v*a
2 楼
目前在研究一个kinase对一个substrate的磷酸化作用,想看看substrate的哪一个磷酸
基团在这个kinase的作用下有变化。我是先用IP分离出来这个substrate,再用Phospho
-Specific的抗体去看(WB)。用过invitrogen的抗体做WB,signal非常弱,几乎看不
出来。请问大家有什么推荐的抗体吗?像anti-phosphotyrosine啊、anti-
posphothreonine这种的。不知大家觉得有没有其它更好的办法可以监测或定性这类磷
酸化作用?
谢谢!
基团在这个kinase的作用下有变化。我是先用IP分离出来这个substrate,再用Phospho
-Specific的抗体去看(WB)。用过invitrogen的抗体做WB,signal非常弱,几乎看不
出来。请问大家有什么推荐的抗体吗?像anti-phosphotyrosine啊、anti-
posphothreonine这种的。不知大家觉得有没有其它更好的办法可以监测或定性这类磷
酸化作用?
谢谢!
F*e
3 楼
如果你确定你的蛋白有磷酸化的化, 你可以ip大量的蛋白做质朴
可以确定你的蛋白中那个为点被磷酸化了
可以确定你的蛋白中那个为点被磷酸化了
h*n
4 楼
4G10
h*n
7 楼
I used one from Millipore.
K*S
8 楼
If it's tyrosine phosphorylation, there are 3 good antibodies p-y-100, 4G10
and a 3rd one I can't remember now. There is no good S/T antibodies.
Your problem should be very easy to solve using mass spec.
Phospho
【在 v***a 的大作中提到】
: 目前在研究一个kinase对一个substrate的磷酸化作用,想看看substrate的哪一个磷酸
: 基团在这个kinase的作用下有变化。我是先用IP分离出来这个substrate,再用Phospho
: -Specific的抗体去看(WB)。用过invitrogen的抗体做WB,signal非常弱,几乎看不
: 出来。请问大家有什么推荐的抗体吗?像anti-phosphotyrosine啊、anti-
: posphothreonine这种的。不知大家觉得有没有其它更好的办法可以监测或定性这类磷
: 酸化作用?
: 谢谢!
and a 3rd one I can't remember now. There is no good S/T antibodies.
Your problem should be very easy to solve using mass spec.
Phospho
【在 v***a 的大作中提到】
: 目前在研究一个kinase对一个substrate的磷酸化作用,想看看substrate的哪一个磷酸
: 基团在这个kinase的作用下有变化。我是先用IP分离出来这个substrate,再用Phospho
: -Specific的抗体去看(WB)。用过invitrogen的抗体做WB,signal非常弱,几乎看不
: 出来。请问大家有什么推荐的抗体吗?像anti-phosphotyrosine啊、anti-
: posphothreonine这种的。不知大家觉得有没有其它更好的办法可以监测或定性这类磷
: 酸化作用?
: 谢谢!
v*a
9 楼
谢谢!前面也有位同学说用质谱。这个没有做过,正在研究中。
能请教一下p-y-100是哪家的抗体?
其实我不需要知道确切的磷酸化位点,只是想知道这个kinase让substrate的Tyr、Ser
、Thr磷酸化是增强还是减弱。
4G10
【在 K******S 的大作中提到】
: If it's tyrosine phosphorylation, there are 3 good antibodies p-y-100, 4G10
: and a 3rd one I can't remember now. There is no good S/T antibodies.
: Your problem should be very easy to solve using mass spec.
:
: Phospho
能请教一下p-y-100是哪家的抗体?
其实我不需要知道确切的磷酸化位点,只是想知道这个kinase让substrate的Tyr、Ser
、Thr磷酸化是增强还是减弱。
4G10
【在 K******S 的大作中提到】
: If it's tyrosine phosphorylation, there are 3 good antibodies p-y-100, 4G10
: and a 3rd one I can't remember now. There is no good S/T antibodies.
: Your problem should be very easy to solve using mass spec.
:
: Phospho
I*l
10 楼
Phos-tag!!!
磷酸化蛋白特异性抗体,不分氨基酸,有biotin连接的phostag,可以做WB,也可以做
纯化。
磷酸化蛋白特异性抗体,不分氨基酸,有biotin连接的phostag,可以做WB,也可以做
纯化。
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