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请教给动物注射plasmid DNA的问题

请教给动物注射plasmid DNA的问题# Biology - 生物学

b*l2010-10-04 07:10

1 楼

http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be

v*a2010-10-04 07:10

2 楼

我在研究某个蛋白在其overexpress情况下对某个器官的作用。想给老鼠注射含有这个
蛋白insert的plasmid DNA，第一次做，不知道有些什么需要注意的？是不是可以用PBS
作为等价于in vitro中溶解DNA的buffer/media？我在in vitro中overexpress的时候，
用的transfection reagent是QIAGEN的effectene，不知道给老鼠注射的话也仍旧可以
用这个吗？或者大家有推荐的吗？
非常感谢！

x*g2010-10-04 07:10

3 楼

很美好

【在 b*****l 的大作中提到】

: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be

w*a2010-10-04 07:10

4 楼

这种实验一般都是用virus做的吧，直接iv injection可能转化效率很低，当然如果器官
是liver的话，可能好一点。

PBS

【在 v***a 的大作中提到】

: 我在研究某个蛋白在其overexpress情况下对某个器官的作用。想给老鼠注射含有这个
: 蛋白insert的plasmid DNA，第一次做，不知道有些什么需要注意的？是不是可以用PBS
: 作为等价于in vitro中溶解DNA的buffer/media？我在in vitro中overexpress的时候，
: 用的transfection reagent是QIAGEN的effectene，不知道给老鼠注射的话也仍旧可以
: 用这个吗？或者大家有推荐的吗？
: 非常感谢！

x*g2010-10-04 07:10

5 楼

这首歌有好几个歌词，每一个都很耐人寻味，有味道。

【在 b*****l 的大作中提到】

: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be

v*a2010-10-04 07:10

6 楼

不是liver。。。老板确实提了一句用virus。。我再想想。多谢了！

器官

【在 w***a 的大作中提到】

: 这种实验一般都是用virus做的吧，直接iv injection可能转化效率很低，当然如果器官
: 是liver的话，可能好一点。
:
: PBS

o*12010-10-04 07:10

7 楼

原来你老公号恶俗老狼，那么字是什么？不过你居然还有满不错的voice。看样子大妈
年轻的时候还挺有妹力的。

【在 b*****l 的大作中提到】

: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be

m*72010-10-04 07:10

8 楼

不需要用lipid based transfection reagent。

b*l2010-10-04 07:10

9 楼

大妈虽然年事已高，妹力装装也还有啊 LOL
哈哈！不是我老公，我可攀不起高枝：）））
是参加一个小论坛《好声音》活动录的。我不会用软件只能靠绑人家才能唱。这歌我嚼
着我自己唱挺好的，男声部分也唱的特别好，而且视频与声音合成都是他做的，很感谢。

【在 o******1 的大作中提到】

: 原来你老公号恶俗老狼，那么字是什么？不过你居然还有满不错的voice。看样子大妈
: 年轻的时候还挺有妹力的。

v*a2010-10-04 07:10

10 楼

你的意思是直接注射DNA就可以了？

【在 m*********7 的大作中提到】

: 不需要用lipid based transfection reagent。

b*l2010-10-04 07:10

11 楼

我爱你时，你正一贫如洗寒窗苦读。。
离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。

【在 x****g 的大作中提到】

: 这首歌有好几个歌词，每一个都很耐人寻味，有味道。

a*d2010-10-04 07:10

12 楼

virus or electroporation

M*92010-10-04 07:10

13 楼

我觉得你唱得很好。制作得也很好。
能唱画心么？那个我当时听的时候很震撼。
这个时代海誓山盟很少了。让人感动的事也少了。

【在 b*****l 的大作中提到】

: 我爱你时，你正一贫如洗寒窗苦读。。
: 离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。

D*a2010-10-04 07:10

14 楼

怎么给动物做electroporation？求protocol。

【在 a****d 的大作中提到】

: virus or electroporation

M*92010-10-04 07:10

15 楼

千年修行千年孤独
夜深人静时可有人听见我在哭
灯火阑珊处可有人看见我跳舞

【在 b*****l 的大作中提到】

: 我爱你时，你正一贫如洗寒窗苦读。。
: 离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。

w*a2010-10-04 07:10

16 楼

弄个电椅？

【在 D***a 的大作中提到】

: 怎么给动物做electroporation？求protocol。

b*l2010-10-04 07:10

17 楼

我只会录清唱，不会加伴奏，我得找人帮我。我试试看，我也喜欢画心，痒了，呵呵
：）

【在 M*********9 的大作中提到】

: 我觉得你唱得很好。制作得也很好。
: 能唱画心么？那个我当时听的时候很震撼。
: 这个时代海誓山盟很少了。让人感动的事也少了。

a*d2010-10-04 07:10

18 楼

depends on where you wanna over express or knock down, not sure if you can
do electroporation in liver though... u can google the protocol
virus maybe the best way to go for your experiments

【在 D***a 的大作中提到】

: 怎么给动物做electroporation？求protocol。

b*l2010-10-04 07:10

19 楼

能不能为你再跳一只舞，我是你千百年前放生的白狐。。。
我有时候觉得我就是那只狐：）

【在 M*********9 的大作中提到】

: 千年修行千年孤独
: 夜深人静时可有人听见我在哭
: 灯火阑珊处可有人看见我跳舞

o*r2010-10-04 07:10

20 楼

十年前记得有直接大剂量肌肉注射的，就是效率有点低

x*g2010-10-04 07:10

21 楼

你有令你觉得遗憾的前缘么？

【在 b*****l 的大作中提到】

: 能不能为你再跳一只舞，我是你千百年前放生的白狐。。。
: 我有时候觉得我就是那只狐：）

o*i2010-10-04 07:10

22 楼

duh!
`

器官

【在 v***a 的大作中提到】

: 不是liver。。。老板确实提了一句用virus。。我再想想。多谢了！
:
: 器官

b*l2010-10-04 07:10

23 楼

我很想，可是我没有，呵呵。我情感经历特别简单，大学同班同学前男朋友然后就是大
学同校高年级师兄就结婚了。我没经历过留有遗憾的前缘。而且我的个性，我不惦记我
得不到的东西，所以就傻傻的快乐着。

【在 x****g 的大作中提到】

: 你有令你觉得遗憾的前缘么？

o*a2010-10-04 07:10

24 楼

至少七八年前就开始流行了，protocols能搜出不少吧，比如这个
http://www.natureprotocols.com/2007/12/13/using_in_utero_electroporation.php
电压，持续时间，脉冲次数要自己试，做好大批动物被烧烤的思想准备...

【在 D***a 的大作中提到】

: 怎么给动物做electroporation？求protocol。

X*72010-10-04 07:10

25 楼

反复听了好几遍，赶上我前阵子听The Monster的劲头了，唱的很好听。这首歌也很好
听。

R*w2010-10-04 07:10

26 楼

直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
in vivo 用transfection reagent　效果不明显

b*l2010-10-04 07:10

27 楼

哈哈！谢谢小丫。这歌儿的故事很悲伤所以就很打动人，我也非常喜欢。

【在 X******7 的大作中提到】

: 反复听了好几遍，赶上我前阵子听The Monster的劲头了，唱的很好听。这首歌也很好
: 听。

v*a2010-10-04 07:10

28 楼

谢谢啦！

【在 R*****w 的大作中提到】

: 直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
: 机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
: in vivo 用transfection reagent　效果不明显

n*s2010-10-04 07:10

29 楼

Not bad...

s*s2010-10-04 07:10

30 楼

直接金粒吸附用基因枪打吧

【在 R*****w 的大作中提到】

b*l2010-10-04 07:10

31 楼

吝啬吝啬吝啬吝啬吝啬。。。。

【在 n*******s 的大作中提到】

: Not bad...

c*02010-10-04 07:10

32 楼

这都行？又不是烟草叶子，能穿过皮嘛

【在 s******s 的大作中提到】

: 直接金粒吸附用基因枪打吧

n*s2010-10-04 07:10

33 楼

说唱歌, 脑中闪过一幅画面,
Echo Below
深院，梧桐，細雨，黃昏，冷月
所有一切都被清秋鎖住
今夜清瑟寒風
難自禁
听着听着, 捂住嘴, 眼角的泪下来了...

t*y2010-10-04 07:10

34 楼

这种实验压根就不该做，因为无论你怎么做，实验结果都无法解释。因为转染效率低是
一个问题，转染的专一性又是一个问题，因为临近组织，循环系统的影响等等，一大堆
的器官将牵涉进去。最后的无论出现什么结果，都会是一团浆糊。
如果可能还是直接在果蝇或其他容易的模式动物里，做组织特异性转基因。

n*s2010-10-04 07:10

35 楼

Call that lucky...
有些遗憾象是心里埋了把刀, 痛得你什么都说不出来.

【在 b*****l 的大作中提到】

: 我很想，可是我没有，呵呵。我情感经历特别简单，大学同班同学前男朋友然后就是大
: 学同校高年级师兄就结婚了。我没经历过留有遗憾的前缘。而且我的个性，我不惦记我
: 得不到的东西，所以就傻傻的快乐着。

s*s2010-10-04 07:10

36 楼

基因枪打蛋白疫苗、DNA疫苗啥的十几年历史都有了，
能够造成免疫应答的，细胞里面表达应该是小case了

【在 c*****0 的大作中提到】

:
: 这都行？又不是烟草叶子，能穿过皮嘛

b*l2010-10-04 07:10

37 楼

无言独上西楼
月如钩
寂寞梧桐深院锁清秋
剪不断
理还乱
是离愁
别有一番滋味在心头
施主，你有剪不断的遗憾前缘，阿弥陀佛，善哉善哉。。

【在 n*******s 的大作中提到】

: 说唱歌, 脑中闪过一幅画面,
: Echo Below
: 深院，梧桐，細雨，黃昏，冷月
: 所有一切都被清秋鎖住
: 今夜清瑟寒風
: 難自禁
: 听着听着, 捂住嘴, 眼角的泪下来了...

n*s2010-10-04 07:10

38 楼

一丝悲袭来, 却是无比的受用.

【在 b*****l 的大作中提到】

: 无言独上西楼
: 月如钩
: 寂寞梧桐深院锁清秋
: 剪不断
: 理还乱
: 是离愁
: 别有一番滋味在心头
: 施主，你有剪不断的遗憾前缘，阿弥陀佛，善哉善哉。。

b*l2010-10-04 07:10

39 楼

I never call it lucky, I call it attitude...attitude does the matter.
情感的遗憾我没有，但非情感的遗憾我也有，像插在心底的刀，所以我根本就不去碰它
，当它不存在。

【在 n*******s 的大作中提到】

: Call that lucky...
: 有些遗憾象是心里埋了把刀, 痛得你什么都说不出来.

n*s2010-10-04 07:10

40 楼

不是中秋, Crab可是挺肥, 一个人寂寞地干掉了6个,奥秘托付.

【在 b*****l 的大作中提到】

M*92010-10-04 07:10

41 楼

好，等着听你的版本。画心非常好听：））

【在 b*****l 的大作中提到】

: 我只会录清唱，不会加伴奏，我得找人帮我。我试试看，我也喜欢画心，痒了，呵呵
: ：）

M*92010-10-04 07:10

42 楼

要千年等待，千年寂寞。。。太久了。：）

【在 b*****l 的大作中提到】

: 能不能为你再跳一只舞，我是你千百年前放生的白狐。。。
: 我有时候觉得我就是那只狐：）

M*92010-10-04 07:10

43 楼

看来你比较理智：）

【在 b*****l 的大作中提到】

b*l2010-10-04 07:10

44 楼

我比较懒，不喜欢换来换去的嫌麻烦：）

【在 M*********9 的大作中提到】

: 看来你比较理智：）

M*92010-10-04 07:10

45 楼

应该是运气也不错。：））
爱情，婚姻这东西有时候就是一念之间。。。

【在 b*****l 的大作中提到】

: 我比较懒，不喜欢换来换去的嫌麻烦：）

b*l2010-10-04 07:10

46 楼

所有的爱都是冒险，那就心甘情愿等待我们一生中所有悬念。。。。

【在 M*********9 的大作中提到】

: 应该是运气也不错。：））
: 爱情，婚姻这东西有时候就是一念之间。。。

n*s2010-10-04 07:10

47 楼

是过程重要还是结果重要呢,当你在爱的时候,对你自己又何尝不是极大的愉悦.

【在 b*****l 的大作中提到】

: 所有的爱都是冒险，那就心甘情愿等待我们一生中所有悬念。。。。

t*h2010-10-04 07:10

48 楼

唱的真好，麦克不是太好，有点杂音
韵味十足

【在 b*****l 的大作中提到】

: 所有的爱都是冒险，那就心甘情愿等待我们一生中所有悬念。。。。

b*l2010-10-04 07:10

49 楼

谢谢。女声是麦克录的，男声好像一贯都是用iphone直接录的。杂音是挺明显的。

【在 t****h 的大作中提到】

: 唱的真好，麦克不是太好，有点杂音
: 韵味十足

b*l2010-10-04 07:10

50 楼

结果更重要。经历过程是为了最终的好结果，假如明知道根本就没有结果还要去经历过
程，那就不是愉悦是自虐。

【在 n*******s 的大作中提到】

: 是过程重要还是结果重要呢,当你在爱的时候,对你自己又何尝不是极大的愉悦.

s*y2010-10-04 07:10

51 楼

8 cuo!

【在 b*****l 的大作中提到】

: 结果更重要。经历过程是为了最终的好结果，假如明知道根本就没有结果还要去经历过
: 程，那就不是愉悦是自虐。

b*l2010-10-04 07:10

52 楼

谢听：）

【在 s**********y 的大作中提到】

: 8 cuo!

n*s2010-10-04 07:10

53 楼

所有的结果最终也都是浮云啊, 谁会明知道没有结果还去趟浑水呢?
真有人去趟的话, 也许是魅力太大, 必须趟的.

【在 b*****l 的大作中提到】

: 结果更重要。经历过程是为了最终的好结果，假如明知道根本就没有结果还要去经历过
: 程，那就不是愉悦是自虐。

t*h2010-10-04 07:10

54 楼

建议你用专业的软件处理一下就perfect了
消除杂音，减少爆音

【在 b*****l 的大作中提到】

: 谢谢。女声是麦克录的，男声好像一贯都是用iphone直接录的。杂音是挺明显的。