b*g
2 楼
Debit transactions may be processed via the STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE
networks. Please uncheck this checkbox if you do not want your transaction
processed via the STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE networks so your transaction
can be routed through the Visa or MasterCard network, as appropriate.
通过STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE会被收费吗? 或是通过visa, mastercard会被收费?
我就是张里面放了点钱的debit卡, 是不是只能通过前面那种? 谢谢.
networks. Please uncheck this checkbox if you do not want your transaction
processed via the STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE networks so your transaction
can be routed through the Visa or MasterCard network, as appropriate.
通过STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE会被收费吗? 或是通过visa, mastercard会被收费?
我就是张里面放了点钱的debit卡, 是不是只能通过前面那种? 谢谢.
l*o
3 楼
宝宝一岁以内时特别爱笑，你看她一眼她就对你超级灿烂地笑，笑得没眼没牙的。
后来大点了，人家开始有思想了，就比较严肃了，你逗她她也不见得笑了，经常皱着眉
头，粉严肃的样子。
最近开始吧，两岁半以后吧，人家又开始爱笑了，没事就自言自语，咯咯咯地笑，对着
镜子作笑状，美得很呢，对周围的人也常谄媚地笑着，没事就乐。我觉得她是进入到一
个新的社交层次了，大概发现人们喜欢她笑，笑对她有利了。
所以之前一岁内那会的爱笑呢，就是傻笑；现在呢，可以算有点心机的奸笑了。呵呵。
记录一下。
后来大点了，人家开始有思想了，就比较严肃了，你逗她她也不见得笑了，经常皱着眉
头，粉严肃的样子。
最近开始吧，两岁半以后吧，人家又开始爱笑了，没事就自言自语，咯咯咯地笑，对着
镜子作笑状，美得很呢，对周围的人也常谄媚地笑着，没事就乐。我觉得她是进入到一
个新的社交层次了，大概发现人们喜欢她笑，笑对她有利了。
所以之前一岁内那会的爱笑呢，就是傻笑；现在呢，可以算有点心机的奸笑了。呵呵。
记录一下。
n*l
4 楼
WTF,,,,
真会演
真会演
n*w
5 楼
最近做了几次，然后用Western去检测蛋白表达，目的条带在supernatant，不在pellet
中，尽管除了很浅的目的条带外，还有其他蛋白条带（信号很强）。但是如果用HA－
tag抗体去probe，却detect不出目的条带（有些非特异性的带）。是HA-domain被mask
了？还是说我的蛋白压根就没有表达。。。。
我又回去查了一下序列，没有错。。。。
大家帮我一起troubleshoot说说。。谢谢！
中，尽管除了很浅的目的条带外，还有其他蛋白条带（信号很强）。但是如果用HA－
tag抗体去probe，却detect不出目的条带（有些非特异性的带）。是HA-domain被mask
了？还是说我的蛋白压根就没有表达。。。。
我又回去查了一下序列，没有错。。。。
大家帮我一起troubleshoot说说。。谢谢！
j*o
6 楼
区分一作和二作，三作，貌似没有通讯作者的说法。有些时候可以按照作者姓名字母排
名，算并列一作。
名，算并列一作。
f*q
7 楼
你可以任意选择，都是没手续费的
但是商户走visa会有比较高的手续费
费?
【在 b**********g 的大作中提到】
: Debit transactions may be processed via the STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE
: networks. Please uncheck this checkbox if you do not want your transaction
: processed via the STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE networks so your transaction
: can be routed through the Visa or MasterCard network, as appropriate.
: 通过STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE会被收费吗? 或是通过visa, mastercard会被收费?
: 我就是张里面放了点钱的debit卡, 是不是只能通过前面那种? 谢谢.
但是商户走visa会有比较高的手续费
费?
【在 b**********g 的大作中提到】
: Debit transactions may be processed via the STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE
: networks. Please uncheck this checkbox if you do not want your transaction
: processed via the STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE networks so your transaction
: can be routed through the Visa or MasterCard network, as appropriate.
: 通过STAR, Pulse, ACCEL, or NYCE会被收费吗? 或是通过visa, mastercard会被收费?
: 我就是张里面放了点钱的debit卡, 是不是只能通过前面那种? 谢谢.
r*f
8 楼
haha, cute!
【在 l**********o 的大作中提到】
: 宝宝一岁以内时特别爱笑，你看她一眼她就对你超级灿烂地笑，笑得没眼没牙的。
: 后来大点了，人家开始有思想了，就比较严肃了，你逗她她也不见得笑了，经常皱着眉
: 头，粉严肃的样子。
: 最近开始吧，两岁半以后吧，人家又开始爱笑了，没事就自言自语，咯咯咯地笑，对着
: 镜子作笑状，美得很呢，对周围的人也常谄媚地笑着，没事就乐。我觉得她是进入到一
: 个新的社交层次了，大概发现人们喜欢她笑，笑对她有利了。
: 所以之前一岁内那会的爱笑呢，就是傻笑；现在呢，可以算有点心机的奸笑了。呵呵。
: 记录一下。
【在 l**********o 的大作中提到】
: 宝宝一岁以内时特别爱笑，你看她一眼她就对你超级灿烂地笑，笑得没眼没牙的。
: 后来大点了，人家开始有思想了，就比较严肃了，你逗她她也不见得笑了，经常皱着眉
: 头，粉严肃的样子。
: 最近开始吧，两岁半以后吧，人家又开始爱笑了，没事就自言自语，咯咯咯地笑，对着
: 镜子作笑状，美得很呢，对周围的人也常谄媚地笑着，没事就乐。我觉得她是进入到一
: 个新的社交层次了，大概发现人们喜欢她笑，笑对她有利了。
: 所以之前一岁内那会的爱笑呢，就是傻笑；现在呢，可以算有点心机的奸笑了。呵呵。
: 记录一下。
r*y
9 楼
真是无新意啊。
【在 n******l 的大作中提到】
: WTF,,,,
: 真会演
【在 n******l 的大作中提到】
: WTF,,,,
: 真会演
P*n
10 楼
Compare uninduced and induced cells, and you should know if the protein is
overexpressed.
overexpressed.
b*g
11 楼
原来如此, 非常感谢.
【在 f**q 的大作中提到】
: 你可以任意选择，都是没手续费的
: 但是商户走visa会有比较高的手续费
:
: 费?
【在 f**q 的大作中提到】
: 你可以任意选择，都是没手续费的
: 但是商户走visa会有比较高的手续费
:
: 费?
s*d
12 楼
HAHA
n*l
13 楼
xxsl
m*z
14 楼
re this. And I don't think you would really need western blot to see protein
expression if the protein is overexpressed.
【在 P******n 的大作中提到】
: Compare uninduced and induced cells, and you should know if the protein is
: overexpressed.
expression if the protein is overexpressed.
【在 P******n 的大作中提到】
: Compare uninduced and induced cells, and you should know if the protein is
: overexpressed.
M*a
15 楼
这是什么？
【在 n******l 的大作中提到】
: xxsl
【在 n******l 的大作中提到】
: xxsl
n*w
16 楼
Thank you. I did this just on SDS-PAGE but no difference. I cannot see a
difference... =(
protein
【在 m**z 的大作中提到】
: re this. And I don't think you would really need western blot to see protein
: expression if the protein is overexpressed.
difference... =(
protein
【在 m**z 的大作中提到】
: re this. And I don't think you would really need western blot to see protein
: expression if the protein is overexpressed.
m*e
17 楼
meryl是不是自己都审美疲劳了，我还是挺喜欢tattoo girl的
【在 n******l 的大作中提到】
: WTF,,,,
: 真会演
【在 n******l 的大作中提到】
: WTF,,,,
: 真会演
T*t
18 楼
You can try using different media/temp/IPTG concentration to optimize the
expression. I recently heard about this kit:
http://www.athenaes.com/PERK.php
I haven't tried it myself, though. But for $150, I think it's worth trying.
expression. I recently heard about this kit:
http://www.athenaes.com/PERK.php
I haven't tried it myself, though. But for $150, I think it's worth trying.
n*w
19 楼
同喜欢。
她今儿晚上看着像赫本。。。
【在 m*******e 的大作中提到】
: meryl是不是自己都审美疲劳了，我还是挺喜欢tattoo girl的
她今儿晚上看着像赫本。。。
【在 m*******e 的大作中提到】
: meryl是不是自己都审美疲劳了，我还是挺喜欢tattoo girl的
e*s
20 楼
Western能测出来那应该就是有表达了，特别如果也是这个HA抗体的话，那就是HA-tag
在正常折叠的蛋白中被覆盖了，或者抗体浓度不是很合适？
如果对WB结果不是很有信心的话，换一个HA抗体看看。
另外IPTG条件优化一下肯定有帮助，你的表达肯定很低。有一个方法也可以帮你确定是
否真是你的目标蛋白，随着IPTG的增加，通常在Total lysis里的蛋白量是增加的(Sup
里当然不一定)。如果你能看到在一定IPTG浓度范围内，该条带增加，就表示是你的目
标蛋白了。
Expression test一般用个5ml就可以了，省事些。
pellet
mask
【在 n***w 的大作中提到】
: 最近做了几次，然后用Western去检测蛋白表达，目的条带在supernatant，不在pellet
: 中，尽管除了很浅的目的条带外，还有其他蛋白条带（信号很强）。但是如果用HA－
: tag抗体去probe，却detect不出目的条带（有些非特异性的带）。是HA-domain被mask
: 了？还是说我的蛋白压根就没有表达。。。。
: 我又回去查了一下序列，没有错。。。。
: 大家帮我一起troubleshoot说说。。谢谢！
在正常折叠的蛋白中被覆盖了，或者抗体浓度不是很合适？
如果对WB结果不是很有信心的话，换一个HA抗体看看。
另外IPTG条件优化一下肯定有帮助，你的表达肯定很低。有一个方法也可以帮你确定是
否真是你的目标蛋白，随着IPTG的增加，通常在Total lysis里的蛋白量是增加的(Sup
里当然不一定)。如果你能看到在一定IPTG浓度范围内，该条带增加，就表示是你的目
标蛋白了。
Expression test一般用个5ml就可以了，省事些。
pellet
mask
【在 n***w 的大作中提到】
: 最近做了几次，然后用Western去检测蛋白表达，目的条带在supernatant，不在pellet
: 中，尽管除了很浅的目的条带外，还有其他蛋白条带（信号很强）。但是如果用HA－
: tag抗体去probe，却detect不出目的条带（有些非特异性的带）。是HA-domain被mask
: 了？还是说我的蛋白压根就没有表达。。。。
: 我又回去查了一下序列，没有错。。。。
: 大家帮我一起troubleshoot说说。。谢谢！
n*w
21 楼
非常感谢。
我明天试试！
tag
Sup
【在 e****s 的大作中提到】
: Western能测出来那应该就是有表达了，特别如果也是这个HA抗体的话，那就是HA-tag
: 在正常折叠的蛋白中被覆盖了，或者抗体浓度不是很合适？
: 如果对WB结果不是很有信心的话，换一个HA抗体看看。
: 另外IPTG条件优化一下肯定有帮助，你的表达肯定很低。有一个方法也可以帮你确定是
: 否真是你的目标蛋白，随着IPTG的增加，通常在Total lysis里的蛋白量是增加的(Sup
: 里当然不一定)。如果你能看到在一定IPTG浓度范围内，该条带增加，就表示是你的目
: 标蛋白了。
: Expression test一般用个5ml就可以了，省事些。
:
: pellet
我明天试试！
tag
Sup
【在 e****s 的大作中提到】
: Western能测出来那应该就是有表达了，特别如果也是这个HA抗体的话，那就是HA-tag
: 在正常折叠的蛋白中被覆盖了，或者抗体浓度不是很合适？
: 如果对WB结果不是很有信心的话，换一个HA抗体看看。
: 另外IPTG条件优化一下肯定有帮助，你的表达肯定很低。有一个方法也可以帮你确定是
: 否真是你的目标蛋白，随着IPTG的增加，通常在Total lysis里的蛋白量是增加的(Sup
: 里当然不一定)。如果你能看到在一定IPTG浓度范围内，该条带增加，就表示是你的目
: 标蛋白了。
: Expression test一般用个5ml就可以了，省事些。
:
: pellet
n*w
22 楼
我觉得我可能找到原因了。
我觉得是载体的原因。我会换载体。
我觉得是载体的原因。我会换载体。
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