is actually lower, given the
target protein is low abuntant.
【在 K******S 的大作中提到】
: 浓度有多低？
After glycoprotein enrichment, no idea.
Assume: 100 glycoprotein obtained after pull-down and total amount is 1% of
total whole cell lysate, so each glycoprotein would be 100ng. Then split
into 3 aliquots and reconstitue in 30ul, so around 30ng for each protein at
the concentration of 1ng/ul. My estimation is actually lower, given the
target protein is low abuntant.
【在 K******S 的大作中提到】
: 浓度有多低？
f*e
75 楼
谢谢！很有道理。
我的样品dynamic range不会那么大。如果真的很大，样品浓度又高，就真要考虑作MRM
了。
【在 b*******g 的大作中提到】
我的样品dynamic range不会那么大。如果真的很大，样品浓度又高，就真要考虑作MRM
了。
【在 b*******g 的大作中提到】
K*S
76 楼
如果有1ng/ul， 正好是很多NANO-LC-TRAP的舒服的浓度，
of
at
【在 f*********e 的大作中提到】
: Starting: total 1mg whole cell lysate
: After glycoprotein enrichment, no idea.
: Assume: 100 glycoprotein obtained after pull-down and total amount is 1% of
: total whole cell lysate, so each glycoprotein would be 100ng. Then split
: into 3 aliquots and reconstitue in 30ul, so around 30ng for each protein at
: the concentration of 1ng/ul. My estimation is actually lower, given the
: target protein is low abuntant.
of
at
【在 f*********e 的大作中提到】
: Starting: total 1mg whole cell lysate
: After glycoprotein enrichment, no idea.
: Assume: 100 glycoprotein obtained after pull-down and total amount is 1% of
: total whole cell lysate, so each glycoprotein would be 100ng. Then split
: into 3 aliquots and reconstitue in 30ul, so around 30ng for each protein at
: the concentration of 1ng/ul. My estimation is actually lower, given the
: target protein is low abuntant.
f*e
77 楼
赫赫，正好也是nanoLC-Trap,托你吉言，希望歪打正着
我觉得浓度应该<1ng/ul,10倍之内
【在 K******S 的大作中提到】
: 如果有1ng/ul， 正好是很多NANO-LC-TRAP的舒服的浓度，
:
: of
: at
我觉得浓度应该<1ng/ul,10倍之内
【在 K******S 的大作中提到】
: 如果有1ng/ul， 正好是很多NANO-LC-TRAP的舒服的浓度，
:
: of
: at
s*t
78 楼
SRM或者MRM的话，trap还是不行，qqq才是王道。
同位素标记，相对定量的话，trap的应用才是最多的。
我前面说的就是同位素标记的相对定量的MS数据，2倍差异的，我们实验室的100多个WB
验证，大概有20-30%的情况下抗体不行，剩下70%抗体work的，能得到和MS相同结果的
也就30%不到。100多个抗体没有多少钱吧，比起来metabolically labeling 动物。
同位素标记，相对定量的话，trap的应用才是最多的。
我前面说的就是同位素标记的相对定量的MS数据，2倍差异的，我们实验室的100多个WB
验证，大概有20-30%的情况下抗体不行，剩下70%抗体work的，能得到和MS相同结果的
也就30%不到。100多个抗体没有多少钱吧，比起来metabolically labeling 动物。
s*t
79 楼
借贴发问下，有哪个同学是要去asms的？
b*g
80 楼
我。。。。
【在 s*****t 的大作中提到】
: 借贴发问下，有哪个同学是要去asms的？
【在 s*****t 的大作中提到】
: 借贴发问下，有哪个同学是要去asms的？
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