c*9
2 楼
我正在做一种固氮菌的酶切。chromosome材料应该没问题的，quantification是200ng/
ul.所以我用了5ul的chromosome, 1ul EcoR1， 4ul Eco buffer， 30ul diH2O.再分开
入4个小试管里面，保存在37度的水浴里面分别5MIN, 30MIN, 1H, 2H,然后移入65度的
水浴30分钟，再跑胶，但是做了2次，发现DNA都没有被切开。然后换了HindIII和NEB
Buffer2,结果也是没有切开。请教各位这个是哪个环节出问题了呢？是否有更好的办法
做酶切呢？谢谢。
ul.所以我用了5ul的chromosome, 1ul EcoR1， 4ul Eco buffer， 30ul diH2O.再分开
入4个小试管里面，保存在37度的水浴里面分别5MIN, 30MIN, 1H, 2H,然后移入65度的
水浴30分钟，再跑胶，但是做了2次，发现DNA都没有被切开。然后换了HindIII和NEB
Buffer2,结果也是没有切开。请教各位这个是哪个环节出问题了呢？是否有更好的办法
做酶切呢？谢谢。
a*a
3 楼
rp wenti
【在 c*****h 的大作中提到】
: att的4s，冲了一晚上了，最多只能到99%，而且感觉掉电比4快。。。。
: 需要去苹果店换一个吗？
【在 c*****h 的大作中提到】
: att的4s，冲了一晚上了，最多只能到99%，而且感觉掉电比4快。。。。
: 需要去苹果店换一个吗？
k*c
4 楼
Let them run O/N
l*7
5 楼
Of course. 换机子没商量 用Amex 买的？用purchase protection too.
【在 c*****h 的大作中提到】
: att的4s，冲了一晚上了，最多只能到99%，而且感觉掉电比4快。。。。
: 需要去苹果店换一个吗？
【在 c*****h 的大作中提到】
: att的4s，冲了一晚上了，最多只能到99%，而且感觉掉电比4快。。。。
: 需要去苹果店换一个吗？
c*9
6 楼
Thanks. What's the meaning of O/N?
c*h
7 楼
好像忘了用amex了。
刚才去了苹果店。不给换。非要我去att。可local几家att都没货。
怎么办？
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 l**7 的大作中提到】
: Of course. 换机子没商量 用Amex 买的？用purchase protection too.
刚才去了苹果店。不给换。非要我去att。可local几家att都没货。
怎么办？
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 l**7 的大作中提到】
: Of course. 换机子没商量 用Amex 买的？用purchase protection too.
T*t
8 楼
O/N = overnight
c*9
9 楼
请问是放在水浴37度里面通宵吗？谢谢
m*7
10 楼
首先，你有没有确定这个菌的chromosome有多大？有没有你这两个酶的酶切位点？
其次，按照识别位点6个碱基来算，4096个bp才能随机出现一个EcoRI的位点，考虑正反
向的话减一半就是2048bp。你跑胶的浓度是否合适来区分切开和没切开的状态？
你的描述中并没有出现非酶切对照，你是如何判断没切开的？
另外，你的实验目的是什么？为啥要用这两个酶来切？
其次，按照识别位点6个碱基来算，4096个bp才能随机出现一个EcoRI的位点，考虑正反
向的话减一半就是2048bp。你跑胶的浓度是否合适来区分切开和没切开的状态？
你的描述中并没有出现非酶切对照，你是如何判断没切开的？
另外，你的实验目的是什么？为啥要用这两个酶来切？
n*w
11 楼
是的～
【在 c****9 的大作中提到】
: 请问是放在水浴37度里面通宵吗？谢谢
【在 c****9 的大作中提到】
: 请问是放在水浴37度里面通宵吗？谢谢
s*s
12 楼
一般来说chromosome DNA overnight切完应该是smear。
200ng/
【在 c****9 的大作中提到】
: 我正在做一种固氮菌的酶切。chromosome材料应该没问题的，quantification是200ng/
: ul.所以我用了5ul的chromosome, 1ul EcoR1， 4ul Eco buffer， 30ul diH2O.再分开
: 入4个小试管里面，保存在37度的水浴里面分别5MIN, 30MIN, 1H, 2H,然后移入65度的
: 水浴30分钟，再跑胶，但是做了2次，发现DNA都没有被切开。然后换了HindIII和NEB
: Buffer2,结果也是没有切开。请教各位这个是哪个环节出问题了呢？是否有更好的办法
: 做酶切呢？谢谢。
200ng/
【在 c****9 的大作中提到】
: 我正在做一种固氮菌的酶切。chromosome材料应该没问题的，quantification是200ng/
: ul.所以我用了5ul的chromosome, 1ul EcoR1， 4ul Eco buffer， 30ul diH2O.再分开
: 入4个小试管里面，保存在37度的水浴里面分别5MIN, 30MIN, 1H, 2H,然后移入65度的
: 水浴30分钟，再跑胶，但是做了2次，发现DNA都没有被切开。然后换了HindIII和NEB
: Buffer2,结果也是没有切开。请教各位这个是哪个环节出问题了呢？是否有更好的办法
: 做酶切呢？谢谢。
s*s
13 楼
什么叫做chromosome应该没有问题？phenol再抽一遍再切看看
200ng/
【在 c****9 的大作中提到】
: 我正在做一种固氮菌的酶切。chromosome材料应该没问题的，quantification是200ng/
: ul.所以我用了5ul的chromosome, 1ul EcoR1， 4ul Eco buffer， 30ul diH2O.再分开
: 入4个小试管里面，保存在37度的水浴里面分别5MIN, 30MIN, 1H, 2H,然后移入65度的
: 水浴30分钟，再跑胶，但是做了2次，发现DNA都没有被切开。然后换了HindIII和NEB
: Buffer2,结果也是没有切开。请教各位这个是哪个环节出问题了呢？是否有更好的办法
: 做酶切呢？谢谢。
200ng/
【在 c****9 的大作中提到】
: 我正在做一种固氮菌的酶切。chromosome材料应该没问题的，quantification是200ng/
: ul.所以我用了5ul的chromosome, 1ul EcoR1， 4ul Eco buffer， 30ul diH2O.再分开
: 入4个小试管里面，保存在37度的水浴里面分别5MIN, 30MIN, 1H, 2H,然后移入65度的
: 水浴30分钟，再跑胶，但是做了2次，发现DNA都没有被切开。然后换了HindIII和NEB
: Buffer2,结果也是没有切开。请教各位这个是哪个环节出问题了呢？是否有更好的办法
: 做酶切呢？谢谢。
k*s
14 楼
gDNA酶切有几个注意事项
1. gDNA一定要干净，质量好。酶切之前要跑胶看看。
2. 酶切体积要大些，1ug的要50uL体积更好
3. 酶要多加些，一般要总体积的5%
4. 酶切反应时间可以延长到overnight. 一般在反应几个小时后，可以再加几ul酶继
续切。
5. 最后跑胶应该是很好的smear现象。
酶切gDNA一帮可用来做Southern blot.
200ng/
【在 c****9 的大作中提到】
: 我正在做一种固氮菌的酶切。chromosome材料应该没问题的，quantification是200ng/
: ul.所以我用了5ul的chromosome, 1ul EcoR1， 4ul Eco buffer， 30ul diH2O.再分开
: 入4个小试管里面，保存在37度的水浴里面分别5MIN, 30MIN, 1H, 2H,然后移入65度的
: 水浴30分钟，再跑胶，但是做了2次，发现DNA都没有被切开。然后换了HindIII和NEB
: Buffer2,结果也是没有切开。请教各位这个是哪个环节出问题了呢？是否有更好的办法
: 做酶切呢？谢谢。
1. gDNA一定要干净，质量好。酶切之前要跑胶看看。
2. 酶切体积要大些，1ug的要50uL体积更好
3. 酶要多加些，一般要总体积的5%
4. 酶切反应时间可以延长到overnight. 一般在反应几个小时后，可以再加几ul酶继
续切。
5. 最后跑胶应该是很好的smear现象。
酶切gDNA一帮可用来做Southern blot.
200ng/
【在 c****9 的大作中提到】
: 我正在做一种固氮菌的酶切。chromosome材料应该没问题的，quantification是200ng/
: ul.所以我用了5ul的chromosome, 1ul EcoR1， 4ul Eco buffer， 30ul diH2O.再分开
: 入4个小试管里面，保存在37度的水浴里面分别5MIN, 30MIN, 1H, 2H,然后移入65度的
: 水浴30分钟，再跑胶，但是做了2次，发现DNA都没有被切开。然后换了HindIII和NEB
: Buffer2,结果也是没有切开。请教各位这个是哪个环节出问题了呢？是否有更好的办法
: 做酶切呢？谢谢。
相关阅读
记得之前有人发帖子说国内公司找会3-D 细胞培养的人国内的副教授offer买细胞A431请教－包子感谢请教肝细胞培养急问 两个关于荧光显微镜的问题，在线急等(三个包子)包子求文献，谢谢各位师兄师姐 谁知道NYU的chuanshu huang（黄传书）？paper helppaper help, thanks!Stephan Herzig测试化妆品的CRO公司值得去么？ (转载)开发这个产品，市场如何？听听大家建议！In cell western 怎么防止细胞脱离?求文献：science １９８６借人气，问个不明白的题外问题：embroid body plate 后展开中央很厚的阴影区是什么context啊？pnas Request Appeal 有用么？大家愿意回高校还是研究所关于摘取数据请推荐一个向细胞内导入蛋白的试剂盒或者protocol