i*T
2 楼
一个是波士顿地区的小公司,近年发展还不错。
一个是中西部大公司,业绩稳定,但受经济和行业影响近年有下滑趋势。
主要考虑是未来5年我个人的发展机会。小公司可能表现机会多,晋升快,但压力大,
风险大。大公司可能更自由一点。请大家给点建议。第一份工作要从大公司开始还是小
公司开始?
一个是中西部大公司,业绩稳定,但受经济和行业影响近年有下滑趋势。
主要考虑是未来5年我个人的发展机会。小公司可能表现机会多,晋升快,但压力大,
风险大。大公司可能更自由一点。请大家给点建议。第一份工作要从大公司开始还是小
公司开始?
m*t
3 楼
毫无征兆,莫名其妙地,Webradio突然决定今儿就是推出《恰同学少年》的好日子,这里为大家奉上第一集。感谢北京市廊坊未名空间信息技术有限公司的大力支持,让本作得以依托于此发布。
《恰同学少年》第一集 缘起
http://youtu.be/zlEAlCdM_5Q
开场白:replay
语文老太:flowspring
旁白/我:三月风
总制片:娜娜 执行导演:plutus 果子
监制:bigchipmunk 视效顾问: sheanne
原著:plutus 改编:zli huochai bigchipmunk
后期音效:zli 后期视频: 火柴
美术:蓝妹妹 灰猫 伊伊
片尾报幕:果子
youtube outline:zli
剧本:
【片头乐起】
"那一世, 转山转水转佛塔啊~
不为修来生, 只愿途中,能再与你相见"
--- 疑似仓央嘉措伪作
【片头乐隐】
第一集 缘起
尘事如潮,转身浪影汹涌没红尘。那份最初最纯的少年情怀,你们是否都还记得?
通常一般人的初恋都比较近水楼台:比如一肘之隔的同桌,一门之差的邻家。再远一点,基本也是同班、同校,同一条胡同,同一个大院。总之大约还是个略微知道根底,隔三岔五抬头不见低头见的对象。
我不是,我的第一次暗恋,隔得那么远。
回想一下,那可能是小学四年级时发生的事了...在某个区教委主办的作文培训班上,我遇见了她。这种作文培训班,由教委治下的每个小学选派两个语文成绩好的代表参加,基本就是随便上几堂课糊弄一下,然后搞搞向党的十几大献礼之类的命题征文,面子工程而已。
于是五六十个孩子坐一块儿听教委派来的语文老太太上课。 而她,恰巧坐在我前面一排。
这个小女孩,清秀极了。短短的头发,漆黑的眸子,再加上巧笑倩兮,当时真的是惊为天人...
所以你也猜得出,我的心思从来就没放在听讲上过,每堂课就是盯着前排的背影发呆。
仍然记得,这个作文培训是每周二下午去一次。每次上课之前我都很盼望,因为隔了一周又能见到她 —— 虽然我们连一句话都没说过,而她可能也根本没意识到我的存在。
每次上课,老太太照例在上头滔滔不绝唾沫横飞,前排的她低头用心沙沙地记着笔记,后排的我则总是望着伊人的背影胡思乱想,一边信手涂鸦在本子上画小人打仗。学校同来的哥们看我这么不上心也就跟着一块儿鬼混。我们常和旁边其他学校的孩子们有一搭没一搭地瞎聊,每次在下头嗡嗡讲得兴起太大声了,讲台上的语文老太就要提高嗓门训一下,“后面那是哪个学校的又在讲小话?”
于是大伙在底下吃吃地乱笑略为收敛。
前排的她总是安之若素,头从来也不后转看我们一眼。
就这样,每周能见到一次,每次与她同坐在一间教室里的时间是五十分钟。也许再算上课前大伙挤在走廊一块等教室开门的片刻,也许还有课后散开时那一点点同路的时间,把所有这一点一滴全加起来,每个礼拜,我的目光在她身上驻留的时间顶多只有一个半小时。
俗话说一回生二回熟,几个星期下来,我们几个坐在后排的自来熟捣乱分子与周围的各路神仙也差不多都认识了。和她同一个小学来的是个男伴,单名一个翔字 ——飞翔的翔。拐弯抹角通过翔我终于知道了她的名字 —— 航, 航行的航.
翔这家伙平常那双小眼睛老眨巴眨巴的,一脸狡猾随时在动坏水的样子。因为他们每次都是一起来一块走,刚开始很自然地我就先入为主把他当成了八杆子打不着的情敌。后来仔细观察一番好像又不是那么回事,于是我又放心一点点。不过每回看着他俩一块搭公共汽车回去的背影,心里难免总还是酸酸的。
我们回去要坐的公交跟他们不一样,能同路的距离就是从培训班到公共汽车站这么一点点路程。稍微与翔混熟一点之后,心怀鬼胎的我每次下课后总挤着与他们同路而行。结果通常的画面便成了三个男生(翔、我、同校的路人甲)在前头谈笑风生,夸张地伴以各种打闹;落单的航则永远若即若离地吊在后头,与身前这些混小子不疾不徐保持着距离。
她从不参与我们的高谈阔论。
到了车站,有时我们的车先来,有时他们的车先到。每次分别的时候,我总是故作兴高采烈地对着远去的身影挥手作别,而翔也在那一头笑嘻嘻地摇手回应。唯有航,总是安安静静地站在同伴边上。
我总觉得每次挥别时一旁的她也是在微笑的。不过我也无法确定这到底是事实呢,还是自己心甘情愿产生的幻觉。反正每次公共汽车很快就开走了,看不清楚。
而我所盼望的汽车抛锚趴窝的情形却一次也没发生过。
【第一集完,进片尾曲,老狼《恋恋风尘》】
《恰同学少年》第一集 缘起
http://youtu.be/zlEAlCdM_5Q
开场白:replay
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旁白/我:三月风
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监制:bigchipmunk 视效顾问: sheanne
原著:plutus 改编:zli huochai bigchipmunk
后期音效:zli 后期视频: 火柴
美术:蓝妹妹 灰猫 伊伊
片尾报幕:果子
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剧本:
【片头乐起】
"那一世, 转山转水转佛塔啊~
不为修来生, 只愿途中,能再与你相见"
--- 疑似仓央嘉措伪作
【片头乐隐】
第一集 缘起
尘事如潮,转身浪影汹涌没红尘。那份最初最纯的少年情怀,你们是否都还记得?
通常一般人的初恋都比较近水楼台:比如一肘之隔的同桌,一门之差的邻家。再远一点,基本也是同班、同校,同一条胡同,同一个大院。总之大约还是个略微知道根底,隔三岔五抬头不见低头见的对象。
我不是,我的第一次暗恋,隔得那么远。
回想一下,那可能是小学四年级时发生的事了...在某个区教委主办的作文培训班上,我遇见了她。这种作文培训班,由教委治下的每个小学选派两个语文成绩好的代表参加,基本就是随便上几堂课糊弄一下,然后搞搞向党的十几大献礼之类的命题征文,面子工程而已。
于是五六十个孩子坐一块儿听教委派来的语文老太太上课。 而她,恰巧坐在我前面一排。
这个小女孩,清秀极了。短短的头发,漆黑的眸子,再加上巧笑倩兮,当时真的是惊为天人...
所以你也猜得出,我的心思从来就没放在听讲上过,每堂课就是盯着前排的背影发呆。
仍然记得,这个作文培训是每周二下午去一次。每次上课之前我都很盼望,因为隔了一周又能见到她 —— 虽然我们连一句话都没说过,而她可能也根本没意识到我的存在。
每次上课,老太太照例在上头滔滔不绝唾沫横飞,前排的她低头用心沙沙地记着笔记,后排的我则总是望着伊人的背影胡思乱想,一边信手涂鸦在本子上画小人打仗。学校同来的哥们看我这么不上心也就跟着一块儿鬼混。我们常和旁边其他学校的孩子们有一搭没一搭地瞎聊,每次在下头嗡嗡讲得兴起太大声了,讲台上的语文老太就要提高嗓门训一下,“后面那是哪个学校的又在讲小话?”
于是大伙在底下吃吃地乱笑略为收敛。
前排的她总是安之若素,头从来也不后转看我们一眼。
就这样,每周能见到一次,每次与她同坐在一间教室里的时间是五十分钟。也许再算上课前大伙挤在走廊一块等教室开门的片刻,也许还有课后散开时那一点点同路的时间,把所有这一点一滴全加起来,每个礼拜,我的目光在她身上驻留的时间顶多只有一个半小时。
俗话说一回生二回熟,几个星期下来,我们几个坐在后排的自来熟捣乱分子与周围的各路神仙也差不多都认识了。和她同一个小学来的是个男伴,单名一个翔字 ——飞翔的翔。拐弯抹角通过翔我终于知道了她的名字 —— 航, 航行的航.
翔这家伙平常那双小眼睛老眨巴眨巴的,一脸狡猾随时在动坏水的样子。因为他们每次都是一起来一块走,刚开始很自然地我就先入为主把他当成了八杆子打不着的情敌。后来仔细观察一番好像又不是那么回事,于是我又放心一点点。不过每回看着他俩一块搭公共汽车回去的背影,心里难免总还是酸酸的。
我们回去要坐的公交跟他们不一样,能同路的距离就是从培训班到公共汽车站这么一点点路程。稍微与翔混熟一点之后,心怀鬼胎的我每次下课后总挤着与他们同路而行。结果通常的画面便成了三个男生(翔、我、同校的路人甲)在前头谈笑风生,夸张地伴以各种打闹;落单的航则永远若即若离地吊在后头,与身前这些混小子不疾不徐保持着距离。
她从不参与我们的高谈阔论。
到了车站,有时我们的车先来,有时他们的车先到。每次分别的时候,我总是故作兴高采烈地对着远去的身影挥手作别,而翔也在那一头笑嘻嘻地摇手回应。唯有航,总是安安静静地站在同伴边上。
我总觉得每次挥别时一旁的她也是在微笑的。不过我也无法确定这到底是事实呢,还是自己心甘情愿产生的幻觉。反正每次公共汽车很快就开走了,看不清楚。
而我所盼望的汽车抛锚趴窝的情形却一次也没发生过。
【第一集完,进片尾曲,老狼《恋恋风尘》】
m*n
4 楼
请问版上有人熟悉ChIP-seq么?用细胞系表达HA-tag的蛋白然后isolate chromatin做
ChIP-seq。不知道大概需要多少细胞才能得到比较好的浓度的chromatin?按说HA的
antibody是相当好了。如果有熟悉ChIP的前辈可以帮忙指点下,非常感谢!!
ChIP-seq。不知道大概需要多少细胞才能得到比较好的浓度的chromatin?按说HA的
antibody是相当好了。如果有熟悉ChIP的前辈可以帮忙指点下,非常感谢!!
z*x
7 楼
沙发!
这里为大家奉上第一集。感谢北京市廊坊未名空间信息技术有限公司的大力支持,让本
作得以依托于此发布。
【在 m********t 的大作中提到】
: 毫无征兆,莫名其妙地,Webradio突然决定今儿就是推出《恰同学少年》的好日子,这里为大家奉上第一集。感谢北京市廊坊未名空间信息技术有限公司的大力支持,让本作得以依托于此发布。
: 《恰同学少年》第一集 缘起
: http://youtu.be/zlEAlCdM_5Q
: 开场白:replay
: 语文老太:flowspring
: 旁白/我:三月风
: 总制片:娜娜 执行导演:plutus 果子
: 监制:bigchipmunk 视效顾问: sheanne
: 原著:plutus 改编:zli huochai bigchipmunk
: 后期音效:zli 后期视频: 火柴
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【在 m********t 的大作中提到】
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y*1
8 楼
Never used HA-tag for ChIP before. We usually use 20 million cells (2X10*7)
to get enough DNA for ChIP-seq.
to get enough DNA for ChIP-seq.
z*x
9 楼
效果超赞啊!
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z*x
11 楼
一分十四秒的“通常”是咋回事?
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【在 m********t 的大作中提到】
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C*Y
12 楼
Usually 4 million cells are enough for most transcription factor ChIP-seq.
m*n
14 楼
谢谢楼上各位分享经验!
我们实验室刚刚开始做ChIP-seq,有一个学生做这个,说是揣摩了很久的protocol。
我plate了25million N2A cells给他,他还说Chromatin浓度不够。我吐血。。。因为
transfection看起来很好,细胞很健康。就算撑死细胞死了5million吧,那还有
20million活着呢。因为我自己不做这个,所以也不是很懂。但是我总觉得>20 million
cells怎么可能不够。如果做ChIP的话是more than enough。虽然说ChIP-seq大概需要
更多的chromatin,但是因为表达的蛋白是HA-Tag的,HA的抗体非常非常好,所以
Chromatin的浓度要求应该比一般蛋白的要低。
我就是很不明白为什么总是说Chromatin不够。前面说用Primary culture做,我Culture
了4个litter(35个胚胎)的小鼠皮层,那个学生也说是细胞不够。。。所以我觉得不
对劲。但是老板也说不出个所以然来。实验拖拉着我急死了。
不知道前辈用的是什么Protocal呢?可以分享下吗?
【在 C***Y 的大作中提到】
: Usually 4 million cells are enough for most transcription factor ChIP-seq.
我们实验室刚刚开始做ChIP-seq,有一个学生做这个,说是揣摩了很久的protocol。
我plate了25million N2A cells给他,他还说Chromatin浓度不够。我吐血。。。因为
transfection看起来很好,细胞很健康。就算撑死细胞死了5million吧,那还有
20million活着呢。因为我自己不做这个,所以也不是很懂。但是我总觉得>20 million
cells怎么可能不够。如果做ChIP的话是more than enough。虽然说ChIP-seq大概需要
更多的chromatin,但是因为表达的蛋白是HA-Tag的,HA的抗体非常非常好,所以
Chromatin的浓度要求应该比一般蛋白的要低。
我就是很不明白为什么总是说Chromatin不够。前面说用Primary culture做,我Culture
了4个litter(35个胚胎)的小鼠皮层,那个学生也说是细胞不够。。。所以我觉得不
对劲。但是老板也说不出个所以然来。实验拖拉着我急死了。
不知道前辈用的是什么Protocal呢?可以分享下吗?
【在 C***Y 的大作中提到】
: Usually 4 million cells are enough for most transcription factor ChIP-seq.
a*3
15 楼
怒赞!!!!
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m*n
16 楼
h*i
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ding~~
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h*n
18 楼
Transient transfection后你的蛋白主要在胞质还是在核里面?有些蛋白over express
后会change localization
后会change localization
g*r
19 楼
一直以为廊坊是河北省的……
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h*n
22 楼
你的anti-ha抗体好是根据什么得出来的?好抗体做CHIP-seq的话20个million个细胞应
该足够了。ChIP-Seq里面很多步骤都很tricky。
你应该先检测抗体的pull-down的能力和效率。然后再看你sonication这一步产生片段
的大小是否合适。一般认为300-500之间最好。还有就是抗体和lysis反应的时间,有些
蛋白很容易降解,overnight是肯定不行的。
该足够了。ChIP-Seq里面很多步骤都很tricky。
你应该先检测抗体的pull-down的能力和效率。然后再看你sonication这一步产生片段
的大小是否合适。一般认为300-500之间最好。还有就是抗体和lysis反应的时间,有些
蛋白很容易降解,overnight是肯定不行的。
b*e
24 楼
嗯,本来周一就能发表的,因为与廊坊交涉耽误了。。。
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25 楼
超级赞
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b*k
28 楼
ding
剧末报幕是果子,建议加上哦,最后找站务要伪币奖励,要看这个名单的
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剧末报幕是果子,建议加上哦,最后找站务要伪币奖励,要看这个名单的
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: 毫无征兆,莫名其妙地,Webradio突然决定今儿就是推出《恰同学少年》的好日子,这里为大家奉上第一集。感谢北京市廊坊未名空间信息技术有限公司的大力支持,让本作得以依托于此发布。
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32 楼
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M*N
35 楼
先顶~~
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b*s
36 楼
征兆还是有的,看你是否注意。例如,是否早上恶心想吐一类的……
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s*e
41 楼
昨晚半夜看到版务自掏腰包发的包子,实在是太感动了,其实你们不必这样的~~~~~~
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M*N
77 楼
http://www.youtube.com/watch?v=TKyIIVC_m0Y
【在 g***r 的大作中提到】
: 那我改题目,为啥牛筋买香水。。。
【在 g***r 的大作中提到】
: 那我改题目,为啥牛筋买香水。。。
L*s
81 楼
这楼歪得……够快的,还没翻页就一去千里了
g*r
86 楼
终于有有声演员表了,赞!
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L*s
96 楼
其他主创人员我就不赞了,赞一下:
一,语文老太太
二,片头的那首歌,怎么那么贴切泥?谁的主意?
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H*3
102 楼
狂顶大赞!同学们太有才了有木有!!
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l*y
103 楼
效果真棒!怒赞!
q*x
104 楼
大赞精品!!!
M*d
105 楼
我就说丝袜套头是有科学依据的!
N*f
106 楼
Bravo! Great work all around, y'all!
第一集所有方面都堪称完美,临末尾果子那一嗓子更是
石破天惊,萌得不打一处来,呵呵。
第一集所有方面都堪称完美,临末尾果子那一嗓子更是
石破天惊,萌得不打一处来,呵呵。
i*a
135 楼
制作细致~,很怀旧唯美啊。。。赞!
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R*y
136 楼
Bang!捂了这么久,终于出锅了!大赞一声!
谢自掏腰包的包子,太有诚意了!
谢自掏腰包的包子,太有诚意了!
x*g
138 楼
北京市廊坊未名空间信息技术有限公司
what is this?
what is this?
z*x
142 楼
顶
要顶
必须顶
不得不顶
用尽全力顶
再加上千斤顶
总之把它顶到顶
接着使出葵花宝顶
就算顶到史前也要顶
老子看了会用道德经顶
孔子亲自拜你为师天天顶
秦始皇站在阿房宫上使劲顶
汉高祖挥师杀向东罗马为你顶
吕布抛弃了貂禅而选择了帮你顶
张三丰见了后用太极拳九式全力顶
左冷禅召开武林盟主大会商讨如何顶
西门吹雪从此学会了最强一招剑神一顶
龙剑飞的如来神掌最后一式改为万佛朝顶
陆小凤从此再也不管闲事了而专门来为你顶
四大名捕四面出击看天下还有没有人敢不在顶
要顶
必须顶
不得不顶
用尽全力顶
再加上千斤顶
总之把它顶到顶
接着使出葵花宝顶
就算顶到史前也要顶
老子看了会用道德经顶
孔子亲自拜你为师天天顶
秦始皇站在阿房宫上使劲顶
汉高祖挥师杀向东罗马为你顶
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张三丰见了后用太极拳九式全力顶
左冷禅召开武林盟主大会商讨如何顶
西门吹雪从此学会了最强一招剑神一顶
龙剑飞的如来神掌最后一式改为万佛朝顶
陆小凤从此再也不管闲事了而专门来为你顶
四大名捕四面出击看天下还有没有人敢不在顶
p*u
147 楼
太美了
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N*f
170 楼
女神示范。:-)
http://www.youtube.com/watch?v=3WhE1Y3hhsU
http://www.youtube.com/watch?v=N6o6WNbm6_U
【在 a********3 的大作中提到】
: 谢谢我导~~~~
: 嗯,那谁来看看,我导多有品位了啦~~~~!!!
: 摊导逼我重录两次,最后很绝望的说,就酱紫吧。。。
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【在 a********3 的大作中提到】
: 谢谢我导~~~~
: 嗯,那谁来看看,我导多有品位了啦~~~~!!!
: 摊导逼我重录两次,最后很绝望的说,就酱紫吧。。。
z*n
171 楼
赞
p*u
175 楼
写的非常好,让人勾起童年的回忆
p*u
176 楼
视频里面小学的教学楼很像我小时候那个,也是三层,也是左边是入口。
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h*a
177 楼
赞!!!
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