x*y
2 楼
俺又躺着重枪了， 俺要找味精单挑，就单挑张国荣吧， 俺挺吃亏的， 完整的一首都
没听过， 所以味精先奔
发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
标 题: Re: 【原创】也来说说张国荣的音色、唱功以及其他
版务！！！
我强烈要求在【翻唱】，【原创】，【灌水】这些title之后
再加上【起哄】帖！！！
发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
标 题: Re: 【灌水】学习了睡鼠和味精童鞋关于哥哥的大作后。。。。
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 7 14:41:31 2012, 美东)
事情的经过是这样滴：
。。。。。
然后吃午饭。看到晕调兄弟滴高论关于哥哥滴，
当然我没有跟帖。因为我一般有啥看法都不会咋说。
没有跟帖可以证明我不想惹事，对吧？
然后我就看到版规；
然后我就看到小楼的纯水帖；
然后我就回了小楼的纯水帖；
这一切也都证明我没有针对性，也不想惹事，对吧？
然后我就想说，我也可以发个灌水帖，好玩嘛，对吧？
然后我就跟着版上的讨论发了我那个帖。
在那个帖里，我唯一提到的ID好像是小楼，对吧？
这一切也都证明我没有针对性，也不想惹事，除了小楼，哈哈，对吧？
但是现在，我发现这个标题有我的ID，我想坏了，我不想惹事的，结果
中枪了，咋整？
所以我赶紧回帖，特此声明，我没有想惹事，最多有那么一点点起哄，
但和起哄帮那三位高手相比我算好的，对吧？
哈哈，写完了。
没听过， 所以味精先奔
发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
标 题: Re: 【原创】也来说说张国荣的音色、唱功以及其他
版务！！！
我强烈要求在【翻唱】，【原创】，【灌水】这些title之后
再加上【起哄】帖！！！
发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
标 题: Re: 【灌水】学习了睡鼠和味精童鞋关于哥哥的大作后。。。。
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 7 14:41:31 2012, 美东)
事情的经过是这样滴：
。。。。。
然后吃午饭。看到晕调兄弟滴高论关于哥哥滴，
当然我没有跟帖。因为我一般有啥看法都不会咋说。
没有跟帖可以证明我不想惹事，对吧？
然后我就看到版规；
然后我就看到小楼的纯水帖；
然后我就回了小楼的纯水帖；
这一切也都证明我没有针对性，也不想惹事，对吧？
然后我就想说，我也可以发个灌水帖，好玩嘛，对吧？
然后我就跟着版上的讨论发了我那个帖。
在那个帖里，我唯一提到的ID好像是小楼，对吧？
这一切也都证明我没有针对性，也不想惹事，除了小楼，哈哈，对吧？
但是现在，我发现这个标题有我的ID，我想坏了，我不想惹事的，结果
中枪了，咋整？
所以我赶紧回帖，特此声明，我没有想惹事，最多有那么一点点起哄，
但和起哄帮那三位高手相比我算好的，对吧？
哈哈，写完了。
y*e
3 楼
I have a family plan (voice) with two line at ATT. Now I'm thinking of
upgrading both lines to Iphone. Is there any family plan for data service?
or I have to purchase separately the data plans for the two Iphone? Thanks...
By the way, not sure if we should get 8G or 16G Iphone. Do you think 8G is
enough?
upgrading both lines to Iphone. Is there any family plan for data service?
or I have to purchase separately the data plans for the two Iphone? Thanks...
By the way, not sure if we should get 8G or 16G Iphone. Do you think 8G is
enough?
b*n
4 楼
Hi folks,
I am doing a CO-IP for an endogenous nuclear protein. I have tried several
protocols with acid wash but have not
been successful even once so far. Can anybody kindly share a protocol with
me if it works for you? Or can
anybody give suggestions for trouble shooting? Thank you!
I am doing a CO-IP for an endogenous nuclear protein. I have tried several
protocols with acid wash but have not
been successful even once so far. Can anybody kindly share a protocol with
me if it works for you? Or can
anybody give suggestions for trouble shooting? Thank you!
c*6
5 楼
没有必要必须回国。只要美国有公司用您的话就可以。。。
B2转F1也是可以在美国境内提交材料就可以的。。。
应该是同样的道理。。。
B2转F1也是可以在美国境内提交材料就可以的。。。
应该是同样的道理。。。
b*a
6 楼
哈哈，俺观战~
y*e
7 楼
anyone? thanks...
...
【在 y******e 的大作中提到】
: I have a family plan (voice) with two line at ATT. Now I'm thinking of
: upgrading both lines to Iphone. Is there any family plan for data service?
: or I have to purchase separately the data plans for the two Iphone? Thanks...
: By the way, not sure if we should get 8G or 16G Iphone. Do you think 8G is
: enough?
...
【在 y******e 的大作中提到】
: I have a family plan (voice) with two line at ATT. Now I'm thinking of
: upgrading both lines to Iphone. Is there any family plan for data service?
: or I have to purchase separately the data plans for the two Iphone? Thanks...
: By the way, not sure if we should get 8G or 16G Iphone. Do you think 8G is
: enough?
w*r
8 楼
如果是很难做的endogenous CO-IP,不妨先用DSP crosslink一下再做，
虽然很多人鄙视这种corsslink后做出来的CO-IP结果，但只要做好各种control，我觉
得其实也还可以。
虽然很多人鄙视这种corsslink后做出来的CO-IP结果，但只要做好各种control，我觉
得其实也还可以。
g*t
9 楼
哈哈，co-围观！
s*e
10 楼
No family plan for data. You need to pay data service for each iPhone. 16g
is the minium for iPhone 4s and it is enough. If you go 4 old edition, 8g is
enough too.
...
【在 y******e 的大作中提到】
: I have a family plan (voice) with two line at ATT. Now I'm thinking of
: upgrading both lines to Iphone. Is there any family plan for data service?
: or I have to purchase separately the data plans for the two Iphone? Thanks...
: By the way, not sure if we should get 8G or 16G Iphone. Do you think 8G is
: enough?
is the minium for iPhone 4s and it is enough. If you go 4 old edition, 8g is
enough too.
...
【在 y******e 的大作中提到】
: I have a family plan (voice) with two line at ATT. Now I'm thinking of
: upgrading both lines to Iphone. Is there any family plan for data service?
: or I have to purchase separately the data plans for the two Iphone? Thanks...
: By the way, not sure if we should get 8G or 16G Iphone. Do you think 8G is
: enough?
w*r
11 楼
1.wash cell twice with PBS
2. incubate with DSP/DMSO/PBS solution for 20min at RT (freshly!!! prepared
DSP,2.5mg DSP-->480ul DMSO-->12ml PBS, final 200ug/ml DSP)
3. wash 2XPBS
4.incubate 5min with 50mM Glycine/PBS
5. wash with PBS
6. harvest cell in RIPA buffer with PIM, w/o DTT!!!， followed by CO-IP. Wash stringently with RIPA before WB.
Good luck!
【在 b*******n 的大作中提到】
: Hi folks,
: I am doing a CO-IP for an endogenous nuclear protein. I have tried several
: protocols with acid wash but have not
: been successful even once so far. Can anybody kindly share a protocol with
: me if it works for you? Or can
: anybody give suggestions for trouble shooting? Thank you!
2. incubate with DSP/DMSO/PBS solution for 20min at RT (freshly!!! prepared
DSP,2.5mg DSP-->480ul DMSO-->12ml PBS, final 200ug/ml DSP)
3. wash 2XPBS
4.incubate 5min with 50mM Glycine/PBS
5. wash with PBS
6. harvest cell in RIPA buffer with PIM, w/o DTT!!!， followed by CO-IP. Wash stringently with RIPA before WB.
Good luck!
【在 b*******n 的大作中提到】
: Hi folks,
: I am doing a CO-IP for an endogenous nuclear protein. I have tried several
: protocols with acid wash but have not
: been successful even once so far. Can anybody kindly share a protocol with
: me if it works for you? Or can
: anybody give suggestions for trouble shooting? Thank you!
r*d
12 楼
恩，小楼的楼一定要在地基留名！
【在 x******y 的大作中提到】
: 俺又躺着重枪了， 俺要找味精单挑，就单挑张国荣吧， 俺挺吃亏的， 完整的一首都
: 没听过， 所以味精先奔
: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
: 标 题: Re: 【原创】也来说说张国荣的音色、唱功以及其他
: 版务！！！
: 我强烈要求在【翻唱】，【原创】，【灌水】这些title之后
: 再加上【起哄】帖！！！
: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
: 标 题: Re: 【灌水】学习了睡鼠和味精童鞋关于哥哥的大作后。。。。
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 7 14:41:31 2012, 美东)
【在 x******y 的大作中提到】
: 俺又躺着重枪了， 俺要找味精单挑，就单挑张国荣吧， 俺挺吃亏的， 完整的一首都
: 没听过， 所以味精先奔
: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
: 标 题: Re: 【原创】也来说说张国荣的音色、唱功以及其他
: 版务！！！
: 我强烈要求在【翻唱】，【原创】，【灌水】这些title之后
: 再加上【起哄】帖！！！
: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
: 标 题: Re: 【灌水】学习了睡鼠和味精童鞋关于哥哥的大作后。。。。
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 7 14:41:31 2012, 美东)
c*r
13 楼
推荐pierce的这个kit：http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=01010345
也要cross link，对抗体量要求比较高。目前用着不错，但还没有做mass spec验证。
。。
也要cross link，对抗体量要求比较高。目前用着不错，但还没有做mass spec验证。
。。
l*e
14 楼
最近没跟贴的猫，都已经看不懂版上发生了事 lol
b*n
15 楼
Thank you a lot, guys!!!
i*w
16 楼
赞，这个单挑很有力
【在 x******y 的大作中提到】
: 俺又躺着重枪了， 俺要找味精单挑，就单挑张国荣吧， 俺挺吃亏的， 完整的一首都
: 没听过， 所以味精先奔
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: 版务！！！
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: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
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【在 x******y 的大作中提到】
: 俺又躺着重枪了， 俺要找味精单挑，就单挑张国荣吧， 俺挺吃亏的， 完整的一首都
: 没听过， 所以味精先奔
: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
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: 版务！！！
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: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
: 标 题: Re: 【灌水】学习了睡鼠和味精童鞋关于哥哥的大作后。。。。
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 7 14:41:31 2012, 美东)
b*n
17 楼
Do you know if this kit is also good for CO-IP?
Thank you.
【在 c*********r 的大作中提到】
: 推荐pierce的这个kit：http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=01010345
: 也要cross link，对抗体量要求比较高。目前用着不错，但还没有做mass spec验证。
: 。。
Thank you.
【在 c*********r 的大作中提到】
: 推荐pierce的这个kit：http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=01010345
: 也要cross link，对抗体量要求比较高。目前用着不错，但还没有做mass spec验证。
: 。。
i*w
18 楼
筷子美猫不要惊慌，故事梗概奏是校长和哥哥的粉有点掐架，还有起哄帮的在围观 lol
【在 l*******e 的大作中提到】
: 最近没跟贴的猫，都已经看不懂版上发生了事 lol
【在 l*******e 的大作中提到】
: 最近没跟贴的猫，都已经看不懂版上发生了事 lol
j*a
19 楼
I read through the link and the advantage of this product is basically they
eliminate the contamination of antibody fragments in the immunoblot
following IP. It will give you less non-specfic background of IG heavy and
light chain. It has nothing to do with your problem which is no band
detected. Also one biggest disadvantage of this product is that, when IP
antibody is immobilized to the beads, there is possibility that it gets de-
activated somehow. Bascially you tend to have negative results.
【在 b*******n 的大作中提到】
: Do you know if this kit is also good for CO-IP?
: Thank you.
eliminate the contamination of antibody fragments in the immunoblot
following IP. It will give you less non-specfic background of IG heavy and
light chain. It has nothing to do with your problem which is no band
detected. Also one biggest disadvantage of this product is that, when IP
antibody is immobilized to the beads, there is possibility that it gets de-
activated somehow. Bascially you tend to have negative results.
【在 b*******n 的大作中提到】
: Do you know if this kit is also good for CO-IP?
: Thank you.
l*e
20 楼
不惊慌，不惊慌
同搬小板凳围观两人pk翻唱
lol
【在 i*******w 的大作中提到】
: 筷子美猫不要惊慌，故事梗概奏是校长和哥哥的粉有点掐架，还有起哄帮的在围观 lol
同搬小板凳围观两人pk翻唱
lol
【在 i*******w 的大作中提到】
: 筷子美猫不要惊慌，故事梗概奏是校长和哥哥的粉有点掐架，还有起哄帮的在围观 lol
b*n
21 楼
Thanks!
Yes, that is exactly why I am asking this question.
they
【在 j*****a 的大作中提到】
: I read through the link and the advantage of this product is basically they
: eliminate the contamination of antibody fragments in the immunoblot
: following IP. It will give you less non-specfic background of IG heavy and
: light chain. It has nothing to do with your problem which is no band
: detected. Also one biggest disadvantage of this product is that, when IP
: antibody is immobilized to the beads, there is possibility that it gets de-
: activated somehow. Bascially you tend to have negative results.
Yes, that is exactly why I am asking this question.
they
【在 j*****a 的大作中提到】
: I read through the link and the advantage of this product is basically they
: eliminate the contamination of antibody fragments in the immunoblot
: following IP. It will give you less non-specfic background of IG heavy and
: light chain. It has nothing to do with your problem which is no band
: detected. Also one biggest disadvantage of this product is that, when IP
: antibody is immobilized to the beads, there is possibility that it gets de-
: activated somehow. Bascially you tend to have negative results.
a*u
22 楼
这个大家不要慌。
典故在这里：
话说台湾有个节目叫做“康熙来了”，
上节目的一半以上是通告艺人，
然后另外一半是为宣传电影，电视或者唱片新作
来上通告的艺人。
节目主持人有一个叫做小S的。
她经常没事就拿来宾开涮。
问一些不知所云的8g问题。
一开始我也不明就里啊，直到后来我才明白。
那叫收视点，就是说小S要是不待见某人啊，
那就整集节目不提那个人一个问题，结果就是
那人整集节目除了开始露一下脸，后面都隐形。
她要是要让某人有收视点，要让某人出彩啊，
她才猛提问题，插科打诨，还有开涮。
所以说，哈哈，意思估计是说清楚了。
【在 x******y 的大作中提到】
: 俺又躺着重枪了， 俺要找味精单挑，就单挑张国荣吧， 俺挺吃亏的， 完整的一首都
: 没听过， 所以味精先奔
: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
: 标 题: Re: 【原创】也来说说张国荣的音色、唱功以及其他
: 版务！！！
: 我强烈要求在【翻唱】，【原创】，【灌水】这些title之后
: 再加上【起哄】帖！！！
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: 标 题: Re: 【灌水】学习了睡鼠和味精童鞋关于哥哥的大作后。。。。
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 7 14:41:31 2012, 美东)
典故在这里：
话说台湾有个节目叫做“康熙来了”，
上节目的一半以上是通告艺人，
然后另外一半是为宣传电影，电视或者唱片新作
来上通告的艺人。
节目主持人有一个叫做小S的。
她经常没事就拿来宾开涮。
问一些不知所云的8g问题。
一开始我也不明就里啊，直到后来我才明白。
那叫收视点，就是说小S要是不待见某人啊，
那就整集节目不提那个人一个问题，结果就是
那人整集节目除了开始露一下脸，后面都隐形。
她要是要让某人有收视点，要让某人出彩啊，
她才猛提问题，插科打诨，还有开涮。
所以说，哈哈，意思估计是说清楚了。
【在 x******y 的大作中提到】
: 俺又躺着重枪了， 俺要找味精单挑，就单挑张国荣吧， 俺挺吃亏的， 完整的一首都
: 没听过， 所以味精先奔
: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
: 标 题: Re: 【原创】也来说说张国荣的音色、唱功以及其他
: 版务！！！
: 我强烈要求在【翻唱】，【原创】，【灌水】这些title之后
: 再加上【起哄】帖！！！
: 发信人: abbadozju (味精), 信区: Music
: 标 题: Re: 【灌水】学习了睡鼠和味精童鞋关于哥哥的大作后。。。。
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 7 14:41:31 2012, 美东)
c*r
23 楼
我目前用着还好，除了目的蛋白，还有至少三四个条带，目前正在分析中。。。
【在 b*******n 的大作中提到】
: Do you know if this kit is also good for CO-IP?
: Thank you.
【在 b*******n 的大作中提到】
: Do you know if this kit is also good for CO-IP?
: Thank you.
x*y
24 楼
这文字很有南怀瑾风格阿。 这么一说俺终于懂了， 原来是花花轿子人抬人啊。 那就
以歌会友吧， 哈哈。 俺抓紧学一只张国荣的歌
【在 a*******u 的大作中提到】
: 这个大家不要慌。
: 典故在这里：
: 话说台湾有个节目叫做“康熙来了”，
: 上节目的一半以上是通告艺人，
: 然后另外一半是为宣传电影，电视或者唱片新作
: 来上通告的艺人。
: 节目主持人有一个叫做小S的。
: 她经常没事就拿来宾开涮。
: 问一些不知所云的8g问题。
: 一开始我也不明就里啊，直到后来我才明白。
以歌会友吧， 哈哈。 俺抓紧学一只张国荣的歌
【在 a*******u 的大作中提到】
: 这个大家不要慌。
: 典故在这里：
: 话说台湾有个节目叫做“康熙来了”，
: 上节目的一半以上是通告艺人，
: 然后另外一半是为宣传电影，电视或者唱片新作
: 来上通告的艺人。
: 节目主持人有一个叫做小S的。
: 她经常没事就拿来宾开涮。
: 问一些不知所云的8g问题。
: 一开始我也不明就里啊，直到后来我才明白。
c*r
25 楼
能分享一下为什么很多人鄙视crosslink做出的co-IP吗？什么样的control比较好。我
用两种control：1. 没加抗体，只用Protain A/G的resin；2. 用同样动物（兔子）的
IgG，但是是不针对我的体系里任何蛋白的抗体，也就是non-relevant antibody。
【在 w********r 的大作中提到】
: 如果是很难做的endogenous CO-IP,不妨先用DSP crosslink一下再做，
: 虽然很多人鄙视这种corsslink后做出来的CO-IP结果，但只要做好各种control，我觉
: 得其实也还可以。
用两种control：1. 没加抗体，只用Protain A/G的resin；2. 用同样动物（兔子）的
IgG，但是是不针对我的体系里任何蛋白的抗体，也就是non-relevant antibody。
【在 w********r 的大作中提到】
: 如果是很难做的endogenous CO-IP,不妨先用DSP crosslink一下再做，
: 虽然很多人鄙视这种corsslink后做出来的CO-IP结果，但只要做好各种control，我觉
: 得其实也还可以。
a*u
26 楼
呵呵，小楼您先上！
哥哥滴歌我只会两句，风再吹起，吹起一地牛皮。。。
【在 x******y 的大作中提到】
: 这文字很有南怀瑾风格阿。 这么一说俺终于懂了， 原来是花花轿子人抬人啊。 那就
: 以歌会友吧， 哈哈。 俺抓紧学一只张国荣的歌
哥哥滴歌我只会两句，风再吹起，吹起一地牛皮。。。
【在 x******y 的大作中提到】
: 这文字很有南怀瑾风格阿。 这么一说俺终于懂了， 原来是花花轿子人抬人啊。 那就
: 以歌会友吧， 哈哈。 俺抓紧学一只张国荣的歌
c*r
27 楼
“there is possibility that it gets de-activated somehow”
我也觉得是有这个可能，不然这个kit不会要求10 ug左右的抗体。
以前做不用crosslink的做，好像只要1-2 ug就够了。。。
they
【在 j*****a 的大作中提到】
: I read through the link and the advantage of this product is basically they
: eliminate the contamination of antibody fragments in the immunoblot
: following IP. It will give you less non-specfic background of IG heavy and
: light chain. It has nothing to do with your problem which is no band
: detected. Also one biggest disadvantage of this product is that, when IP
: antibody is immobilized to the beads, there is possibility that it gets de-
: activated somehow. Bascially you tend to have negative results.
我也觉得是有这个可能，不然这个kit不会要求10 ug左右的抗体。
以前做不用crosslink的做，好像只要1-2 ug就够了。。。
they
【在 j*****a 的大作中提到】
: I read through the link and the advantage of this product is basically they
: eliminate the contamination of antibody fragments in the immunoblot
: following IP. It will give you less non-specfic background of IG heavy and
: light chain. It has nothing to do with your problem which is no band
: detected. Also one biggest disadvantage of this product is that, when IP
: antibody is immobilized to the beads, there is possibility that it gets de-
: activated somehow. Bascially you tend to have negative results.
g*t
28 楼
嫩的嗓子唱他的歌，应该会好听！
“这个可以有！”
-- by 味精
【在 x******y 的大作中提到】
: 这文字很有南怀瑾风格阿。 这么一说俺终于懂了， 原来是花花轿子人抬人啊。 那就
: 以歌会友吧， 哈哈。 俺抓紧学一只张国荣的歌
“这个可以有！”
-- by 味精
【在 x******y 的大作中提到】
: 这文字很有南怀瑾风格阿。 这么一说俺终于懂了， 原来是花花轿子人抬人啊。 那就
: 以歌会友吧， 哈哈。 俺抓紧学一只张国荣的歌
c*r
29 楼
还有一个问题，我是用银染检测的，你是用什么方法染胶？灵敏度有多高？这个也很关
键。^_^
键。^_^
a*u
30 楼
对，再上插件，变成“小楼”版滴哥哥滴歌！
【在 g*t 的大作中提到】
: 嫩的嗓子唱他的歌，应该会好听！
: “这个可以有！”
: -- by 味精
【在 g*t 的大作中提到】
: 嫩的嗓子唱他的歌，应该会好听！
: “这个可以有！”
: -- by 味精
b*n
31 楼
Really? I am actually doing the exact same experiment as you are.
Before, I used acid wash to get rid of non-specifc and IgG, but the silver
staining still runs terrible, which
makes the MS impossible. If you get only 3 or 4 bands, it is really awesome
!
Do you work on infected cultured-cells, or tissue? I am using tissue for my
experiment.
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我目前用着还好，除了目的蛋白，还有至少三四个条带，目前正在分析中。。。
Before, I used acid wash to get rid of non-specifc and IgG, but the silver
staining still runs terrible, which
makes the MS impossible. If you get only 3 or 4 bands, it is really awesome
!
Do you work on infected cultured-cells, or tissue? I am using tissue for my
experiment.
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我目前用着还好，除了目的蛋白，还有至少三四个条带，目前正在分析中。。。
C*l
32 楼
坐等欣赏两位的歌。。。
b*n
33 楼
I have a candidate protein, so I used it as positive control. I did western
blots to detect it, which should be
more sensitive than silver staining...
【在 c*********r 的大作中提到】
: 还有一个问题，我是用银染检测的，你是用什么方法染胶？灵敏度有多高？这个也很关
: 键。^_^
blots to detect it, which should be
more sensitive than silver staining...
【在 c*********r 的大作中提到】
: 还有一个问题，我是用银染检测的，你是用什么方法染胶？灵敏度有多高？这个也很关
: 键。^_^
x*y
34 楼
hahaha, 居然还有比俺还少会一句的， 俺会三句那个啥倩女幽魂， 当然别的歌都不会
【在 a*******u 的大作中提到】
: 呵呵，小楼您先上！
: 哥哥滴歌我只会两句，风再吹起，吹起一地牛皮。。。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 呵呵，小楼您先上！
: 哥哥滴歌我只会两句，风再吹起，吹起一地牛皮。。。
j*a
35 楼
what lysis buffer did you use? I am wondering if RIPA buffer/denature buffer
is okay for IP......
Do you know anything about this? THanks!
western
【在 b*******n 的大作中提到】
: I have a candidate protein, so I used it as positive control. I did western
: blots to detect it, which should be
: more sensitive than silver staining...
is okay for IP......
Do you know anything about this? THanks!
western
【在 b*******n 的大作中提到】
: I have a candidate protein, so I used it as positive control. I did western
: blots to detect it, which should be
: more sensitive than silver staining...
k*i
36 楼
我同意味精兄的提议
加上[起哄]和[单挑]两个类型
加上[起哄]和[单挑]两个类型
s*s
37 楼
buffer都要试的，背景比较强的就上1% Triton-X100, 甚至0.1%SDS，
比较弱的只能0.1% Tween啥的了
buffer
【在 j*****a 的大作中提到】
: what lysis buffer did you use? I am wondering if RIPA buffer/denature buffer
: is okay for IP......
: Do you know anything about this? THanks!
:
: western
比较弱的只能0.1% Tween啥的了
buffer
【在 j*****a 的大作中提到】
: what lysis buffer did you use? I am wondering if RIPA buffer/denature buffer
: is okay for IP......
: Do you know anything about this? THanks!
:
: western
a*u
38 楼
小楼，单挑来喽！！！
说风再起时，就风再起时。
因为是单挑，我就点到为止，
就唱一段差不多就好，哈哈哈。
风再起时 张国荣
曲：张国荣 词：陈少琪
我 回头再望某年
象失色照片 乍现眼前
这个茫然困惑少年
愿一生以歌 投入每天永不变
任旧日路上风声取笑我
任旧日万念俱灰也经过
我最爱的歌最后总算唱过
毋用再争取更多
风再起时 默默地这心不再计较与奔驰
我纵要依依带泪归去也愿意
珍贵岁月里 寻觅我心中的诗
风再起时 寂静夜深中想到你对我支持
再听见欢呼里在泣诉我谢意
虽已告别了 仍是有一丝暖意
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
以下我没有唱，呵呵。
～～～～～～～～～～～～～～～
我 浮沉了十数年
在星空里闪 带着惘然
请你容我别去前
赠出这阙歌 来日某天再相见
但愿用热烈掌声欢送我
在日后淡淡一生也不错
那暖暖双手最后可永远伴我
何用再得到更多
仍没有一丝悔意
【在 x******y 的大作中提到】
: hahaha, 居然还有比俺还少会一句的， 俺会三句那个啥倩女幽魂， 当然别的歌都不会
说风再起时，就风再起时。
因为是单挑，我就点到为止，
就唱一段差不多就好，哈哈哈。
风再起时 张国荣
曲：张国荣 词：陈少琪
我 回头再望某年
象失色照片 乍现眼前
这个茫然困惑少年
愿一生以歌 投入每天永不变
任旧日路上风声取笑我
任旧日万念俱灰也经过
我最爱的歌最后总算唱过
毋用再争取更多
风再起时 默默地这心不再计较与奔驰
我纵要依依带泪归去也愿意
珍贵岁月里 寻觅我心中的诗
风再起时 寂静夜深中想到你对我支持
再听见欢呼里在泣诉我谢意
虽已告别了 仍是有一丝暖意
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
以下我没有唱，呵呵。
～～～～～～～～～～～～～～～
我 浮沉了十数年
在星空里闪 带着惘然
请你容我别去前
赠出这阙歌 来日某天再相见
但愿用热烈掌声欢送我
在日后淡淡一生也不错
那暖暖双手最后可永远伴我
何用再得到更多
仍没有一丝悔意
【在 x******y 的大作中提到】
: hahaha, 居然还有比俺还少会一句的， 俺会三句那个啥倩女幽魂， 当然别的歌都不会
j*a
39 楼
I am not sure if I understand you well...I thought the difference of non-
ionic (NP40, Triton X100) and ionic (SDS, sodium deoxycholate) is non-ionic
lysis buffer doesn't denature protein. Some of the antibody that recognizes
only non-denature antigen (original state, you might want to say) so that
you can't get good results if you use denature lysis buffer (SDS) with these
antibodies. In anothe word, non-denature lysis buffer is more safe. Am I
wrong?
So I am confused with what you said about "high background uses triton or
SDS, low background is tween"...what does it mean? sorry, i am new to this
technique...
Thanks
【在 s******s 的大作中提到】
: buffer都要试的，背景比较强的就上1% Triton-X100, 甚至0.1%SDS，
: 比较弱的只能0.1% Tween啥的了
:
: buffer
ionic (NP40, Triton X100) and ionic (SDS, sodium deoxycholate) is non-ionic
lysis buffer doesn't denature protein. Some of the antibody that recognizes
only non-denature antigen (original state, you might want to say) so that
you can't get good results if you use denature lysis buffer (SDS) with these
antibodies. In anothe word, non-denature lysis buffer is more safe. Am I
wrong?
So I am confused with what you said about "high background uses triton or
SDS, low background is tween"...what does it mean? sorry, i am new to this
technique...
Thanks
【在 s******s 的大作中提到】
: buffer都要试的，背景比较强的就上1% Triton-X100, 甚至0.1%SDS，
: 比较弱的只能0.1% Tween啥的了
:
: buffer
x*y
40 楼
完了， 味精哥太猛了， 俺这次单挑踢到铁板上了
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
c*r
41 楼
我没有用过acid wash，我都是按照那个kit的protocol来的，用lysis buffer或者TBS
wash。其实我的银染的条带也目前也没有用western检测到，同实验室的博后检测到过
，但是需要蛋白上样量是我银染的五倍才勉强看到一条带。我们是用Li-Cor Odyssey的
Infrared western，理论上和银染灵敏度相当，但我持怀疑态度。上一个图片，背景比
较大，左边的是对照，右边的是IP，银染，按照kit的protocol的第二次的elution，10
ul上样量。
awesome
my
【在 b*******n 的大作中提到】
: Really? I am actually doing the exact same experiment as you are.
: Before, I used acid wash to get rid of non-specifc and IgG, but the silver
: staining still runs terrible, which
: makes the MS impossible. If you get only 3 or 4 bands, it is really awesome
: !
: Do you work on infected cultured-cells, or tissue? I am using tissue for my
: experiment.
wash。其实我的银染的条带也目前也没有用western检测到，同实验室的博后检测到过
，但是需要蛋白上样量是我银染的五倍才勉强看到一条带。我们是用Li-Cor Odyssey的
Infrared western，理论上和银染灵敏度相当，但我持怀疑态度。上一个图片，背景比
较大，左边的是对照，右边的是IP，银染，按照kit的protocol的第二次的elution，10
ul上样量。
awesome
my
【在 b*******n 的大作中提到】
: Really? I am actually doing the exact same experiment as you are.
: Before, I used acid wash to get rid of non-specifc and IgG, but the silver
: staining still runs terrible, which
: makes the MS impossible. If you get only 3 or 4 bands, it is really awesome
: !
: Do you work on infected cultured-cells, or tissue? I am using tissue for my
: experiment.
a*u
42 楼
呵呵，反正你说的我做完了，
剩下滴嘛，哈哈哈。
【在 x******y 的大作中提到】
: 完了， 味精哥太猛了， 俺这次单挑踢到铁板上了
剩下滴嘛，哈哈哈。
【在 x******y 的大作中提到】
: 完了， 味精哥太猛了， 俺这次单挑踢到铁板上了
c*r
43 楼
我用的是sea urchin eggs，所有蛋白都是纯天然的。^_^ 不是转染、过表达的。一个
IP用2mg到8mg total protein。起始细胞重量大概是总蛋白的10倍左右。
awesome
my
【在 b*******n 的大作中提到】
: Really? I am actually doing the exact same experiment as you are.
: Before, I used acid wash to get rid of non-specifc and IgG, but the silver
: staining still runs terrible, which
: makes the MS impossible. If you get only 3 or 4 bands, it is really awesome
: !
: Do you work on infected cultured-cells, or tissue? I am using tissue for my
: experiment.
IP用2mg到8mg total protein。起始细胞重量大概是总蛋白的10倍左右。
awesome
my
【在 b*******n 的大作中提到】
: Really? I am actually doing the exact same experiment as you are.
: Before, I used acid wash to get rid of non-specifc and IgG, but the silver
: staining still runs terrible, which
: makes the MS impossible. If you get only 3 or 4 bands, it is really awesome
: !
: Do you work on infected cultured-cells, or tissue? I am using tissue for my
: experiment.
x*y
44 楼
这歌真的让俺回到了年轻的时候。。。满心惆怅欲哭无泪
j*a
45 楼
which one is your target protein band? biggest band?
TBS
10
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我没有用过acid wash，我都是按照那个kit的protocol来的，用lysis buffer或者TBS
: wash。其实我的银染的条带也目前也没有用western检测到，同实验室的博后检测到过
: ，但是需要蛋白上样量是我银染的五倍才勉强看到一条带。我们是用Li-Cor Odyssey的
: Infrared western，理论上和银染灵敏度相当，但我持怀疑态度。上一个图片，背景比
: 较大，左边的是对照，右边的是IP，银染，按照kit的protocol的第二次的elution，10
: ul上样量。
:
: awesome
: my
TBS
10
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我没有用过acid wash，我都是按照那个kit的protocol来的，用lysis buffer或者TBS
: wash。其实我的银染的条带也目前也没有用western检测到，同实验室的博后检测到过
: ，但是需要蛋白上样量是我银染的五倍才勉强看到一条带。我们是用Li-Cor Odyssey的
: Infrared western，理论上和银染灵敏度相当，但我持怀疑态度。上一个图片，背景比
: 较大，左边的是对照，右边的是IP，银染，按照kit的protocol的第二次的elution，10
: ul上样量。
:
: awesome
: my
r*d
46 楼
恩，我看好味精哥，他的声线和感觉和哥哥像。。
你唱的好，但是没奔过沙哑忧郁的作品。侬危险了！
【在 x******y 的大作中提到】
: 完了， 味精哥太猛了， 俺这次单挑踢到铁板上了
你唱的好，但是没奔过沙哑忧郁的作品。侬危险了！
【在 x******y 的大作中提到】
: 完了， 味精哥太猛了， 俺这次单挑踢到铁板上了
c*r
47 楼
红箭头所示。其实这个条带的大小和预计的以及以前western的结果一致，我还需要再
做一次IP的western来确认。
【在 j*****a 的大作中提到】
: which one is your target protein band? biggest band?
:
: TBS
: 10
做一次IP的western来确认。
【在 j*****a 的大作中提到】
: which one is your target protein band? biggest band?
:
: TBS
: 10
s*3
48 楼
吼犀利噶！！！ 味精哥广东瓦吼小楼噶！！！声线吼似哥哥噶！！！
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
b*n
49 楼
pretty!
However, the heavy band in the middle and at the bottom still look like
heavy chain and light chain. Have you
checked their MW and are they ? If yes, isn't that the kits suppose to get rid of the heavy
and light chain stuff?
TBS
10
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我没有用过acid wash，我都是按照那个kit的protocol来的，用lysis buffer或者TBS
: wash。其实我的银染的条带也目前也没有用western检测到，同实验室的博后检测到过
: ，但是需要蛋白上样量是我银染的五倍才勉强看到一条带。我们是用Li-Cor Odyssey的
: Infrared western，理论上和银染灵敏度相当，但我持怀疑态度。上一个图片，背景比
: 较大，左边的是对照，右边的是IP，银染，按照kit的protocol的第二次的elution，10
: ul上样量。
:
: awesome
: my
However, the heavy band in the middle and at the bottom still look like
heavy chain and light chain. Have you
checked their MW and are they ? If yes, isn't that the kits suppose to get rid of the heavy
and light chain stuff?
TBS
10
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我没有用过acid wash，我都是按照那个kit的protocol来的，用lysis buffer或者TBS
: wash。其实我的银染的条带也目前也没有用western检测到，同实验室的博后检测到过
: ，但是需要蛋白上样量是我银染的五倍才勉强看到一条带。我们是用Li-Cor Odyssey的
: Infrared western，理论上和银染灵敏度相当，但我持怀疑态度。上一个图片，背景比
: 较大，左边的是对照，右边的是IP，银染，按照kit的protocol的第二次的elution，10
: ul上样量。
:
: awesome
: my
s*o
50 楼
LOL
【在 x******y 的大作中提到】
: 完了， 味精哥太猛了， 俺这次单挑踢到铁板上了
【在 x******y 的大作中提到】
: 完了， 味精哥太猛了， 俺这次单挑踢到铁板上了
s*s
51 楼
嗯，我没想过这个denature的问题。
对我来说，non-ionic对lipid作用比较强，对蛋白－蛋白作用弱，所以能去除比较弱
的蛋白相互作用。ionic的分离蛋白作用强点，0.1%SDS还是很稀，不至于蛋白全变性，
能够去掉中等的相互作用，并且溶解一下不好溶的蛋白。
ionic
recognizes
these
【在 j*****a 的大作中提到】
: I am not sure if I understand you well...I thought the difference of non-
: ionic (NP40, Triton X100) and ionic (SDS, sodium deoxycholate) is non-ionic
: lysis buffer doesn't denature protein. Some of the antibody that recognizes
: only non-denature antigen (original state, you might want to say) so that
: you can't get good results if you use denature lysis buffer (SDS) with these
: antibodies. In anothe word, non-denature lysis buffer is more safe. Am I
: wrong?
: So I am confused with what you said about "high background uses triton or
: SDS, low background is tween"...what does it mean? sorry, i am new to this
: technique...
对我来说，non-ionic对lipid作用比较强，对蛋白－蛋白作用弱，所以能去除比较弱
的蛋白相互作用。ionic的分离蛋白作用强点，0.1%SDS还是很稀，不至于蛋白全变性，
能够去掉中等的相互作用，并且溶解一下不好溶的蛋白。
ionic
recognizes
these
【在 j*****a 的大作中提到】
: I am not sure if I understand you well...I thought the difference of non-
: ionic (NP40, Triton X100) and ionic (SDS, sodium deoxycholate) is non-ionic
: lysis buffer doesn't denature protein. Some of the antibody that recognizes
: only non-denature antigen (original state, you might want to say) so that
: you can't get good results if you use denature lysis buffer (SDS) with these
: antibodies. In anothe word, non-denature lysis buffer is more safe. Am I
: wrong?
: So I am confused with what you said about "high background uses triton or
: SDS, low background is tween"...what does it mean? sorry, i am new to this
: technique...
a*u
52 楼
没有没有，小楼的干声大家都听过了，
有料的。
不过我今天不容易啊，30%off的Kohl's让我跑了好几趟，
哈哈哈，只能录半首了就。
【在 r********d 的大作中提到】
: 恩，我看好味精哥，他的声线和感觉和哥哥像。。
: 你唱的好，但是没奔过沙哑忧郁的作品。侬危险了！
有料的。
不过我今天不容易啊，30%off的Kohl's让我跑了好几趟，
哈哈哈，只能录半首了就。
【在 r********d 的大作中提到】
: 恩，我看好味精哥，他的声线和感觉和哥哥像。。
: 你唱的好，但是没奔过沙哑忧郁的作品。侬危险了！
w*r
53 楼
真的猛男只关心那些巨强无比怎么洗也洗不散的强binding，
对需要corsslink才能做出来的当然就不屑了
【在 c*********r 的大作中提到】
: 能分享一下为什么很多人鄙视crosslink做出的co-IP吗？什么样的control比较好。我
: 用两种control：1. 没加抗体，只用Protain A/G的resin；2. 用同样动物（兔子）的
: IgG，但是是不针对我的体系里任何蛋白的抗体，也就是non-relevant antibody。
对需要corsslink才能做出来的当然就不屑了
【在 c*********r 的大作中提到】
: 能分享一下为什么很多人鄙视crosslink做出的co-IP吗？什么样的control比较好。我
: 用两种control：1. 没加抗体，只用Protain A/G的resin；2. 用同样动物（兔子）的
: IgG，但是是不针对我的体系里任何蛋白的抗体，也就是non-relevant antibody。
s*3
54 楼
花生版的mm们扫货以后都会奔真人搭配的！！！！
【在 a*******u 的大作中提到】
: 没有没有，小楼的干声大家都听过了，
: 有料的。
: 不过我今天不容易啊，30%off的Kohl's让我跑了好几趟，
: 哈哈哈，只能录半首了就。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 没有没有，小楼的干声大家都听过了，
: 有料的。
: 不过我今天不容易啊，30%off的Kohl's让我跑了好几趟，
: 哈哈哈，只能录半首了就。
b*n
55 楼
haha, I love this!
【在 w********r 的大作中提到】
: 真的猛男只关心那些巨强无比怎么洗也洗不散的强binding，
: 对需要corsslink才能做出来的当然就不屑了
【在 w********r 的大作中提到】
: 真的猛男只关心那些巨强无比怎么洗也洗不散的强binding，
: 对需要corsslink才能做出来的当然就不屑了
r*d
56 楼
意图很明显啊，让小楼录下半首呗，嘿嘿。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 没有没有，小楼的干声大家都听过了，
: 有料的。
: 不过我今天不容易啊，30%off的Kohl's让我跑了好几趟，
: 哈哈哈，只能录半首了就。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 没有没有，小楼的干声大家都听过了，
: 有料的。
: 不过我今天不容易啊，30%off的Kohl's让我跑了好几趟，
: 哈哈哈，只能录半首了就。
s*s
57 楼
上次谁说来着，真正的co-ip就是pull down下来，然后用最gentle的条件
稍微洗一次，马上趁热呼上样来着
【在 w********r 的大作中提到】
: 真的猛男只关心那些巨强无比怎么洗也洗不散的强binding，
: 对需要corsslink才能做出来的当然就不屑了
稍微洗一次，马上趁热呼上样来着
【在 w********r 的大作中提到】
: 真的猛男只关心那些巨强无比怎么洗也洗不散的强binding，
: 对需要corsslink才能做出来的当然就不屑了
x*y
58 楼
这个真心一句都不会。。。掩面奔逃
【在 r********d 的大作中提到】
: 意图很明显啊，让小楼录下半首呗，嘿嘿。
【在 r********d 的大作中提到】
: 意图很明显啊，让小楼录下半首呗，嘿嘿。
c*r
59 楼
You are right. 我觉得中间的也是heavy chain。但是我觉得原因是这样的，抗体放久
了有些聚集，crosslink时大部分交联了，部分还是和其它的抗体结合在一起，然后被
我洗脱下来了。我猜是这个原因是因为重复用过几次的Resin再用的话就没有这个现象
了。
rid of the heavy
【在 b*******n 的大作中提到】
: pretty!
: However, the heavy band in the middle and at the bottom still look like
: heavy chain and light chain. Have you
: checked their MW and are they ? If yes, isn't that the kits suppose to get rid of the heavy
: and light chain stuff?
:
: TBS
: 10
了有些聚集，crosslink时大部分交联了，部分还是和其它的抗体结合在一起，然后被
我洗脱下来了。我猜是这个原因是因为重复用过几次的Resin再用的话就没有这个现象
了。
rid of the heavy
【在 b*******n 的大作中提到】
: pretty!
: However, the heavy band in the middle and at the bottom still look like
: heavy chain and light chain. Have you
: checked their MW and are they ? If yes, isn't that the kits suppose to get rid of the heavy
: and light chain stuff?
:
: TBS
: 10
a*u
60 楼
我我我，我不是花生，
我是黄飞鸿，辣花生！！！
【在 s*********3 的大作中提到】
: 花生版的mm们扫货以后都会奔真人搭配的！！！！
我是黄飞鸿，辣花生！！！
【在 s*********3 的大作中提到】
: 花生版的mm们扫货以后都会奔真人搭配的！！！！
c*r
61 楼
我想我明白了你说的crosslink和我说的crosslink不是一个东东。。。
我说的是把抗体和beads上的protein A/G交联起来，你可能是指把IP complex里的所有
protein crosslink吧。
不知道我说的对不对。^_^
【在 w********r 的大作中提到】
: 真的猛男只关心那些巨强无比怎么洗也洗不散的强binding，
: 对需要corsslink才能做出来的当然就不屑了
我说的是把抗体和beads上的protein A/G交联起来，你可能是指把IP complex里的所有
protein crosslink吧。
不知道我说的对不对。^_^
【在 w********r 的大作中提到】
: 真的猛男只关心那些巨强无比怎么洗也洗不散的强binding，
: 对需要corsslink才能做出来的当然就不屑了
a*u
62 楼
倩女幽魂这个可以有，哈哈哈。
【在 x******y 的大作中提到】
: 这个真心一句都不会。。。掩面奔逃
【在 x******y 的大作中提到】
: 这个真心一句都不会。。。掩面奔逃
w*r
63 楼
是的，你得到了它：）
LZ问题是CO-IP拖不下东西来要怎么优化。
那么用DSP把细胞内的蛋白连一下，一些比较弱或者transient的binding可以被固定住
，比较容易检测一点，也不用费劲去优化各种buffer的条件——虽然很多人看不上这种
CO-IP.
至于你们讨论的抗体和beads crosslink 可以消除IgG chains，但同时会导致抗体结合的效率更加低。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我想我明白了你说的crosslink和我说的crosslink不是一个东东。。。
: 我说的是把抗体和beads上的protein A/G交联起来，你可能是指把IP complex里的所有
: protein crosslink吧。
: 不知道我说的对不对。^_^
LZ问题是CO-IP拖不下东西来要怎么优化。
那么用DSP把细胞内的蛋白连一下，一些比较弱或者transient的binding可以被固定住
，比较容易检测一点，也不用费劲去优化各种buffer的条件——虽然很多人看不上这种
CO-IP.
至于你们讨论的抗体和beads crosslink 可以消除IgG chains，但同时会导致抗体结合的效率更加低。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我想我明白了你说的crosslink和我说的crosslink不是一个东东。。。
: 我说的是把抗体和beads上的protein A/G交联起来，你可能是指把IP complex里的所有
: protein crosslink吧。
: 不知道我说的对不对。^_^
D*u
64 楼
鼓掌，撒花！
“任旧日路上风声取笑我”里的“我”字味道太足啦！
搬板凳继续围观~
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
“任旧日路上风声取笑我”里的“我”字味道太足啦！
搬板凳继续围观~
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
a*u
65 楼
嘿嘿，小楼发了一把小刀，
然后他又不接招，那我也没有办法啊，哈哈哈。
【在 D******u 的大作中提到】
: 鼓掌，撒花！
: “任旧日路上风声取笑我”里的“我”字味道太足啦！
: 搬板凳继续围观~
然后他又不接招，那我也没有办法啊，哈哈哈。
【在 D******u 的大作中提到】
: 鼓掌，撒花！
: “任旧日路上风声取笑我”里的“我”字味道太足啦！
: 搬板凳继续围观~
s*3
66 楼
辣花生！！！ 有人是在bso自己 hot 么？？？！！！
【在 a*******u 的大作中提到】
: 我我我，我不是花生，
: 我是黄飞鸿，辣花生！！！
【在 a*******u 的大作中提到】
: 我我我，我不是花生，
: 我是黄飞鸿，辣花生！！！
a*u
67 楼
主要是创下了一口气吃掉一包的记录，所有的料哦。
辣椒，花椒，还有花生。
火气太重了。。。
【在 s*********3 的大作中提到】
: 辣花生！！！ 有人是在bso自己 hot 么？？？！！！
辣椒，花椒，还有花生。
火气太重了。。。
【在 s*********3 的大作中提到】
: 辣花生！！！ 有人是在bso自己 hot 么？？？！！！
s*3
68 楼
这个楼里分明弥漫着高手对决前那种凛冽的杀气....狂风！！落叶！！剑招！！！
【在 a*******u 的大作中提到】
: 主要是创下了一口气吃掉一包的记录，所有的料哦。
: 辣椒，花椒，还有花生。
: 火气太重了。。。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 主要是创下了一口气吃掉一包的记录，所有的料哦。
: 辣椒，花椒，还有花生。
: 火气太重了。。。
l*y
69 楼
这个唱得好好听哦，小楼恐怕一点粤语都不会吧？
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
l*y
70 楼
ＬＯＬ
这个形容得恰如其分啊，让我们翘首以待小楼版！
【在 s*********3 的大作中提到】
: 这个楼里分明弥漫着高手对决前那种凛冽的杀气....狂风！！落叶！！剑招！！！
这个形容得恰如其分啊，让我们翘首以待小楼版！
【在 s*********3 的大作中提到】
: 这个楼里分明弥漫着高手对决前那种凛冽的杀气....狂风！！落叶！！剑招！！！
x*y
71 楼
好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
张国荣:倩女幽魂
人生路美梦似路长
路里风霜风霜扑面干
红尘里美梦有几多方向
找痴痴梦幻中心爱
路随人茫茫
(后面的不会)
【在 a*******u 的大作中提到】
: 嘿嘿，小楼发了一把小刀，
: 然后他又不接招，那我也没有办法啊，哈哈哈。
张国荣:倩女幽魂
人生路美梦似路长
路里风霜风霜扑面干
红尘里美梦有几多方向
找痴痴梦幻中心爱
路随人茫茫
(后面的不会)
【在 a*******u 的大作中提到】
: 嘿嘿，小楼发了一把小刀，
: 然后他又不接招，那我也没有办法啊，哈哈哈。
O*r
72 楼
大赞味精，已经很有那个味道了。
如果能静下心来把整首唱完就更好了。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
如果能静下心来把整首唱完就更好了。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
r*d
73 楼
小楼这个粤语是第一次唱吗？有模有样的！
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
l*y
74 楼
不错！学得好快啊，呱唧呱唧～～
肿么一个比一个短啊，单挑肿么都不注意作品的完整啮？
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
肿么一个比一个短啊，单挑肿么都不注意作品的完整啮？
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
x*y
75 楼
粤语不会阿。 俺刚才真心嘴里说成了 : 饿语
【在 l****y 的大作中提到】
: 不错！学得好快啊，呱唧呱唧～～
: 肿么一个比一个短啊，单挑肿么都不注意作品的完整啮？
【在 l****y 的大作中提到】
: 不错！学得好快啊，呱唧呱唧～～
: 肿么一个比一个短啊，单挑肿么都不注意作品的完整啮？
O*r
76 楼
发音很不错了耶。
【在 x******y 的大作中提到】
: 粤语不会阿。 俺刚才真心嘴里说成了 : 饿语
【在 x******y 的大作中提到】
: 粤语不会阿。 俺刚才真心嘴里说成了 : 饿语
l*y
77 楼
不简单，俄语都无师自通了，嘿嘿
【在 x******y 的大作中提到】
: 粤语不会阿。 俺刚才真心嘴里说成了 : 饿语
【在 x******y 的大作中提到】
: 粤语不会阿。 俺刚才真心嘴里说成了 : 饿语
s*o
78 楼
俺肿么听着像越语？
【在 x******y 的大作中提到】
: 粤语不会阿。 俺刚才真心嘴里说成了 : 饿语
【在 x******y 的大作中提到】
: 粤语不会阿。 俺刚才真心嘴里说成了 : 饿语
r*d
79 楼
我最fan三多的幽默风格！
【在 s*****o 的大作中提到】
: 俺肿么听着像越语？
【在 s*****o 的大作中提到】
: 俺肿么听着像越语？
s*o
80 楼
唉，俺老耳昏花啊~~
【在 r********d 的大作中提到】
: 我最fan三多的幽默风格！
【在 r********d 的大作中提到】
: 我最fan三多的幽默风格！
x*y
81 楼
越语啊， 那还好，没跑出东南亚。。。比如刚果土著语啥的
【在 s*****o 的大作中提到】
: 俺肿么听着像越语？
【在 s*****o 的大作中提到】
: 俺肿么听着像越语？
x*y
82 楼
超级猫在花生奔过么？
【在 s*********3 的大作中提到】
: 花生版的mm们扫货以后都会奔真人搭配的！！！！
【在 s*********3 的大作中提到】
: 花生版的mm们扫货以后都会奔真人搭配的！！！！
r*d
83 楼
花生版是啥版？
【在 x******y 的大作中提到】
: 超级猫在花生奔过么？
【在 x******y 的大作中提到】
: 超级猫在花生奔过么？
l*y
84 楼
ｆａｓｈｉｏｎ谐音粤语 花生
【在 r********d 的大作中提到】
: 花生版是啥版？
【在 r********d 的大作中提到】
: 花生版是啥版？
s*3
85 楼
地球人都知道，我的荧屏处女秀献给了天籁啊！！！
【在 x******y 的大作中提到】
: 超级猫在花生奔过么？
【在 x******y 的大作中提到】
: 超级猫在花生奔过么？
x*y
86 楼
俺觉得是fashion的唐人街发音， 花生
【在 l****y 的大作中提到】
: ｆａｓｈｉｏｎ谐音粤语 花生
【在 l****y 的大作中提到】
: ｆａｓｈｉｏｎ谐音粤语 花生
r*d
87 楼
嘛时候得事儿，我肿么没有见过！重新奔！
【在 s*********3 的大作中提到】
: 地球人都知道，我的荧屏处女秀献给了天籁啊！！！
【在 s*********3 的大作中提到】
: 地球人都知道，我的荧屏处女秀献给了天籁啊！！！
D*u
88 楼
第一句真赞！后面露馅啦，哈哈~
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
a*u
89 楼
赞小楼！
很有架势！
有转音！
唯一就是比我唱得还少，哈哈哈。
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
很有架势！
有转音！
唯一就是比我唱得还少，哈哈哈。
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
r*d
90 楼
哈哈，话说四句我都不好意思跟人打招呼。
那天我录了四句梦回唐朝都美好意思奔。。。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 赞小楼！
: 很有架势！
: 有转音！
: 唯一就是比我唱得还少，哈哈哈。
那天我录了四句梦回唐朝都美好意思奔。。。
【在 a*******u 的大作中提到】
: 赞小楼！
: 很有架势！
: 有转音！
: 唯一就是比我唱得还少，哈哈哈。
x*y
91 楼
那当然、， 抬头看仔细帖子分类
【在 r********d 的大作中提到】
: 哈哈，话说四句我都不好意思跟人打招呼。
: 那天我录了四句梦回唐朝都美好意思奔。。。
【在 r********d 的大作中提到】
: 哈哈，话说四句我都不好意思跟人打招呼。
: 那天我录了四句梦回唐朝都美好意思奔。。。
c*n
92 楼
哈哈，这种楼以后可以多盖，这个气氛太好了。
月圆之夜，紫金城颠，一剑西来，天外飞仙！
月圆之夜，紫金城颠，一剑西来，天外飞仙！
s*o
93 楼
令俺想起了那句电影台词：
春天来了，
万物复苏，
冰河解冻，
彩蝶纷飞，
狗熊撒欢，
这是个
单挑 的
好季节
春天来了，
万物复苏，
冰河解冻，
彩蝶纷飞，
狗熊撒欢，
这是个
单挑 的
好季节
k*i
94 楼
你这解说的意境不错
叶孤城与西门吹雪
or苗人风和胡斐
【在 s*********3 的大作中提到】
: 这个楼里分明弥漫着高手对决前那种凛冽的杀气....狂风！！落叶！！剑招！！！
叶孤城与西门吹雪
or苗人风和胡斐
【在 s*********3 的大作中提到】
: 这个楼里分明弥漫着高手对决前那种凛冽的杀气....狂风！！落叶！！剑招！！！
g*t
95 楼
嘿嘿。。。
前两天惊蛰刚刚过！:-)
三多你要准备奔一个和“春”有关的小曲！！
【在 s*****o 的大作中提到】
: 令俺想起了那句电影台词：
: 春天来了，
: 万物复苏，
: 冰河解冻，
: 彩蝶纷飞，
: 狗熊撒欢，
: 这是个
: 单挑 的
: 好季节
前两天惊蛰刚刚过！:-)
三多你要准备奔一个和“春”有关的小曲！！
【在 s*****o 的大作中提到】
: 令俺想起了那句电影台词：
: 春天来了，
: 万物复苏，
: 冰河解冻，
: 彩蝶纷飞，
: 狗熊撒欢，
: 这是个
: 单挑 的
: 好季节
k*i
96 楼
唱得非常好！
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
j*t
97 楼
这楼藏得够深
幸好今天有空爬了爬
味精哥的广东瓦一听就是听着校长，哥哥长大的那一批
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
幸好今天有空爬了爬
味精哥的广东瓦一听就是听着校长，哥哥长大的那一批
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
j*t
98 楼
哇，小楼这个太正了，太正了
味精哥鸭梨山大啊
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
味精哥鸭梨山大啊
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
b*a
99 楼
哇塞，真猛啊
好听好听
但是都只唱这么少啊，太欺负人了
好听好听
但是都只唱这么少啊，太欺负人了
a*u
100 楼
哈哈哈，我们这个叫做灌水+单挑帖。
所以要是唱完整了，就是翻唱帖了。
还有就是，
我们小时候听评书，都知道，玩枪作为兵器的，
都是一寸长，一寸强；
但是说到唱歌单挑，咱还是唱得少一点比较好，
不太容易出错啊，哈哈哈。
光我这一段，我先学了几十次，然后再take了十几次，
不容易啊。
【在 b*******a 的大作中提到】
: 哇塞，真猛啊
: 好听好听
: 但是都只唱这么少啊，太欺负人了
所以要是唱完整了，就是翻唱帖了。
还有就是，
我们小时候听评书，都知道，玩枪作为兵器的，
都是一寸长，一寸强；
但是说到唱歌单挑，咱还是唱得少一点比较好，
不太容易出错啊，哈哈哈。
光我这一段，我先学了几十次，然后再take了十几次，
不容易啊。
【在 b*******a 的大作中提到】
: 哇塞，真猛啊
: 好听好听
: 但是都只唱这么少啊，太欺负人了
C*l
101 楼
赞啊！
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
【在 a*******u 的大作中提到】
: 小楼，单挑来喽！！！
: 说风再起时，就风再起时。
: 因为是单挑，我就点到为止，
: 就唱一段差不多就好，哈哈哈。
: 风再起时 张国荣
: 曲：张国荣 词：陈少琪
: 我 回头再望某年
: 象失色照片 乍现眼前
: 这个茫然困惑少年
: 愿一生以歌 投入每天永不变
C*l
102 楼
味道正！
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
x*y
103 楼
通过在班上学习， 发现原来哥哥90年以前唱的和以后的不大一样。 90以后低音个多一
些胸声多一些。 俺印象都是90以后哥哥的歌声
些胸声多一些。 俺印象都是90以后哥哥的歌声
g*t
104 楼
原来嫩是个 90 后！！
【在 x******y 的大作中提到】
: 通过在班上学习， 发现原来哥哥90年以前唱的和以后的不大一样。 90以后低音个多一
: 些胸声多一些。 俺印象都是90以后哥哥的歌声
【在 x******y 的大作中提到】
: 通过在班上学习， 发现原来哥哥90年以前唱的和以后的不大一样。 90以后低音个多一
: 些胸声多一些。 俺印象都是90以后哥哥的歌声
x*y
105 楼
俺确实90以后才听过一些哥哥的歌， 所以也是90后。 哈哈。 乡下孩子条件差，和城
里的木筏比阿
【在 g*t 的大作中提到】
: 原来嫩是个 90 后！！
里的木筏比阿
【在 g*t 的大作中提到】
: 原来嫩是个 90 后！！
a*u
106 楼
刚才另外帖子我还说到城乡差别来着。
当年确实是条件差别随地方比较大。
所以我一到美国，就买了把电吉他，
不过接着就是收藏了十年，去年才拿出来弹了几下棉花，哈哈。
【在 x******y 的大作中提到】
: 俺确实90以后才听过一些哥哥的歌， 所以也是90后。 哈哈。 乡下孩子条件差，和城
: 里的木筏比阿
当年确实是条件差别随地方比较大。
所以我一到美国，就买了把电吉他，
不过接着就是收藏了十年，去年才拿出来弹了几下棉花，哈哈。
【在 x******y 的大作中提到】
: 俺确实90以后才听过一些哥哥的歌， 所以也是90后。 哈哈。 乡下孩子条件差，和城
: 里的木筏比阿
H*r
107 楼
很不错叻，特别第一句，后面有点露馅，haha
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
【在 x******y 的大作中提到】
: 好吧， 踢到铁板也要上啊。火速学了 1/4 倩女幽魂
: 张国荣:倩女幽魂
: 人生路美梦似路长
: 路里风霜风霜扑面干
: 红尘里美梦有几多方向
: 找痴痴梦幻中心爱
: 路随人茫茫
: (后面的不会)
s*o
108 楼
俺老在这儿奔，岂不成了第三者插足乐～～
再说，俺也不会越语啊，赫赫
【在 g*t 的大作中提到】
: 嘿嘿。。。
: 前两天惊蛰刚刚过！:-)
: 三多你要准备奔一个和“春”有关的小曲！！
再说，俺也不会越语啊，赫赫
【在 g*t 的大作中提到】
: 嘿嘿。。。
: 前两天惊蛰刚刚过！:-)
: 三多你要准备奔一个和“春”有关的小曲！！
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