碰到分子生物学难题，求教---mRNA 的起始点怎么得到，怎么能知道哪个ATG是蛋白的翻译起始位点# Biology - 生物学
v*o
1 楼
最近就有人怀疑MOT和G4T以及LEBEB是联手骗钱的。
我今天看见几个陌生的id和valandlord一唱一和谈的很欢的样子，要提醒大家对于这种
连环骗更加要警惕。
这种连环骗罪容易让人失去警惕。
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V*6
2 楼
这本书我应该写过一个帖子推荐的，很多人说这本书很水，经常是围观群众说几句，大
家骂几句，就是一章。
但是在这本书是目前类似书里写的最好，成就最大，也是最受欢迎的。
因为作者能抓住热点，把最新的热点写到书里，让读者很有代入感，而且作者写打脸情
节，那是写的很让人看的热血沸腾，当然作者写张烨装逼也很有水平，怎么说呢。
就是文字和情急都很好，所以这本书在起点一直人气很高。
可是最近这书写的脑残了。
完全不 符合逻辑。比如说张烨是最危险的黑客，把全世界其他国家的黑客给吓坏了，
他自己说自己是黑客，这也不应该坐牢是吧。这不符合逻辑。
而且之前是韩国入侵中国这边，张烨把韩国给干了，韩国凭什么说是中国的黑客出问题
，然后一直要中国交凶手，然后把张烨的头号粉丝大刀兄给抓了。
韩国这边没权利要求中国做，中国也不会傻逼答应韩国呀。
而且后来韩国天天来黑中国的网站，为什么韩国那边就没事，自己反击就有事。
虽然知道张烨不会吃亏，只是坐了几天牢，可能就要出来了，但是这情节不合理
家骂几句，就是一章。
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可是最近这书写的脑残了。
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他自己说自己是黑客，这也不应该坐牢是吧。这不符合逻辑。
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虽然知道张烨不会吃亏，只是坐了几天牢，可能就要出来了，但是这情节不合理
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3 楼
寺庙拜佛讲解
为什么拜佛？
佛是佛陀的简称，意为觉悟的人，大慈大悲的人，大福德、大智慧的人，拜佛就是
以佛为导师，学佛的为人处世，积德修福，做一个慈悲与智慧的人，一个身心清净、健
康的人，一个快乐无忧的人，一个有益于社会、国家、众生的人，一个无我利他的至善
之人。因为，佛教就是佛陀的教育，就是做人的教育。成功的人生，就是做人的成功。
那么该怎样拜佛呢？关键是至诚恭敬。印光大师嘱咐我们：“欲得佛法真实利益，
须向恭敬中求；有一分恭敬，即消一分罪业，增一分福慧；有十分恭敬，即消十分罪业
，增十分福慧。”
为什么拜菩萨？
一、弥勒菩萨：包容、欢喜
我们一进天王殿，第一个见到的，就是正当中供奉的弥勒菩萨。弥勒菩萨塑造的是
布袋和尚的形象；他代表什么意思呢？布袋和尚肚皮很大，满面笑容，他所代表的意义
就是什么资格才可以入佛门：第一要有肚量，要能包容；第二要慈悲，要以欢喜心接待
一切众生。所以弥勒菩萨代表的是——生平等心，呈喜悦相。我们以清净平等的心对待
一切众生，以满面笑容接待一切大众，这才是入佛门必备的条件。所以他是教学，而不
可以把他当作神明来祭祀，那就错误了，你一定要懂得其真正的含意。你明了之后，才
会对于佛家教育佩服到五体投地，不能不称赞，这真是具足了大智慧，圆满的设施。明
了他对我们的教育意义，这就是拜菩萨了。
二、地藏菩萨：孝顺、恭敬
地藏菩萨所表示的是孝亲尊师，所以一部《地藏经》就是佛门的《孝经》，我们从
这个地方学起。无论哪一个宗派，哪一个法门，都是从孝亲尊师做起。然后把孝亲尊师
扩大，能够孝顺、恭敬一切众生，这就是拜菩萨了。
三、观世音菩萨：大慈、大悲
观音菩萨表示大慈大悲，慈是使他人快乐，悲是帮助他人解脱烦恼和痛苦。慈悲一
切、怜悯一切、救护一切众生，就是大慈大悲。拜菩萨，就是以菩萨为榜样，长养自己
的慈悲心，利益他人，造福社会。因为，害人就是害己，助人就是助己，利人自然有益
自己，爱护他人，才是真爱自己。
四、文殊菩萨：智慧、善巧
文殊师利菩萨，代表的是大智慧，圆满的智慧，绝对不是迷惑颠倒，感情用事。佛
门常说：“慈悲为本，方便为门”；但是又说：“慈悲多祸害，方便出下流”，这个话
对照起来看好像非常矛盾！其实它有道理的，因为，慈悲、方便要建立在理智的基础上
，要建立在智慧的基础上，不能感情用事，不能溺爱。感情用事，不思后果，那就是祸
害。如果是以智慧为基础，慈悲、方便才能恰到好处，才能善巧，才能自利利他，那是
真实的功德。因此，拜菩萨，就是学习开发自己的智慧，为人处世，善巧方便，得当适
宜。
五、普贤菩萨：应用、实践
普贤菩萨代表实践，把孝敬、慈悲、智慧，应用、落实在日常生活当中。我们穿衣
吃饭、学习工作、待人接物，能够把孝敬、慈悲、智慧，应用、落实在其中，这叫做普
贤菩萨。拜菩萨，就是学习知行合一、解行相应。
这是我们修学佛法的四个大科目——孝敬、慈悲、智慧、实践。诸位想想，佛教里
哪来的迷信？真正是叫我们破迷开悟啊！然后才能离苦得乐。
苦从哪里来的？
从迷来的。
乐从哪里来的？
从悟来的。
觉悟就乐了，就是宇宙人生的真相，我统统清楚，统统明了，自然就快乐了。你能
够掌握这个现实，你能够自在地运用这个现实，支配这个现实，而不是被环境所支配。
被环境支配，这个人很痛苦啊！自己有能力支配环境，支配自己生活，样样作得了主宰
，他怎么不幸福，怎么不快乐呢？关键就在迷、悟啊！这些菩萨代表修学的纲领，都是
叫我们真正地认识佛法，落实在生活中，使我们真正受益。
为什么拜罗汉？
罗汉是佛陀的学生，听闻佛陀的教育，用功修行，解脱了烦恼和痛苦。我们拜罗汉
、数罗汉，就要学罗汉，听闻佛法，修正错误的思想、言语、行为，从而离苦得乐，身
心清净，生活幸福。
为什么拜四大天王？
走进佛寺大门，你看的第一个建筑物，叫天王殿。天王殿里面供奉的是四大天王、
弥勒菩萨；四大天王是护法，保护这个道场的。你懂得其真正的意思吗？
一、东方持国天王。“持”是保持；“国”是国家。持国里面最重要的含意就是“
负责尽分”。我们修身、齐家，也就是对自己、对家庭、对社会、对国家负责；自己是
什么身分，就负担起什么样的职责。我们在自己的岗位上，对自己的工作尽心尽力，每
一个人在他自己岗位上都能尽忠职守，负责尽职，这才能护持国家，他表示的、教我们
的是这个意思。持国天王手上拿的是琵琶（乐器），它也是表示佛法的。代表什么呢？
负责尽职要做得恰到好处，不能超过，也不能不及，这就是中庸之道。儒家讲中庸，佛
家讲中道。就像弦一样，你要是太紧了，它就会断掉；太松了，就弹不响了，一定要调
得恰到好处，这就是说，我们对人、对事、对物都要守分寸，都要做得恰到好处，它是
这个意思啊！
二、南方增长天王。“增长”用现代的话来说就是求进步；与时俱进，不进则退。
儒家教学说日日新，日新又新，永远在求进步；佛法讲精进，不但要进步，还要精纯，
进步当中要守住精纯，这是佛教给我们的。所以佛法永远站在时代的前端，那你不求进
步怎么行，整个社会都在进步，你落在后面，会被淘汰掉的。所以德行上要进步，智慧
要增长，技能要进步，才艺也要进步，乃至于我们生活品质也要天天往上提升，这才是
佛法。佛法讲苦行，那是在求学的阶段。因为佛所讲的是教我们离苦得乐，不要搞错了
，我们离乐去吃苦，这在佛法里找不到。所以苦行是在修学的阶段，好像我们在学校读
书，求学的阶段要苦，踏进社会我们造福人群，这个时候是离苦得乐；不但自己离苦得
乐，帮助整个社会，帮助一切大众离苦得乐，是这么一个意思，不能搞错。苦行是一个
阶段，不是永久的，这个一定要知道。
增长天王手上拿的是宝剑，这个剑也是表示佛法的，代表智慧之剑，能断烦恼。烦
恼像丝、像乱麻一样，所以快刀斩乱麻，唯有智慧才能够把所有的烦杂事情，统统都解
决掉，它表这个意思。
三、西方广目天王；四、北方多闻天王。前面两个是我们修学的目标，我们要负责
尽职、要日新又新。那要怎样才能做到呢？这两位天王教给我们——要多看、多听，所
谓“读万卷书，行万里路”。智慧从这儿来的呀！要读书，要读诵佛经；要到处去看、
去考察，像现在说观光、考察。“光”是什么呢？光是那个地方的风俗人情，那个地方
的生活习惯。我们去看看都了解了，人家的长处，我们学习；人家的缺陷，反省我们有
没有。我们能够采人之长，舍人之短，来建设我们的国家，建设我们的社会，这样岂不
是这个世界上最美好的国家，最美好的社会了吗！这个不是凭空在想像的，是要叫你多
方去考察、去学习。可见佛教给我们的确是非常踏实，绝不是空谈；教我们多看、多听
，增长自己的学问，增长自己的见识。
那么广目天王右手拿的是一条龙，或者有的时候造像造的是蛇。龙跟蛇代表什么呢
？代表变化莫测。这是讲人心、社会、世界，非常非常复杂，常常在变化，你有智慧才
能控制得住，才能掌握局势，才能游刃有余，它表这个意思。
北方多闻天王，他手上拿的是伞盖。伞代表什么呢？伞是遮盖，就是今天我们所讲
的环保，遮盖灰尘，既要多看、多听，又要保护自己身心的清净，不被诱惑，不受污染
。所以你要是真正明了，真正懂得，一进天王殿看到这些塑像，就给你上了一课。这一
课真正护持你自己身心的健康，护持你个人的幸福、家庭的美满、社会的和谐、国家的
富强、世界的和平，这统统都护持了，一点都不假。诸位一定要晓得它表法——教学的
意趣。这是艺术的教育。
为什么烧香？
“香”代表戒、定真香，烧香就是提醒我们，要修学戒、定，从而开显智慧。由戒
生定，由定生慧。
修学戒律，就是要遵纪守法，修十善业。十善业包括：一、不杀生，二、不偷盗，
三、不邪淫，四、不恶口，五、不两舌，六、不妄语，七、不绮语，八、不贪，九、不
嗔，十、不痴。或称十善业道。现在将十善业略述于下：
一、不杀生而慈心于仁——杀是杀害，生是生命，不杀害众生之生命，名为不杀生
。即对一切众生，应一视同仁，勿残杀加害。因为佛教主张佛性平等，提倡慈悲救世，
故释尊以平等慈悲教义，为被杀害的众生呼援，指示众生皆有佛性，故不能杀。而孟子
也曾说：“闻其声，不忍食其肉。”他不言佛性，也是出于仁爱，而怜悯被杀害的众生
。由此看来，能慈心于仁，无杀害生灵，生命界则可尽其天然，争斗仇恨的事，便可消
灭，天下岂不太平？
二、不偷盗而义利节用——偷谓诈骗潜窃，盗谓强劫豪夺。不偷窃强夺人家的财物
，叫做不偷盗。因为一切事物，主权转移，必依正义，不与取而取，非分取而取，无功
而取，都是偷盗的行为。能资生活而遂欲望叫做“利”，致利于合宜叫做“义”。知利
己而须利人，利人即利己，自利利他，叫做“义利”。人人行义利，节俭日用，奉养父
母，维持家庭生活，乐其天伦，与朋友金钱往来而能守慎，则无偷盗之事发生，社会既
可安宁，个人与家庭也能得到幸福。
三、不邪淫而贞良守礼——即正式结合之夫妻外，不得行淫。若非己妻，苟合淫欲
，即名邪淫。能端正男女间之欲情，叫做不邪淫，也就是贞良守礼。亦即组织家庭之后
，夫妇须相敬如宾，不有其他淫乱行为，便能和睦相处，成为美满家庭。
四、不妄语而诚实无欺——以术愚人，以言诈人，喜说谎话，是说不是，不是说是
，叫做妄语。不妄语就是说话诚实，不说虚伪诳骗的话。如能远离妄语，便能做到诚实
不欺，则父母、兄弟、亲属、朋友，以及人事的接触，彼此都能互相信任，实为得乐之
道。
五、不两舌而无争是非——不两舌即是不搬弄是非，不离间他人感情。世人不修口
业，常有两舌之患：所谓病从口入，祸从口出，两舌灾祸，可导致无风生浪，是非烦恼
，扰乱身心，甚至动武伤人，实为杀人不见血之罪魁。苟能远离两舌，说正直话，岂有
是非之争端？
六、不恶口而出言慈和——不恶口即是不说粗恶毁辱他人的话，及不咒诅他人的恶
毒言语。常人多患恶口骂人，且伤人父母祖宗三代，是为大恶口。经云：“犯恶口者，
当受畜生果报。”故不恶口而出言慈和，可积德成善，为人敬爱。
七、不绮语而言说有礼——所谓绮语，即花言巧语，轻浮无礼，说不正经的话，导
人生诸邪念，或出言戏弄，胡乱开口，以为取乐，都叫做绮语。说此绮语者，不惟无益
自己，且能加害他人，业报所在，死堕恶道，生而为人，永遭轻贱。故要说合于礼仪，
不乖违真实的正经话，便叫做不绮语。如能远离绮语，则心正言顺，彬彬有礼，庄严威
仪，也必为人敬仰。
八、不悭贪而慈心舍施——自己的财物不肯施人，叫做“悭”，他人的财物，但欲
归我，叫做“贪”。悭贪的人追求财、色、名、食、睡五欲，莫知所止，便会造出种种
罪业，故要远离悭贪，不悭吝自己的财物，也不贪求他人的财物，把谋生得宜的钱财，
用以奉养父母，教育子女，家庭费用外，对于贫病孤苦者，能给与同情慈济，或捐助社
会福利事业，即是慈心舍施，经云：“能舍施者，可得富贵。”但不可有贪，佛陀说“
贪多业亦多，取少业亦少，万般苦恼事，除贪一时了。”人生因贪而受苦，因贪而违法
乱纪，危害他人社会，佛教乃劝人慈心舍施，以对治悭贪。
九、不嗔恚而慈忍积福——嗔恚即遇事不顺，埋恨于心，发怒于形。甚至脾气爆发
，可导致杀害灾祸。常人说：“火烧功德林”，这话是说一个人无论做多少善事，嗔恚
之火一发，动怒于人，以至动武打斗，发生种种不幸，因此曾做过的善事功德，便被它
烧得净光。故要以慈悲容忍对治嗔恚，即所谓“忍字上面一把刀，为人不忍祸自招，能
忍得住片时刀，过后方知忍为高。”故要勤修慈悲忍辱美德，以远离嗔恚过患，是名不
嗔恚，即可成就自利利他大事业。
印光大师说：“瞋心一起，于人无益，于己有损；轻亦心意烦燥，重则肝目受伤。
须令心中常有一团太和元气，则疾病消灭，福寿增崇矣。”《（正）对治瞋恚等义》
十、不愚痴而多闻增智——愚痴是无明，迷昧，没有智慧，对事理无所明了，不能
辨别是非，不信因果法则，固执邪见，无正见正信，胡作乱为。如能接受佛陀教育，增
进智慧，便可导入正见，做个事理明白的善人。佛经说，修般若慧以对治愚痴，使令远
离邪见，是名不愚痴。
修定，就是通过念佛，或诵经，或持咒，或静坐，或参禅等方法，培养一种安定、
清净、祥和、稳静的心态；荣辱毁誉，泰然处之；得失随缘，不骄不馁；遇事不慌，一
心不乱；从容不迫，体动心静。心静，则慧生，故能恰当解决人生之种种疑难、困惑与
烦恼，走出低谷，走出困境，离苦得乐。所谓大将风度，指挥若定。因此，这种心态，
有益于现代人生，是我们学习、工作和生活所必需。因此，要修戒、定、慧。
为什么敲钟
佛门、佛事，钟用于祈寿、感化、超度众生。在一口佛钟上铸有这样的铭文：“钟
声闻，烦恼轻，智慧长，菩提生，离地狱，出火炕，愿成佛，度众生。”
佛寺的钟多是晨暮各敲一次，每次紧敲18下，慢敲18下，不紧不慢再敲18下，如此
反复两遍，共108下。为何要定为108下？一说是一年有12月、24节气、72候（五天为一
候），合为108，象征一年轮回，天长地久。另一说是，人有108种烦恼，钟鸣108响，
以尽除人间烦恼。
钟声深沉、洪亮、绵长，才能震撼人心。形大体重的钟基频低，储能大，使钟声深
沉绵长。用加入锡的青铜制钟比黄铜和铁制钟声音青脆。钟的下部和钟唇加厚外张，使
声音向外辐射能力强，就会使钟声洪亮。所以，大凡具有感染力的佛事钟的钟声，都是
由形大体重、钟唇厚而外张的青铜钟发出的。
敲钟时，可别忘了耳闻心诵：“钟声闻，烦恼轻，智慧长，菩提生，离地狱，出火
炕，愿成佛，度众生。” 如此发心，福慧双修，功德无量。
还愿，就是求神保佑的人实践对神许下的诺言；就是愿望成就之后自己愿意付出什么来
感谢。最好的还愿方法是存好心，说好话，做好事，当好人。还愿要挑选黄道吉日，不
能自己随便就去还愿。
古今还愿吉日是根据日月星辰的运动规律，以天干地支为记日内容，阴阳五行生克制化
为基本理论。以用事为经，用神为纬而制定的。选择还愿吉日，则以神为目，以事为刚
，以事序而选择。
各位朋友要记好.还愿时请务必在申时（下午三点）前开始。
附：还愿烧香的规矩
一、寺庙进门
寺庙建筑都有许多道门，从哪一道门进入都有讲究的。据说只有开了光的寺庙才有资格
修十三道门。正中间的三道门，才是供人出入的。普通游客，进门只能走右边的那道门
，中间那道门叫空门，只有出家人才可以出入的。进门时，男客先迈左脚，女客先迈右
脚，而且这步子，需迈得越大越好。同时进庙内殿宇时应遵循左门进右门出的原则。注
意：一定不能踩踏在门槛(据说门槛代表佛祖的肩膀，当然不能踩踏)之上。而登临第1
和第6个台阶的行礼意味着一心一意和六六大顺的含义。
二、拜佛原则
拜佛前，先要净（洗）手。香不能叫“买”而应该叫“请”。普通人敬香要用左手持(
据说右手不净，普通人杀生大多用右手)，三炷为自己祈福，六炷为两辈人祈福，九炷
为三代人祈福。而十三是一个极致，十三炷香就是功德圆满的高香。先烧香再叩头。烧
香的话，应该是左手拿香，右手拿烛。烧香时，先用自己的火点燃香，要越旺越好，人
们就常说香火旺盛嘛。左手在上，右手在下握住香，高举过头顶作揖。作揖后，把香插
在香灰里，就可进门叩头了。叩头的话，要认准佛祖菩萨或罗汉。比如，你不能向地藏
菩萨一阵猛叩头。上香以3支为宜，此表示“戒、定、慧”三无漏学；也表示供养佛、
法、僧常住三宝。这是最圆满且文明的烧香供养。上香不在多少，贵在心诚，所谓“烧
三支文明香，敬—片真诚心”。香入香炉时应呈水平角度，曰平平安安。
跪拜的姿势是这样的，双膝跪在蒲团上，双手合什，注意，这个双掌合什要注意手心处
呈空心状，高举过头顶，向下至嘴边停顿，可许愿，再向下至心口，默念，再摊开双掌
，掌心向上，上身拜倒。
祈福还有一个仪式叫"开光"，当然是由得道高僧来主持最好。平时开光的东西置于家中
，须得初一十五净手焚香，否则为不敬。但如果是很特殊的开普光，则不同，开光的物
件可随身携带。供开光的物件只能是象牙、金或玉制品。
把开光的物品和写上被祈福人的姓名和生庚八字(记不住生庚八字亦可不写)的纸用红纸
或红锦囊包好，递上随喜一份(最好是以三六九数字相关)，请大师帮忙开光。
开光的过程是把所有的开光物件放于一托盘，置于佛前，大师念经数篇，即算是佛光普
照。你的物件因些而赋于灵气与法力，可以带在身边保佑你了。
三、上香原则
1.用自己的火将香点燃；
2.用两手的中指和食指夹着香杆，大姆指顶着香的尾部；
3.安置胸前，香头平对菩萨圣像；
4.再举香齐眉；
5.之后，放下如第3动作；
6.开始用左手分插。
插香的第一种方法：
第一支香插中央。
第二支香插右边。
第三支香插左边。
插香的第二种方法是先右，念：“誓断一切恶。”次左，念：“誓修一切善。”后中，
念：“誓度一切众生。”
插香的第三种方法是最简单的，和第一法一样，但念得比较简单，第一支香插中间，念
：“供养佛，觉而不迷；”第二支香插右边，念：“供养法，正而不邪；”第三支香插
左边，念：“供养僧，净而不染。”
上完香后，应对佛像，肃立合掌，恭敬礼佛(合掌，心中默念：“愿此香华云，直达三
宝所（或念：“直达诸佛所”）恳求大慈悲，施与众生乐。”)。
如果是上环香，就要以点燃之处向佛，两手像持长香的方式一样。
要是上檀香（即檀木劈成之小枝）时，就要用双手大指和食指拿着香的两头，中指、无
名指、小指都张开伸直，高举齐眉，前后放进香炉；第一根檀香用左手拈起，右手接过
送入；第二支则利用右手拈起，左手送入；第三支又和第一支一样。观想默念的方法都
要和上长香时一样。烧香就是供养，烧檀香最好！
四、烧香注意事项:
在寺庙内有很多菩萨，如果你愿意，可以一尊一尊的拜过去，如果时间不允许，只需在
大雄宝殿前烧。步骤如下:
1、自己请自己的香，不能由别人付香火钱。
2、最好用自己的火点燃香(三支即可，不需要大把大把的烧)，面朝大殿的大门；双手
轻握三支青香(男的左手在上，右手在下，女士反之)，突然向上方一提，
燃烧的火随即会熄灭，千万不能用嘴去吹灭。
3、上香时先上香后礼拜，三根香就够了，敬在一个炉中即可，“万佛一炉”然后经过
每一座佛堂时，合掌拜三下就可，佛教根本就没有诸多讲究，最主要你有没有清净自心。
4、把香举至额头一般高，闭眼许愿，然后三拜。（举香的高度不得底于下身）
5、右转，面朝东方(一般大殿的门是朝南的)，按第3步方式许愿，三拜；然后朝南，朝
北。拜完后即可将香插到香炉内，注意：应该用左手燃香，因为右手杀生，左手相对来
说要平和，不可往香炉内一丢了之。
6、女人来例假时候不要去上香。
7、进庙烧香，意思是点燃自己的心香，点灯是点亮自己的心灯，这时就可以得到佛菩
萨的加持，使自己得到智慧等等。所以香可以烧一枝，可以烧两枝，最多烧三枝。不必
多烧。进庙烧香，可以自己带，也可以从外头买，不过一般大殿上都备有香，所以你可
直接用，如果经济条件允许，你可以往功德箱中放点功德钱，如果困难，放心菩萨不会
怪罪你的，你拜了佛也一样有功德。
8、焚三支清香，一支敬佛，一支敬法，一支敬僧；庙里的垫子中间是给出家人拜佛用
的，在家人男人跪拜用左边的，女人用右边的；进入殿门里，帽及手杖须自提携或寄放
他室为佳，万不可向佛案及佛桌上安放。尽量不要走中间，沿阶梯边沿而上，男左女右
，进门时尽量不要走正门，因为方丈门朝晚课时都是从正门进的，而沙弥等从偏门进，
所以为了和寺院一致，大家都尽量应该从偏门进，男左女右，进去时尽量跨右脚，出门
时也从偏门出就是，不要踩在门槛上（一般寺院门槛做得很高）。进庙门的时候,千万
不要踩门槛。
9、心要虔诚，要茹素，手要干净，不要在庙堂里大声喧哗以及说无关的“唠叨话”，
不要用手指点佛像，不可大声喧哗和讲不敬的话语。还有比较重要的一点，不可以随口
胡乱许愿，因为许愿一定要还愿的；如果没把握做到，就千万别许愿。别求发财，佛不
是保佑你发财的。可以求平安，求健康顺遂。不要随口许诺给佛什么供养，然后又抛到
脑后。佛又不争你的一柱香，这个说法是要让我们不要随意承诺，所谓做人应该有言必
践吧。佛所恼的应该是这些虚妄之言吧。
10、在庙里按顺时针方向行走拜佛，不要跨过蒲团，因为会给人一种不庄严的感觉，凡
有人礼拜时，不可在他的前头走过。
11、去道观许愿是要还愿的。一年愿望实现后回来，方法进去问人就可以了。如果没许
愿光是拜，就不用。寺院一般是不用还愿的，但是你最好许个做多少善事的愿。就发愿
来促使你本身的许愿。
12、不要不经寺院同意采摘寺院管理范围的花果，私自拿供品等物，这也是不对的行为
，叫“偷盗四方常住”也要获果报的。
烧香祈福的正确方法
按照我国的传统习俗，每年春节及农历初一、十五等日期，广大群众有到寺院香礼佛、
祈福求安的习惯。为使十方善信种植福田、广获法益、正善正行，以满所愿，故将烧香
祈福的正确方法简要的介绍给大家，以祈共沾法益。
一、烧香礼佛的真实意义是什么？
寺院是佛 教徒培福修慧的场所，古称丛林，通常在寺院大雄宝殿上供奉的叫释迦牟尼
佛，是古印度净饭王的太子，后出家修行，在菩提树下证道。成为大彻大悟的觉者，是
佛教的创始人，被佛弟子尊为“世尊”、“本师”等。烧香礼佛的真实意义在于表达对
佛陀的尊敬、感激与怀念。去染成净，奉献人生，觉悟人生。如此而行，自然福慧具足
，心想事成。
二、供养佛、菩薩一定要烧香吗？
不一定。供养佛、菩薩方法很多，通常用鲜花（表因）和水果（表果），如果条件不具
备，仅供一杯清水（表清净平等）也行。但是，绝对不用酒肉来供养佛菩薩。通常用“
香、花、灯、涂、果、乐”六供养，其中之一均可。
三、烧香的含义是什么？
第一、表示虔诚恭敬供养三宝，以此示范接引众生。
第二、表示传递信息于虚空法界，感通十方三宝加持。
第三、表示燃烧自身，普香十方，提醒佛门弟子无私奉献。
第四、表示点燃了佛 教徒的戒定真香，含有默誓“勤修戒、定、慧，熄灭贪、喧、痴
”意，佛并不嗜好世间大香贵香，但却喜欢佛弟子的戒、定真香。
四、烧香求财可以得到吗？
不可以。佛经上讲：“佛氏门中，有求必应”。关键要懂得其中道理，求财要如理如法
去求。燃香成灰是表示无私的奉献，即佛门所说的“布施”。这启示我们：从生求财求
福，先要舍财种福。财布施是因，得财富是果。舍是因，得是果，舍得不二。所以，一
个人的福报是自己修来的，不是佛菩薩施舍给你的。佛门常讲：“命由己造，福由己求
。”烧大香就发大财吗？这纯属“以凡夫之心，度诸佛之腹”。大彻大悟、大慈大悲的
诸佛菩薩，又怎会像凡夫众生一样，去在意你大香小香而分别赐富呢？当然不会。
五、有人一定要烧香怎么办？
寺院是公共活动场所，一般会限制烧大香，加上节假日人流量多，烧大香稍为不慎就会
灼伤他人，浓烟滚滚，不利环保，也易引起火患，如此，求福不成，反造无边罪业。一
定要烧大香的信众，可将大香交给寺院管理人员，同意安排焚烧，焚烧时，寺院里的法
师也会为你们祈祷。
六、烧香礼佛应当许什么样的愿？
烧香礼佛时应当心地清净，果能一尘不染，获福无边。若要许愿，当放弃自私自利，损
人利己的念头，发利益社会、利益众生之大心愿，则功德无量。佛经上讲“礼佛一拜，
灭罪河沙；念佛一声，福增无量”是也。
七、礼拜佛菩薩，上几支香为宜？
上三支香为宜。此表示“戒、定、慧”三无漏学；也表示供养佛、法、僧常住三宝。这
是最圆满且文明的烧香供养。上香不在多少，贵在心诚，所谓“烧三支文明香，敬—片
真诚心”。
八、寺院里供的佛菩薩很多，给每个佛、菩薩都要烧三支香吗？
不一定。一般在大雄宝殿前上三支香就行了，其他各殿合掌礼拜，效果是一样的。当然
，也可以按照寺院的规定，根据寺院香炉分布的情况自行决定，但每个香炉中不超过三
支香为宜。
九、把点燃的香拿在手上拜佛正确吗？
不正确。把香点燃后应插在香炉中间，第一支香插在中间，心中默念：供养佛，觉而不
迷；第二支香插在右边，心中默念：供养法，正而不牙阝；第三支香插在左边，心中默
念：供养僧，净而不染。上完香后，应对佛像，肃立合掌，恭敬礼佛。现在有人将一把
香点燃以后拿在手上拜佛，既可能引起火患，烧伤他人或自己，也容易烧坏拜垫和器物
，更造成浓烟滚滚，污染环境，危害健康，实在是不文明不如法。
十、什么方法供养佛菩薩功德最大？
佛经上说：“一切供养中，法供养第一。”所谓法供养就是佛经上的教导，如理如法受
持诵读，自行化他，为人演说。即在日常生活和待人处世中：“诸恶莫作，众善奉行。
”
为什么拜佛？
佛是佛陀的简称，意为觉悟的人，大慈大悲的人，大福德、大智慧的人，拜佛就是
以佛为导师，学佛的为人处世，积德修福，做一个慈悲与智慧的人，一个身心清净、健
康的人，一个快乐无忧的人，一个有益于社会、国家、众生的人，一个无我利他的至善
之人。因为，佛教就是佛陀的教育，就是做人的教育。成功的人生，就是做人的成功。
那么该怎样拜佛呢？关键是至诚恭敬。印光大师嘱咐我们：“欲得佛法真实利益，
须向恭敬中求；有一分恭敬，即消一分罪业，增一分福慧；有十分恭敬，即消十分罪业
，增十分福慧。”
为什么拜菩萨？
一、弥勒菩萨：包容、欢喜
我们一进天王殿，第一个见到的，就是正当中供奉的弥勒菩萨。弥勒菩萨塑造的是
布袋和尚的形象；他代表什么意思呢？布袋和尚肚皮很大，满面笑容，他所代表的意义
就是什么资格才可以入佛门：第一要有肚量，要能包容；第二要慈悲，要以欢喜心接待
一切众生。所以弥勒菩萨代表的是——生平等心，呈喜悦相。我们以清净平等的心对待
一切众生，以满面笑容接待一切大众，这才是入佛门必备的条件。所以他是教学，而不
可以把他当作神明来祭祀，那就错误了，你一定要懂得其真正的含意。你明了之后，才
会对于佛家教育佩服到五体投地，不能不称赞，这真是具足了大智慧，圆满的设施。明
了他对我们的教育意义，这就是拜菩萨了。
二、地藏菩萨：孝顺、恭敬
地藏菩萨所表示的是孝亲尊师，所以一部《地藏经》就是佛门的《孝经》，我们从
这个地方学起。无论哪一个宗派，哪一个法门，都是从孝亲尊师做起。然后把孝亲尊师
扩大，能够孝顺、恭敬一切众生，这就是拜菩萨了。
三、观世音菩萨：大慈、大悲
观音菩萨表示大慈大悲，慈是使他人快乐，悲是帮助他人解脱烦恼和痛苦。慈悲一
切、怜悯一切、救护一切众生，就是大慈大悲。拜菩萨，就是以菩萨为榜样，长养自己
的慈悲心，利益他人，造福社会。因为，害人就是害己，助人就是助己，利人自然有益
自己，爱护他人，才是真爱自己。
四、文殊菩萨：智慧、善巧
文殊师利菩萨，代表的是大智慧，圆满的智慧，绝对不是迷惑颠倒，感情用事。佛
门常说：“慈悲为本，方便为门”；但是又说：“慈悲多祸害，方便出下流”，这个话
对照起来看好像非常矛盾！其实它有道理的，因为，慈悲、方便要建立在理智的基础上
，要建立在智慧的基础上，不能感情用事，不能溺爱。感情用事，不思后果，那就是祸
害。如果是以智慧为基础，慈悲、方便才能恰到好处，才能善巧，才能自利利他，那是
真实的功德。因此，拜菩萨，就是学习开发自己的智慧，为人处世，善巧方便，得当适
宜。
五、普贤菩萨：应用、实践
普贤菩萨代表实践，把孝敬、慈悲、智慧，应用、落实在日常生活当中。我们穿衣
吃饭、学习工作、待人接物，能够把孝敬、慈悲、智慧，应用、落实在其中，这叫做普
贤菩萨。拜菩萨，就是学习知行合一、解行相应。
这是我们修学佛法的四个大科目——孝敬、慈悲、智慧、实践。诸位想想，佛教里
哪来的迷信？真正是叫我们破迷开悟啊！然后才能离苦得乐。
苦从哪里来的？
从迷来的。
乐从哪里来的？
从悟来的。
觉悟就乐了，就是宇宙人生的真相，我统统清楚，统统明了，自然就快乐了。你能
够掌握这个现实，你能够自在地运用这个现实，支配这个现实，而不是被环境所支配。
被环境支配，这个人很痛苦啊！自己有能力支配环境，支配自己生活，样样作得了主宰
，他怎么不幸福，怎么不快乐呢？关键就在迷、悟啊！这些菩萨代表修学的纲领，都是
叫我们真正地认识佛法，落实在生活中，使我们真正受益。
为什么拜罗汉？
罗汉是佛陀的学生，听闻佛陀的教育，用功修行，解脱了烦恼和痛苦。我们拜罗汉
、数罗汉，就要学罗汉，听闻佛法，修正错误的思想、言语、行为，从而离苦得乐，身
心清净，生活幸福。
为什么拜四大天王？
走进佛寺大门，你看的第一个建筑物，叫天王殿。天王殿里面供奉的是四大天王、
弥勒菩萨；四大天王是护法，保护这个道场的。你懂得其真正的意思吗？
一、东方持国天王。“持”是保持；“国”是国家。持国里面最重要的含意就是“
负责尽分”。我们修身、齐家，也就是对自己、对家庭、对社会、对国家负责；自己是
什么身分，就负担起什么样的职责。我们在自己的岗位上，对自己的工作尽心尽力，每
一个人在他自己岗位上都能尽忠职守，负责尽职，这才能护持国家，他表示的、教我们
的是这个意思。持国天王手上拿的是琵琶（乐器），它也是表示佛法的。代表什么呢？
负责尽职要做得恰到好处，不能超过，也不能不及，这就是中庸之道。儒家讲中庸，佛
家讲中道。就像弦一样，你要是太紧了，它就会断掉；太松了，就弹不响了，一定要调
得恰到好处，这就是说，我们对人、对事、对物都要守分寸，都要做得恰到好处，它是
这个意思啊！
二、南方增长天王。“增长”用现代的话来说就是求进步；与时俱进，不进则退。
儒家教学说日日新，日新又新，永远在求进步；佛法讲精进，不但要进步，还要精纯，
进步当中要守住精纯，这是佛教给我们的。所以佛法永远站在时代的前端，那你不求进
步怎么行，整个社会都在进步，你落在后面，会被淘汰掉的。所以德行上要进步，智慧
要增长，技能要进步，才艺也要进步，乃至于我们生活品质也要天天往上提升，这才是
佛法。佛法讲苦行，那是在求学的阶段。因为佛所讲的是教我们离苦得乐，不要搞错了
，我们离乐去吃苦，这在佛法里找不到。所以苦行是在修学的阶段，好像我们在学校读
书，求学的阶段要苦，踏进社会我们造福人群，这个时候是离苦得乐；不但自己离苦得
乐，帮助整个社会，帮助一切大众离苦得乐，是这么一个意思，不能搞错。苦行是一个
阶段，不是永久的，这个一定要知道。
增长天王手上拿的是宝剑，这个剑也是表示佛法的，代表智慧之剑，能断烦恼。烦
恼像丝、像乱麻一样，所以快刀斩乱麻，唯有智慧才能够把所有的烦杂事情，统统都解
决掉，它表这个意思。
三、西方广目天王；四、北方多闻天王。前面两个是我们修学的目标，我们要负责
尽职、要日新又新。那要怎样才能做到呢？这两位天王教给我们——要多看、多听，所
谓“读万卷书，行万里路”。智慧从这儿来的呀！要读书，要读诵佛经；要到处去看、
去考察，像现在说观光、考察。“光”是什么呢？光是那个地方的风俗人情，那个地方
的生活习惯。我们去看看都了解了，人家的长处，我们学习；人家的缺陷，反省我们有
没有。我们能够采人之长，舍人之短，来建设我们的国家，建设我们的社会，这样岂不
是这个世界上最美好的国家，最美好的社会了吗！这个不是凭空在想像的，是要叫你多
方去考察、去学习。可见佛教给我们的确是非常踏实，绝不是空谈；教我们多看、多听
，增长自己的学问，增长自己的见识。
那么广目天王右手拿的是一条龙，或者有的时候造像造的是蛇。龙跟蛇代表什么呢
？代表变化莫测。这是讲人心、社会、世界，非常非常复杂，常常在变化，你有智慧才
能控制得住，才能掌握局势，才能游刃有余，它表这个意思。
北方多闻天王，他手上拿的是伞盖。伞代表什么呢？伞是遮盖，就是今天我们所讲
的环保，遮盖灰尘，既要多看、多听，又要保护自己身心的清净，不被诱惑，不受污染
。所以你要是真正明了，真正懂得，一进天王殿看到这些塑像，就给你上了一课。这一
课真正护持你自己身心的健康，护持你个人的幸福、家庭的美满、社会的和谐、国家的
富强、世界的和平，这统统都护持了，一点都不假。诸位一定要晓得它表法——教学的
意趣。这是艺术的教育。
为什么烧香？
“香”代表戒、定真香，烧香就是提醒我们，要修学戒、定，从而开显智慧。由戒
生定，由定生慧。
修学戒律，就是要遵纪守法，修十善业。十善业包括：一、不杀生，二、不偷盗，
三、不邪淫，四、不恶口，五、不两舌，六、不妄语，七、不绮语，八、不贪，九、不
嗔，十、不痴。或称十善业道。现在将十善业略述于下：
一、不杀生而慈心于仁——杀是杀害，生是生命，不杀害众生之生命，名为不杀生
。即对一切众生，应一视同仁，勿残杀加害。因为佛教主张佛性平等，提倡慈悲救世，
故释尊以平等慈悲教义，为被杀害的众生呼援，指示众生皆有佛性，故不能杀。而孟子
也曾说：“闻其声，不忍食其肉。”他不言佛性，也是出于仁爱，而怜悯被杀害的众生
。由此看来，能慈心于仁，无杀害生灵，生命界则可尽其天然，争斗仇恨的事，便可消
灭，天下岂不太平？
二、不偷盗而义利节用——偷谓诈骗潜窃，盗谓强劫豪夺。不偷窃强夺人家的财物
，叫做不偷盗。因为一切事物，主权转移，必依正义，不与取而取，非分取而取，无功
而取，都是偷盗的行为。能资生活而遂欲望叫做“利”，致利于合宜叫做“义”。知利
己而须利人，利人即利己，自利利他，叫做“义利”。人人行义利，节俭日用，奉养父
母，维持家庭生活，乐其天伦，与朋友金钱往来而能守慎，则无偷盗之事发生，社会既
可安宁，个人与家庭也能得到幸福。
三、不邪淫而贞良守礼——即正式结合之夫妻外，不得行淫。若非己妻，苟合淫欲
，即名邪淫。能端正男女间之欲情，叫做不邪淫，也就是贞良守礼。亦即组织家庭之后
，夫妇须相敬如宾，不有其他淫乱行为，便能和睦相处，成为美满家庭。
四、不妄语而诚实无欺——以术愚人，以言诈人，喜说谎话，是说不是，不是说是
，叫做妄语。不妄语就是说话诚实，不说虚伪诳骗的话。如能远离妄语，便能做到诚实
不欺，则父母、兄弟、亲属、朋友，以及人事的接触，彼此都能互相信任，实为得乐之
道。
五、不两舌而无争是非——不两舌即是不搬弄是非，不离间他人感情。世人不修口
业，常有两舌之患：所谓病从口入，祸从口出，两舌灾祸，可导致无风生浪，是非烦恼
，扰乱身心，甚至动武伤人，实为杀人不见血之罪魁。苟能远离两舌，说正直话，岂有
是非之争端？
六、不恶口而出言慈和——不恶口即是不说粗恶毁辱他人的话，及不咒诅他人的恶
毒言语。常人多患恶口骂人，且伤人父母祖宗三代，是为大恶口。经云：“犯恶口者，
当受畜生果报。”故不恶口而出言慈和，可积德成善，为人敬爱。
七、不绮语而言说有礼——所谓绮语，即花言巧语，轻浮无礼，说不正经的话，导
人生诸邪念，或出言戏弄，胡乱开口，以为取乐，都叫做绮语。说此绮语者，不惟无益
自己，且能加害他人，业报所在，死堕恶道，生而为人，永遭轻贱。故要说合于礼仪，
不乖违真实的正经话，便叫做不绮语。如能远离绮语，则心正言顺，彬彬有礼，庄严威
仪，也必为人敬仰。
八、不悭贪而慈心舍施——自己的财物不肯施人，叫做“悭”，他人的财物，但欲
归我，叫做“贪”。悭贪的人追求财、色、名、食、睡五欲，莫知所止，便会造出种种
罪业，故要远离悭贪，不悭吝自己的财物，也不贪求他人的财物，把谋生得宜的钱财，
用以奉养父母，教育子女，家庭费用外，对于贫病孤苦者，能给与同情慈济，或捐助社
会福利事业，即是慈心舍施，经云：“能舍施者，可得富贵。”但不可有贪，佛陀说“
贪多业亦多，取少业亦少，万般苦恼事，除贪一时了。”人生因贪而受苦，因贪而违法
乱纪，危害他人社会，佛教乃劝人慈心舍施，以对治悭贪。
九、不嗔恚而慈忍积福——嗔恚即遇事不顺，埋恨于心，发怒于形。甚至脾气爆发
，可导致杀害灾祸。常人说：“火烧功德林”，这话是说一个人无论做多少善事，嗔恚
之火一发，动怒于人，以至动武打斗，发生种种不幸，因此曾做过的善事功德，便被它
烧得净光。故要以慈悲容忍对治嗔恚，即所谓“忍字上面一把刀，为人不忍祸自招，能
忍得住片时刀，过后方知忍为高。”故要勤修慈悲忍辱美德，以远离嗔恚过患，是名不
嗔恚，即可成就自利利他大事业。
印光大师说：“瞋心一起，于人无益，于己有损；轻亦心意烦燥，重则肝目受伤。
须令心中常有一团太和元气，则疾病消灭，福寿增崇矣。”《（正）对治瞋恚等义》
十、不愚痴而多闻增智——愚痴是无明，迷昧，没有智慧，对事理无所明了，不能
辨别是非，不信因果法则，固执邪见，无正见正信，胡作乱为。如能接受佛陀教育，增
进智慧，便可导入正见，做个事理明白的善人。佛经说，修般若慧以对治愚痴，使令远
离邪见，是名不愚痴。
修定，就是通过念佛，或诵经，或持咒，或静坐，或参禅等方法，培养一种安定、
清净、祥和、稳静的心态；荣辱毁誉，泰然处之；得失随缘，不骄不馁；遇事不慌，一
心不乱；从容不迫，体动心静。心静，则慧生，故能恰当解决人生之种种疑难、困惑与
烦恼，走出低谷，走出困境，离苦得乐。所谓大将风度，指挥若定。因此，这种心态，
有益于现代人生，是我们学习、工作和生活所必需。因此，要修戒、定、慧。
为什么敲钟
佛门、佛事，钟用于祈寿、感化、超度众生。在一口佛钟上铸有这样的铭文：“钟
声闻，烦恼轻，智慧长，菩提生，离地狱，出火炕，愿成佛，度众生。”
佛寺的钟多是晨暮各敲一次，每次紧敲18下，慢敲18下，不紧不慢再敲18下，如此
反复两遍，共108下。为何要定为108下？一说是一年有12月、24节气、72候（五天为一
候），合为108，象征一年轮回，天长地久。另一说是，人有108种烦恼，钟鸣108响，
以尽除人间烦恼。
钟声深沉、洪亮、绵长，才能震撼人心。形大体重的钟基频低，储能大，使钟声深
沉绵长。用加入锡的青铜制钟比黄铜和铁制钟声音青脆。钟的下部和钟唇加厚外张，使
声音向外辐射能力强，就会使钟声洪亮。所以，大凡具有感染力的佛事钟的钟声，都是
由形大体重、钟唇厚而外张的青铜钟发出的。
敲钟时，可别忘了耳闻心诵：“钟声闻，烦恼轻，智慧长，菩提生，离地狱，出火
炕，愿成佛，度众生。” 如此发心，福慧双修，功德无量。
还愿，就是求神保佑的人实践对神许下的诺言；就是愿望成就之后自己愿意付出什么来
感谢。最好的还愿方法是存好心，说好话，做好事，当好人。还愿要挑选黄道吉日，不
能自己随便就去还愿。
古今还愿吉日是根据日月星辰的运动规律，以天干地支为记日内容，阴阳五行生克制化
为基本理论。以用事为经，用神为纬而制定的。选择还愿吉日，则以神为目，以事为刚
，以事序而选择。
各位朋友要记好.还愿时请务必在申时（下午三点）前开始。
附：还愿烧香的规矩
一、寺庙进门
寺庙建筑都有许多道门，从哪一道门进入都有讲究的。据说只有开了光的寺庙才有资格
修十三道门。正中间的三道门，才是供人出入的。普通游客，进门只能走右边的那道门
，中间那道门叫空门，只有出家人才可以出入的。进门时，男客先迈左脚，女客先迈右
脚，而且这步子，需迈得越大越好。同时进庙内殿宇时应遵循左门进右门出的原则。注
意：一定不能踩踏在门槛(据说门槛代表佛祖的肩膀，当然不能踩踏)之上。而登临第1
和第6个台阶的行礼意味着一心一意和六六大顺的含义。
二、拜佛原则
拜佛前，先要净（洗）手。香不能叫“买”而应该叫“请”。普通人敬香要用左手持(
据说右手不净，普通人杀生大多用右手)，三炷为自己祈福，六炷为两辈人祈福，九炷
为三代人祈福。而十三是一个极致，十三炷香就是功德圆满的高香。先烧香再叩头。烧
香的话，应该是左手拿香，右手拿烛。烧香时，先用自己的火点燃香，要越旺越好，人
们就常说香火旺盛嘛。左手在上，右手在下握住香，高举过头顶作揖。作揖后，把香插
在香灰里，就可进门叩头了。叩头的话，要认准佛祖菩萨或罗汉。比如，你不能向地藏
菩萨一阵猛叩头。上香以3支为宜，此表示“戒、定、慧”三无漏学；也表示供养佛、
法、僧常住三宝。这是最圆满且文明的烧香供养。上香不在多少，贵在心诚，所谓“烧
三支文明香，敬—片真诚心”。香入香炉时应呈水平角度，曰平平安安。
跪拜的姿势是这样的，双膝跪在蒲团上，双手合什，注意，这个双掌合什要注意手心处
呈空心状，高举过头顶，向下至嘴边停顿，可许愿，再向下至心口，默念，再摊开双掌
，掌心向上，上身拜倒。
祈福还有一个仪式叫"开光"，当然是由得道高僧来主持最好。平时开光的东西置于家中
，须得初一十五净手焚香，否则为不敬。但如果是很特殊的开普光，则不同，开光的物
件可随身携带。供开光的物件只能是象牙、金或玉制品。
把开光的物品和写上被祈福人的姓名和生庚八字(记不住生庚八字亦可不写)的纸用红纸
或红锦囊包好，递上随喜一份(最好是以三六九数字相关)，请大师帮忙开光。
开光的过程是把所有的开光物件放于一托盘，置于佛前，大师念经数篇，即算是佛光普
照。你的物件因些而赋于灵气与法力，可以带在身边保佑你了。
三、上香原则
1.用自己的火将香点燃；
2.用两手的中指和食指夹着香杆，大姆指顶着香的尾部；
3.安置胸前，香头平对菩萨圣像；
4.再举香齐眉；
5.之后，放下如第3动作；
6.开始用左手分插。
插香的第一种方法：
第一支香插中央。
第二支香插右边。
第三支香插左边。
插香的第二种方法是先右，念：“誓断一切恶。”次左，念：“誓修一切善。”后中，
念：“誓度一切众生。”
插香的第三种方法是最简单的，和第一法一样，但念得比较简单，第一支香插中间，念
：“供养佛，觉而不迷；”第二支香插右边，念：“供养法，正而不邪；”第三支香插
左边，念：“供养僧，净而不染。”
上完香后，应对佛像，肃立合掌，恭敬礼佛(合掌，心中默念：“愿此香华云，直达三
宝所（或念：“直达诸佛所”）恳求大慈悲，施与众生乐。”)。
如果是上环香，就要以点燃之处向佛，两手像持长香的方式一样。
要是上檀香（即檀木劈成之小枝）时，就要用双手大指和食指拿着香的两头，中指、无
名指、小指都张开伸直，高举齐眉，前后放进香炉；第一根檀香用左手拈起，右手接过
送入；第二支则利用右手拈起，左手送入；第三支又和第一支一样。观想默念的方法都
要和上长香时一样。烧香就是供养，烧檀香最好！
四、烧香注意事项:
在寺庙内有很多菩萨，如果你愿意，可以一尊一尊的拜过去，如果时间不允许，只需在
大雄宝殿前烧。步骤如下:
1、自己请自己的香，不能由别人付香火钱。
2、最好用自己的火点燃香(三支即可，不需要大把大把的烧)，面朝大殿的大门；双手
轻握三支青香(男的左手在上，右手在下，女士反之)，突然向上方一提，
燃烧的火随即会熄灭，千万不能用嘴去吹灭。
3、上香时先上香后礼拜，三根香就够了，敬在一个炉中即可，“万佛一炉”然后经过
每一座佛堂时，合掌拜三下就可，佛教根本就没有诸多讲究，最主要你有没有清净自心。
4、把香举至额头一般高，闭眼许愿，然后三拜。（举香的高度不得底于下身）
5、右转，面朝东方(一般大殿的门是朝南的)，按第3步方式许愿，三拜；然后朝南，朝
北。拜完后即可将香插到香炉内，注意：应该用左手燃香，因为右手杀生，左手相对来
说要平和，不可往香炉内一丢了之。
6、女人来例假时候不要去上香。
7、进庙烧香，意思是点燃自己的心香，点灯是点亮自己的心灯，这时就可以得到佛菩
萨的加持，使自己得到智慧等等。所以香可以烧一枝，可以烧两枝，最多烧三枝。不必
多烧。进庙烧香，可以自己带，也可以从外头买，不过一般大殿上都备有香，所以你可
直接用，如果经济条件允许，你可以往功德箱中放点功德钱，如果困难，放心菩萨不会
怪罪你的，你拜了佛也一样有功德。
8、焚三支清香，一支敬佛，一支敬法，一支敬僧；庙里的垫子中间是给出家人拜佛用
的，在家人男人跪拜用左边的，女人用右边的；进入殿门里，帽及手杖须自提携或寄放
他室为佳，万不可向佛案及佛桌上安放。尽量不要走中间，沿阶梯边沿而上，男左女右
，进门时尽量不要走正门，因为方丈门朝晚课时都是从正门进的，而沙弥等从偏门进，
所以为了和寺院一致，大家都尽量应该从偏门进，男左女右，进去时尽量跨右脚，出门
时也从偏门出就是，不要踩在门槛上（一般寺院门槛做得很高）。进庙门的时候,千万
不要踩门槛。
9、心要虔诚，要茹素，手要干净，不要在庙堂里大声喧哗以及说无关的“唠叨话”，
不要用手指点佛像，不可大声喧哗和讲不敬的话语。还有比较重要的一点，不可以随口
胡乱许愿，因为许愿一定要还愿的；如果没把握做到，就千万别许愿。别求发财，佛不
是保佑你发财的。可以求平安，求健康顺遂。不要随口许诺给佛什么供养，然后又抛到
脑后。佛又不争你的一柱香，这个说法是要让我们不要随意承诺，所谓做人应该有言必
践吧。佛所恼的应该是这些虚妄之言吧。
10、在庙里按顺时针方向行走拜佛，不要跨过蒲团，因为会给人一种不庄严的感觉，凡
有人礼拜时，不可在他的前头走过。
11、去道观许愿是要还愿的。一年愿望实现后回来，方法进去问人就可以了。如果没许
愿光是拜，就不用。寺院一般是不用还愿的，但是你最好许个做多少善事的愿。就发愿
来促使你本身的许愿。
12、不要不经寺院同意采摘寺院管理范围的花果，私自拿供品等物，这也是不对的行为
，叫“偷盗四方常住”也要获果报的。
烧香祈福的正确方法
按照我国的传统习俗，每年春节及农历初一、十五等日期，广大群众有到寺院香礼佛、
祈福求安的习惯。为使十方善信种植福田、广获法益、正善正行，以满所愿，故将烧香
祈福的正确方法简要的介绍给大家，以祈共沾法益。
一、烧香礼佛的真实意义是什么？
寺院是佛 教徒培福修慧的场所，古称丛林，通常在寺院大雄宝殿上供奉的叫释迦牟尼
佛，是古印度净饭王的太子，后出家修行，在菩提树下证道。成为大彻大悟的觉者，是
佛教的创始人，被佛弟子尊为“世尊”、“本师”等。烧香礼佛的真实意义在于表达对
佛陀的尊敬、感激与怀念。去染成净，奉献人生，觉悟人生。如此而行，自然福慧具足
，心想事成。
二、供养佛、菩薩一定要烧香吗？
不一定。供养佛、菩薩方法很多，通常用鲜花（表因）和水果（表果），如果条件不具
备，仅供一杯清水（表清净平等）也行。但是，绝对不用酒肉来供养佛菩薩。通常用“
香、花、灯、涂、果、乐”六供养，其中之一均可。
三、烧香的含义是什么？
第一、表示虔诚恭敬供养三宝，以此示范接引众生。
第二、表示传递信息于虚空法界，感通十方三宝加持。
第三、表示燃烧自身，普香十方，提醒佛门弟子无私奉献。
第四、表示点燃了佛 教徒的戒定真香，含有默誓“勤修戒、定、慧，熄灭贪、喧、痴
”意，佛并不嗜好世间大香贵香，但却喜欢佛弟子的戒、定真香。
四、烧香求财可以得到吗？
不可以。佛经上讲：“佛氏门中，有求必应”。关键要懂得其中道理，求财要如理如法
去求。燃香成灰是表示无私的奉献，即佛门所说的“布施”。这启示我们：从生求财求
福，先要舍财种福。财布施是因，得财富是果。舍是因，得是果，舍得不二。所以，一
个人的福报是自己修来的，不是佛菩薩施舍给你的。佛门常讲：“命由己造，福由己求
。”烧大香就发大财吗？这纯属“以凡夫之心，度诸佛之腹”。大彻大悟、大慈大悲的
诸佛菩薩，又怎会像凡夫众生一样，去在意你大香小香而分别赐富呢？当然不会。
五、有人一定要烧香怎么办？
寺院是公共活动场所，一般会限制烧大香，加上节假日人流量多，烧大香稍为不慎就会
灼伤他人，浓烟滚滚，不利环保，也易引起火患，如此，求福不成，反造无边罪业。一
定要烧大香的信众，可将大香交给寺院管理人员，同意安排焚烧，焚烧时，寺院里的法
师也会为你们祈祷。
六、烧香礼佛应当许什么样的愿？
烧香礼佛时应当心地清净，果能一尘不染，获福无边。若要许愿，当放弃自私自利，损
人利己的念头，发利益社会、利益众生之大心愿，则功德无量。佛经上讲“礼佛一拜，
灭罪河沙；念佛一声，福增无量”是也。
七、礼拜佛菩薩，上几支香为宜？
上三支香为宜。此表示“戒、定、慧”三无漏学；也表示供养佛、法、僧常住三宝。这
是最圆满且文明的烧香供养。上香不在多少，贵在心诚，所谓“烧三支文明香，敬—片
真诚心”。
八、寺院里供的佛菩薩很多，给每个佛、菩薩都要烧三支香吗？
不一定。一般在大雄宝殿前上三支香就行了，其他各殿合掌礼拜，效果是一样的。当然
，也可以按照寺院的规定，根据寺院香炉分布的情况自行决定，但每个香炉中不超过三
支香为宜。
九、把点燃的香拿在手上拜佛正确吗？
不正确。把香点燃后应插在香炉中间，第一支香插在中间，心中默念：供养佛，觉而不
迷；第二支香插在右边，心中默念：供养法，正而不牙阝；第三支香插在左边，心中默
念：供养僧，净而不染。上完香后，应对佛像，肃立合掌，恭敬礼佛。现在有人将一把
香点燃以后拿在手上拜佛，既可能引起火患，烧伤他人或自己，也容易烧坏拜垫和器物
，更造成浓烟滚滚，污染环境，危害健康，实在是不文明不如法。
十、什么方法供养佛菩薩功德最大？
佛经上说：“一切供养中，法供养第一。”所谓法供养就是佛经上的教导，如理如法受
持诵读，自行化他，为人演说。即在日常生活和待人处世中：“诸恶莫作，众善奉行。
”
B*e
4 楼
i5-2400 + Intel H67 Micro ATX motherboard + 8GB GSkill Ripjaws DDR3 1333，
用集成的显卡， windows 7 ultimate 64 bit
大的网页上下翻动的时候声音有时候会有迟顿， 还有几次看netflix 的时候蓝屏死机
。 我感觉至少是显卡driver 还有bug。
主板上5 个SATA 接口( 3 SATA II, 2 SATA III), 不够用， 而且没有IDE 接口。 用
SATA 光驱还要占SATA 口。
现在用了一块pci-e 的sata/ide 接口卡， 正在排查其他的蓝屏是否跟这块卡有关。
现在1155 的主板一般就5-6 sata 接口， 有ide 接口的也很少。
用集成的显卡， windows 7 ultimate 64 bit
大的网页上下翻动的时候声音有时候会有迟顿， 还有几次看netflix 的时候蓝屏死机
。 我感觉至少是显卡driver 还有bug。
主板上5 个SATA 接口( 3 SATA II, 2 SATA III), 不够用， 而且没有IDE 接口。 用
SATA 光驱还要占SATA 口。
现在用了一块pci-e 的sata/ide 接口卡， 正在排查其他的蓝屏是否跟这块卡有关。
现在1155 的主板一般就5-6 sata 接口， 有ide 接口的也很少。
m*o
5 楼
在做5-race，目的是得到一个蛋白的short form。已经得到了一个从exon6开始转录的
短的RNA，而且也得到一些UTR序列在5intorn。 用的是ambion First choice RLM RACE
KIT. 得到的片段测序，mRNA起始的位点总是不一样。起始点最长有60bp的差别。而且
在UTR序列里面有3个ATG都在读码框架里，请问怎么知道哪个ATG是真正的翻译起始点？
除了RACE，还有什么实验可以确定mRNA的起始点呢？
另外一个问题，在做另一个蛋白的RACE时候，得到过两次先表达Exon5,然后是exon2的
序列，有这样的exon rearrangement 吗？就是先转录下游的exon然后再回过头转录上
游的exon? 第一次得到这个结果的时候觉得可能是artificial，但是用不同的primer又
得到了一次这样的结果。而且还是complete的exon序列。请各位发表点意见建议吧，我
google也没有找到类似的事情。
短的RNA，而且也得到一些UTR序列在5intorn。 用的是ambion First choice RLM RACE
KIT. 得到的片段测序，mRNA起始的位点总是不一样。起始点最长有60bp的差别。而且
在UTR序列里面有3个ATG都在读码框架里，请问怎么知道哪个ATG是真正的翻译起始点？
除了RACE，还有什么实验可以确定mRNA的起始点呢？
另外一个问题，在做另一个蛋白的RACE时候，得到过两次先表达Exon5,然后是exon2的
序列，有这样的exon rearrangement 吗？就是先转录下游的exon然后再回过头转录上
游的exon? 第一次得到这个结果的时候觉得可能是artificial，但是用不同的primer又
得到了一次这样的结果。而且还是complete的exon序列。请各位发表点意见建议吧，我
google也没有找到类似的事情。
i*y
6 楼
谢谢提醒
s*r
7 楼
随便看看吧，这书就是吵架打脸图个乐呵，涉及专业的东西没一个符合逻辑的，数学就
是解算式
【在 V********6 的大作中提到】
: 这本书我应该写过一个帖子推荐的，很多人说这本书很水，经常是围观群众说几句，大
: 家骂几句，就是一章。
: 但是在这本书是目前类似书里写的最好，成就最大，也是最受欢迎的。
: 因为作者能抓住热点，把最新的热点写到书里，让读者很有代入感，而且作者写打脸情
: 节，那是写的很让人看的热血沸腾，当然作者写张烨装逼也很有水平，怎么说呢。
: 就是文字和情急都很好，所以这本书在起点一直人气很高。
: 可是最近这书写的脑残了。
: 完全不 符合逻辑。比如说张烨是最危险的黑客，把全世界其他国家的黑客给吓坏了，
: 他自己说自己是黑客，这也不应该坐牢是吧。这不符合逻辑。
: 而且之前是韩国入侵中国这边，张烨把韩国给干了，韩国凭什么说是中国的黑客出问题
是解算式
【在 V********6 的大作中提到】
: 这本书我应该写过一个帖子推荐的，很多人说这本书很水，经常是围观群众说几句，大
: 家骂几句，就是一章。
: 但是在这本书是目前类似书里写的最好，成就最大，也是最受欢迎的。
: 因为作者能抓住热点，把最新的热点写到书里，让读者很有代入感，而且作者写打脸情
: 节，那是写的很让人看的热血沸腾，当然作者写张烨装逼也很有水平，怎么说呢。
: 就是文字和情急都很好，所以这本书在起点一直人气很高。
: 可是最近这书写的脑残了。
: 完全不 符合逻辑。比如说张烨是最危险的黑客，把全世界其他国家的黑客给吓坏了，
: 他自己说自己是黑客，这也不应该坐牢是吧。这不符合逻辑。
: 而且之前是韩国入侵中国这边，张烨把韩国给干了，韩国凭什么说是中国的黑客出问题
t*t
8 楼
5个sata口是因为你买便宜的板子. p67和h67本身都支持6个sata, 一般稍好点的还再给
饶两个别家的. 至于ide, 有没有都不是大问题吧...
【在 B*******e 的大作中提到】
: i5-2400 + Intel H67 Micro ATX motherboard + 8GB GSkill Ripjaws DDR3 1333，
: 用集成的显卡， windows 7 ultimate 64 bit
: 大的网页上下翻动的时候声音有时候会有迟顿， 还有几次看netflix 的时候蓝屏死机
: 。 我感觉至少是显卡driver 还有bug。
: 主板上5 个SATA 接口( 3 SATA II, 2 SATA III), 不够用， 而且没有IDE 接口。 用
: SATA 光驱还要占SATA 口。
: 现在用了一块pci-e 的sata/ide 接口卡， 正在排查其他的蓝屏是否跟这块卡有关。
: 现在1155 的主板一般就5-6 sata 接口， 有ide 接口的也很少。
饶两个别家的. 至于ide, 有没有都不是大问题吧...
【在 B*******e 的大作中提到】
: i5-2400 + Intel H67 Micro ATX motherboard + 8GB GSkill Ripjaws DDR3 1333，
: 用集成的显卡， windows 7 ultimate 64 bit
: 大的网页上下翻动的时候声音有时候会有迟顿， 还有几次看netflix 的时候蓝屏死机
: 。 我感觉至少是显卡driver 还有bug。
: 主板上5 个SATA 接口( 3 SATA II, 2 SATA III), 不够用， 而且没有IDE 接口。 用
: SATA 光驱还要占SATA 口。
: 现在用了一块pci-e 的sata/ide 接口卡， 正在排查其他的蓝屏是否跟这块卡有关。
: 现在1155 的主板一般就5-6 sata 接口， 有ide 接口的也很少。
w*n
9 楼
1. a) It is not surprising that a gene has multiple transcription start
sites.
b) You can use the Kozak sequence to PREDICT which ATG is likely to be
used as translational start site.
2). This looks odd.Are you sure the direction of the gene you look at is
correct? Because in the kit, there use random oligo to synthesize cDNA,
followed by gene-specific primer for PCR.
Good luck!
sites.
b) You can use the Kozak sequence to PREDICT which ATG is likely to be
used as translational start site.
2). This looks odd.Are you sure the direction of the gene you look at is
correct? Because in the kit, there use random oligo to synthesize cDNA,
followed by gene-specific primer for PCR.
Good luck!
V*6
10 楼
数学那些我是看不懂
【在 s******r 的大作中提到】
: 随便看看吧，这书就是吵架打脸图个乐呵，涉及专业的东西没一个符合逻辑的，数学就
: 是解算式
B*e
11 楼
intel 自己板子的第6 个sata 接口用作了外置的sata 接口。
我想用集显， 只有H67 可以用。
6 个 SATA 接口+ 1 个IDE 接口我刚刚够用。 要不然得8 个SATA 接口。
实际上我买的时候没注意到这板子没有 IDE 接口。 还没有ps/2 的接口（老的键盘用
惯了， 不想换）。
【在 t****t 的大作中提到】
: 5个sata口是因为你买便宜的板子. p67和h67本身都支持6个sata, 一般稍好点的还再给
: 饶两个别家的. 至于ide, 有没有都不是大问题吧...
我想用集显， 只有H67 可以用。
6 个 SATA 接口+ 1 个IDE 接口我刚刚够用。 要不然得8 个SATA 接口。
实际上我买的时候没注意到这板子没有 IDE 接口。 还没有ps/2 的接口（老的键盘用
惯了， 不想换）。
【在 t****t 的大作中提到】
: 5个sata口是因为你买便宜的板子. p67和h67本身都支持6个sata, 一般稍好点的还再给
: 饶两个别家的. 至于ide, 有没有都不是大问题吧...
C*e
12 楼
除了5' RACE还可以做primer extension啊
不过就是要用P32
如果同时又好几个mRNA TSS的话
结果上也会看到几个不同大小的片段
然后根据信号的强弱可以知道哪个是主要的TSS
对于翻译起始位点
不能光看ATG吧
还要结合RBS看
不过就是要用P32
如果同时又好几个mRNA TSS的话
结果上也会看到几个不同大小的片段
然后根据信号的强弱可以知道哪个是主要的TSS
对于翻译起始位点
不能光看ATG吧
还要结合RBS看
j*g
13 楼
这书完全不能去细想
只能是打脸爽文看
里面有的BUG甚至是没有办法补的
比如最新的几张，跟美国同期上影
结果美国的前几个小时结果都出来了，中国还没有首发
显然是为了打脸而打脸整出的错误
【在 V********6 的大作中提到】
: 这本书我应该写过一个帖子推荐的，很多人说这本书很水，经常是围观群众说几句，大
: 家骂几句，就是一章。
: 但是在这本书是目前类似书里写的最好，成就最大，也是最受欢迎的。
: 因为作者能抓住热点，把最新的热点写到书里，让读者很有代入感，而且作者写打脸情
: 节，那是写的很让人看的热血沸腾，当然作者写张烨装逼也很有水平，怎么说呢。
: 就是文字和情急都很好，所以这本书在起点一直人气很高。
: 可是最近这书写的脑残了。
: 完全不 符合逻辑。比如说张烨是最危险的黑客，把全世界其他国家的黑客给吓坏了，
: 他自己说自己是黑客，这也不应该坐牢是吧。这不符合逻辑。
: 而且之前是韩国入侵中国这边，张烨把韩国给干了，韩国凭什么说是中国的黑客出问题
只能是打脸爽文看
里面有的BUG甚至是没有办法补的
比如最新的几张，跟美国同期上影
结果美国的前几个小时结果都出来了，中国还没有首发
显然是为了打脸而打脸整出的错误
【在 V********6 的大作中提到】
: 这本书我应该写过一个帖子推荐的，很多人说这本书很水，经常是围观群众说几句，大
: 家骂几句，就是一章。
: 但是在这本书是目前类似书里写的最好，成就最大，也是最受欢迎的。
: 因为作者能抓住热点，把最新的热点写到书里，让读者很有代入感，而且作者写打脸情
: 节，那是写的很让人看的热血沸腾，当然作者写张烨装逼也很有水平，怎么说呢。
: 就是文字和情急都很好，所以这本书在起点一直人气很高。
: 可是最近这书写的脑残了。
: 完全不 符合逻辑。比如说张烨是最危险的黑客，把全世界其他国家的黑客给吓坏了，
: 他自己说自己是黑客，这也不应该坐牢是吧。这不符合逻辑。
: 而且之前是韩国入侵中国这边，张烨把韩国给干了，韩国凭什么说是中国的黑客出问题
t*t
14 楼
esata也可以当sata用的, 就是接线麻烦点, 还要换根线. 事实上intel的南桥一直是6
个sata, 以前你用的好板子送你一个jmicron或者marvell的sata/pata芯片而已. 这跟
sandy bridge毫无关系的.
【在 B*******e 的大作中提到】
: intel 自己板子的第6 个sata 接口用作了外置的sata 接口。
: 我想用集显， 只有H67 可以用。
: 6 个 SATA 接口+ 1 个IDE 接口我刚刚够用。 要不然得8 个SATA 接口。
: 实际上我买的时候没注意到这板子没有 IDE 接口。 还没有ps/2 的接口（老的键盘用
: 惯了， 不想换）。
个sata, 以前你用的好板子送你一个jmicron或者marvell的sata/pata芯片而已. 这跟
sandy bridge毫无关系的.
【在 B*******e 的大作中提到】
: intel 自己板子的第6 个sata 接口用作了外置的sata 接口。
: 我想用集显， 只有H67 可以用。
: 6 个 SATA 接口+ 1 个IDE 接口我刚刚够用。 要不然得8 个SATA 接口。
: 实际上我买的时候没注意到这板子没有 IDE 接口。 还没有ps/2 的接口（老的键盘用
: 惯了， 不想换）。
K*4
15 楼
For 5'RACE, choose the longest one. Short ones may be degenerated mRNA,
although the longest one is most likely degenerated too.
ATGATGATG is a way to start an effective translation.
RACE
【在 m***o 的大作中提到】
: 在做5-race，目的是得到一个蛋白的short form。已经得到了一个从exon6开始转录的
: 短的RNA，而且也得到一些UTR序列在5intorn。 用的是ambion First choice RLM RACE
: KIT. 得到的片段测序，mRNA起始的位点总是不一样。起始点最长有60bp的差别。而且
: 在UTR序列里面有3个ATG都在读码框架里，请问怎么知道哪个ATG是真正的翻译起始点？
: 除了RACE，还有什么实验可以确定mRNA的起始点呢？
: 另外一个问题，在做另一个蛋白的RACE时候，得到过两次先表达Exon5,然后是exon2的
: 序列，有这样的exon rearrangement 吗？就是先转录下游的exon然后再回过头转录上
: 游的exon? 第一次得到这个结果的时候觉得可能是artificial，但是用不同的primer又
: 得到了一次这样的结果。而且还是complete的exon序列。请各位发表点意见建议吧，我
: google也没有找到类似的事情。
although the longest one is most likely degenerated too.
ATGATGATG is a way to start an effective translation.
RACE
【在 m***o 的大作中提到】
: 在做5-race，目的是得到一个蛋白的short form。已经得到了一个从exon6开始转录的
: 短的RNA，而且也得到一些UTR序列在5intorn。 用的是ambion First choice RLM RACE
: KIT. 得到的片段测序，mRNA起始的位点总是不一样。起始点最长有60bp的差别。而且
: 在UTR序列里面有3个ATG都在读码框架里，请问怎么知道哪个ATG是真正的翻译起始点？
: 除了RACE，还有什么实验可以确定mRNA的起始点呢？
: 另外一个问题，在做另一个蛋白的RACE时候，得到过两次先表达Exon5,然后是exon2的
: 序列，有这样的exon rearrangement 吗？就是先转录下游的exon然后再回过头转录上
: 游的exon? 第一次得到这个结果的时候觉得可能是artificial，但是用不同的primer又
: 得到了一次这样的结果。而且还是complete的exon序列。请各位发表点意见建议吧，我
: google也没有找到类似的事情。
f*t
16 楼
5个sata都不够用？你都接啥了？
m*o
17 楼
谢谢wenqian and chamgrape。
1.如果gene有很多不同的转录起始点，那这些都是capped的吗？如果miss掉了ATG那岂
不是造成能量的浪费了吗？
2.direction 可以确定是对的，不太明白怎么可以方向不对，因为kit里面是forward
primer, you have your gene specific primer as reverse primer.
pubmed里那么多的gene都是primer extension得到的全序列吗？
1.如果gene有很多不同的转录起始点，那这些都是capped的吗？如果miss掉了ATG那岂
不是造成能量的浪费了吗？
2.direction 可以确定是对的，不太明白怎么可以方向不对，因为kit里面是forward
primer, you have your gene specific primer as reverse primer.
pubmed里那么多的gene都是primer extension得到的全序列吗？
a*e
18 楼
一堆250G小硬盘，机箱够大
【在 f*****t 的大作中提到】
: 5个sata都不够用？你都接啥了？
【在 f*****t 的大作中提到】
: 5个sata都不够用？你都接啥了？
m*o
19 楼
谢谢Ka84.the first 2 ATG do is together like ATGATG, the third ATG is 3 AA
downstream. so I check the sequence, maybe the second is most strong one.
downstream. so I check the sequence, maybe the second is most strong one.
B*e
20 楼
4 640GB, 2 1T, 1 500GB, 1 blueray
【在 f*****t 的大作中提到】
: 5个sata都不够用？你都接啥了？
【在 f*****t 的大作中提到】
: 5个sata都不够用？你都接啥了？
Z*5
21 楼
其实要找翻译起始位点为什么不从蛋白质入手呢？打个质谱就搞定了。
退一步，如果你有部分蛋白序列，也可以大概推测一下，看看读码框，说不定就能找到
起始的ATG。
如果要从纯序列入手，貌似记得以前分子生物学上讲过，一般ATG前面的序列会形成茎
环的二级结构，便于ATG的识别（我觉得这个不太靠谱）。当然也注意一下读码框，看
看哪个ATG翻译出来的序列比较合理。（比如可以看终止密码子的位置，就知道蛋白大
小是否合理， 检查翻译出的蛋白质的序列特征，比如预测一下可溶性等）
===========================
关于TSS的问题，现在一般认为很多基因都是有多个TSS的。比如我做的一个基因，就发
现在不同的细胞中使用不同的TSSs，大概查几十bp。 建议你挑20个以上克隆测序，然
后看TSS的分布情况。 当然为了省事，你测十来个，直接说最长的那个就是也可以（现
在很多文章也是这么发的），或者不做克隆，直接将最后一轮的PCR产物测序。
退一步，如果你有部分蛋白序列，也可以大概推测一下，看看读码框，说不定就能找到
起始的ATG。
如果要从纯序列入手，貌似记得以前分子生物学上讲过，一般ATG前面的序列会形成茎
环的二级结构，便于ATG的识别（我觉得这个不太靠谱）。当然也注意一下读码框，看
看哪个ATG翻译出来的序列比较合理。（比如可以看终止密码子的位置，就知道蛋白大
小是否合理， 检查翻译出的蛋白质的序列特征，比如预测一下可溶性等）
===========================
关于TSS的问题，现在一般认为很多基因都是有多个TSS的。比如我做的一个基因，就发
现在不同的细胞中使用不同的TSSs，大概查几十bp。 建议你挑20个以上克隆测序，然
后看TSS的分布情况。 当然为了省事，你测十来个，直接说最长的那个就是也可以（现
在很多文章也是这么发的），或者不做克隆，直接将最后一轮的PCR产物测序。
f*t
22 楼
全出了进两个2T的不就得了
【在 B*******e 的大作中提到】
: 4 640GB, 2 1T, 1 500GB, 1 blueray
j*x
23 楼
估计你做的这个gene甚至物种是没有已知的基因组序列信息的吧，否则你也就不会费劲
做RACE了。
把你的编码产物比对一下近缘物种的基因组序列（如果有全长cDNA序列当然最好），蛋
白质的N端往往是比较保守的，根据近缘物种的ortholog可以很大程度上帮助你确定5'
端起始位点。
如果你确定你拿到了完整的5'端序列（包含UTR），那么根据Kozak规则，ORF里第一个
符合Kozak规则的ATG就很大可能是起始ATG。真核mRNA不同于原核mRNA，基本不存在什
么RBS序列的概念，5' mG cap就是核糖体识别和结合的位点，然后往下游移动遇到合适
的ATG就开始翻译了（至少我当年上医学分子生物学的时候老师是什么说的，呵呵）
如果你不确定你是否获得了完整的mRNA 5'序列，那么继续吧，至少先通过NB等方法确
定一下可能有几个转录本，最长的转录本有多大。因为alternative splicing等等因素
的存在，一个基因存在多个翻译起始位点确实很常见，这也是基因表达调控的一种重要
方式了，遇到这种情况，你可能需要在5' RACE的引物设计上下点心思，用来区别不同
的mRNA产物。
做RACE了。
把你的编码产物比对一下近缘物种的基因组序列（如果有全长cDNA序列当然最好），蛋
白质的N端往往是比较保守的，根据近缘物种的ortholog可以很大程度上帮助你确定5'
端起始位点。
如果你确定你拿到了完整的5'端序列（包含UTR），那么根据Kozak规则，ORF里第一个
符合Kozak规则的ATG就很大可能是起始ATG。真核mRNA不同于原核mRNA，基本不存在什
么RBS序列的概念，5' mG cap就是核糖体识别和结合的位点，然后往下游移动遇到合适
的ATG就开始翻译了（至少我当年上医学分子生物学的时候老师是什么说的，呵呵）
如果你不确定你是否获得了完整的mRNA 5'序列，那么继续吧，至少先通过NB等方法确
定一下可能有几个转录本，最长的转录本有多大。因为alternative splicing等等因素
的存在，一个基因存在多个翻译起始位点确实很常见，这也是基因表达调控的一种重要
方式了，遇到这种情况，你可能需要在5' RACE的引物设计上下点心思，用来区别不同
的mRNA产物。
C*n
24 楼
今天已经开始召回了？
【在 B*******e 的大作中提到】
: i5-2400 + Intel H67 Micro ATX motherboard + 8GB GSkill Ripjaws DDR3 1333，
: 用集成的显卡， windows 7 ultimate 64 bit
: 大的网页上下翻动的时候声音有时候会有迟顿， 还有几次看netflix 的时候蓝屏死机
: 。 我感觉至少是显卡driver 还有bug。
: 主板上5 个SATA 接口( 3 SATA II, 2 SATA III), 不够用， 而且没有IDE 接口。 用
: SATA 光驱还要占SATA 口。
: 现在用了一块pci-e 的sata/ide 接口卡， 正在排查其他的蓝屏是否跟这块卡有关。
: 现在1155 的主板一般就5-6 sata 接口， 有ide 接口的也很少。
【在 B*******e 的大作中提到】
: i5-2400 + Intel H67 Micro ATX motherboard + 8GB GSkill Ripjaws DDR3 1333，
: 用集成的显卡， windows 7 ultimate 64 bit
: 大的网页上下翻动的时候声音有时候会有迟顿， 还有几次看netflix 的时候蓝屏死机
: 。 我感觉至少是显卡driver 还有bug。
: 主板上5 个SATA 接口( 3 SATA II, 2 SATA III), 不够用， 而且没有IDE 接口。 用
: SATA 光驱还要占SATA 口。
: 现在用了一块pci-e 的sata/ide 接口卡， 正在排查其他的蓝屏是否跟这块卡有关。
: 现在1155 的主板一般就5-6 sata 接口， 有ide 接口的也很少。
m*o
25 楼
谢谢楼上各位。
tozifeng85: 蛋白纯化不出来是不可以打质谱吧，有3个离的很近的ATG都在读码框架里。
juzbox，我做的这个gene有全gene序列，而且已经知道全长cDNA的序列，就是根据全长
序列，我才能说这个短的有3个ATG都在读码框架里。知道基因组序列信息可以怎么做而
不用做RACE呢？有什么网站或者软件推荐吗？
另外蛋白N端比较保守，我觉得不对呢，我读了些alternative splicing 的文章，大部
分是N端不一样，而都保留相同的C端。
我现在比较确定拿到了比较靠5‘端的序列，但是不能保证就是最长的，而且再上游没
有ATG。 现在打算是先设计几个引物，在得到的最长的序列的5’和3‘端，做RTPCR，
然后看看产物强弱，再设计几个RACEprimer比较靠近5’端，再挑一轮clone测序。
另外先转录下游exon再转录上游exon的情况没有人遇到过吗？
tozifeng85: 蛋白纯化不出来是不可以打质谱吧，有3个离的很近的ATG都在读码框架里。
juzbox，我做的这个gene有全gene序列，而且已经知道全长cDNA的序列，就是根据全长
序列，我才能说这个短的有3个ATG都在读码框架里。知道基因组序列信息可以怎么做而
不用做RACE呢？有什么网站或者软件推荐吗？
另外蛋白N端比较保守，我觉得不对呢，我读了些alternative splicing 的文章，大部
分是N端不一样，而都保留相同的C端。
我现在比较确定拿到了比较靠5‘端的序列，但是不能保证就是最长的，而且再上游没
有ATG。 现在打算是先设计几个引物，在得到的最长的序列的5’和3‘端，做RTPCR，
然后看看产物强弱，再设计几个RACEprimer比较靠近5’端，再挑一轮clone测序。
另外先转录下游exon再转录上游exon的情况没有人遇到过吗？
a*e
26 楼
P67 only?
【在 C********n 的大作中提到】
: 今天已经开始召回了？
【在 C********n 的大作中提到】
: 今天已经开始召回了？
w*d
27 楼
Just my personal opinions for your reference. Maybe I am wrong.
1. If it is up to me, I will subclone the longest fragment and fuse it to
the upstream of a reporter gene, then mutate the three respective ATG to see
if there is any difference. Ususlly, the first ATG is dominant in
transcription.
2. Is it possible that your GSP acutally recognize a sequence in the reverse
orientation and there is a transcript generated in the reverse orientation?
There maybe duplicated sequence in genome.
1. If it is up to me, I will subclone the longest fragment and fuse it to
the upstream of a reporter gene, then mutate the three respective ATG to see
if there is any difference. Ususlly, the first ATG is dominant in
transcription.
2. Is it possible that your GSP acutally recognize a sequence in the reverse
orientation and there is a transcript generated in the reverse orientation?
There maybe duplicated sequence in genome.
f*t
28 楼
还没，只是停止出货
not Only P67.
【在 C********n 的大作中提到】
: 今天已经开始召回了？
j*x
29 楼
一般而言真核生物翻译起始的规则是，符合Kozak规则的一个ATG就是起始ATG。查一下
你这3个离得很近的ATG哪些是符合“AXXATGG”条件的，简言之只要-3位点是A或者+4位
点是G，那么就足够起始翻译了。如果你的第一个ATG就符合，那应该就没什么疑虑了。
后面的2个ATG如果也符合，那么理论上也有可能起始翻译，但是效率会比第一个ATG低
很多很多倍。你可以设想，在正常蛋白序列中，N端有多个相距不远的M是很正常的事情
，要是随机从这些M开始起始翻译，还不乱套了。
你也说有了cDNA序列和gene序列了，那么理论上的最长翻译产物自然是清楚的了，用这
个氨基酸序列比对模式物种，如果N端能匹配，自然是很强的佐证了。
里。
【在 m***o 的大作中提到】
: 谢谢楼上各位。
: tozifeng85: 蛋白纯化不出来是不可以打质谱吧，有3个离的很近的ATG都在读码框架里。
: juzbox，我做的这个gene有全gene序列，而且已经知道全长cDNA的序列，就是根据全长
: 序列，我才能说这个短的有3个ATG都在读码框架里。知道基因组序列信息可以怎么做而
: 不用做RACE呢？有什么网站或者软件推荐吗？
: 另外蛋白N端比较保守，我觉得不对呢，我读了些alternative splicing 的文章，大部
: 分是N端不一样，而都保留相同的C端。
: 我现在比较确定拿到了比较靠5‘端的序列，但是不能保证就是最长的，而且再上游没
: 有ATG。 现在打算是先设计几个引物，在得到的最长的序列的5’和3‘端，做RTPCR，
: 然后看看产物强弱，再设计几个RACEprimer比较靠近5’端，再挑一轮clone测序。
你这3个离得很近的ATG哪些是符合“AXXATGG”条件的，简言之只要-3位点是A或者+4位
点是G，那么就足够起始翻译了。如果你的第一个ATG就符合，那应该就没什么疑虑了。
后面的2个ATG如果也符合，那么理论上也有可能起始翻译，但是效率会比第一个ATG低
很多很多倍。你可以设想，在正常蛋白序列中，N端有多个相距不远的M是很正常的事情
，要是随机从这些M开始起始翻译，还不乱套了。
你也说有了cDNA序列和gene序列了，那么理论上的最长翻译产物自然是清楚的了，用这
个氨基酸序列比对模式物种，如果N端能匹配，自然是很强的佐证了。
里。
【在 m***o 的大作中提到】
: 谢谢楼上各位。
: tozifeng85: 蛋白纯化不出来是不可以打质谱吧，有3个离的很近的ATG都在读码框架里。
: juzbox，我做的这个gene有全gene序列，而且已经知道全长cDNA的序列，就是根据全长
: 序列，我才能说这个短的有3个ATG都在读码框架里。知道基因组序列信息可以怎么做而
: 不用做RACE呢？有什么网站或者软件推荐吗？
: 另外蛋白N端比较保守，我觉得不对呢，我读了些alternative splicing 的文章，大部
: 分是N端不一样，而都保留相同的C端。
: 我现在比较确定拿到了比较靠5‘端的序列，但是不能保证就是最长的，而且再上游没
: 有ATG。 现在打算是先设计几个引物，在得到的最长的序列的5’和3‘端，做RTPCR，
: 然后看看产物强弱，再设计几个RACEprimer比较靠近5’端，再挑一轮clone测序。
t*8
30 楼
2x1T,3x2T... 一个esata，一个留着上ssd。
以后再升级只有出了1T的WDC Black了。
【在 f*****t 的大作中提到】
:
: 还没，只是停止出货
: not Only P67.
以后再升级只有出了1T的WDC Black了。
【在 f*****t 的大作中提到】
:
: 还没，只是停止出货
: not Only P67.
m*o
31 楼
Thanks, whitesand.
1. We are thinking of doing that way. But most plasmid has a strong promoter
, I am guessing whenever they meet ATG they all will transcribe. The other
possible is we clone this gene's own promoter and mutate each of the 3 ATG
to see. There will be a lot of work and now I do not have any idea how long
the promoter will be.
2. If my GSP recoginze a sequence in the reverse orientation, why it
transcript the complete exon not part of it?
I am thinking of what wenqian said because the kit use random primer,it is
possible the second structure of the mRNA is speicial and make the cDNA from
the exon 5 very near exon2 and by some unknown reason they connect together
. I am planning to design primer at exon5, 6, and 2 to do RTPCR and see what
I got.
To Juzbox,My 1st ATG do not have -3A and +4G, the 2nd one because is ATGATG
together so it has -3A but no +4G. the 3rd ATG which is 2 amino acid away
has -3A but no +4G. looks I should considering the 2nd ATG.
1. We are thinking of doing that way. But most plasmid has a strong promoter
, I am guessing whenever they meet ATG they all will transcribe. The other
possible is we clone this gene's own promoter and mutate each of the 3 ATG
to see. There will be a lot of work and now I do not have any idea how long
the promoter will be.
2. If my GSP recoginze a sequence in the reverse orientation, why it
transcript the complete exon not part of it?
I am thinking of what wenqian said because the kit use random primer,it is
possible the second structure of the mRNA is speicial and make the cDNA from
the exon 5 very near exon2 and by some unknown reason they connect together
. I am planning to design primer at exon5, 6, and 2 to do RTPCR and see what
I got.
To Juzbox,My 1st ATG do not have -3A and +4G, the 2nd one because is ATGATG
together so it has -3A but no +4G. the 3rd ATG which is 2 amino acid away
has -3A but no +4G. looks I should considering the 2nd ATG.
c*r
32 楼
嘿嘿，还是你明白
这个问题其实是molecular biology比较经典的问题。过去有很多解决方法。但是现在
。。。其实很简单。后面的ATG几乎没有start的机会。除非，搞个牛的基因，full
genomic sequence不清楚，那还需要primer extension一下，否则绝大多数都不需要这
么麻烦。他的race一般过去也是拿到一段sequence，然后重新设计primer在5 prime再
次做race。一般大小的mRNA有个几次就是full sequence了。
如果lz的mRNA有60bp的差别，最简单就是用这60bp做个RT-PCR，或者设计个probe在这
60bp的头上，做个northern就知道哪里开始了。
【在 j****x 的大作中提到】
: 一般而言真核生物翻译起始的规则是，符合Kozak规则的一个ATG就是起始ATG。查一下
: 你这3个离得很近的ATG哪些是符合“AXXATGG”条件的，简言之只要-3位点是A或者+4位
: 点是G，那么就足够起始翻译了。如果你的第一个ATG就符合，那应该就没什么疑虑了。
: 后面的2个ATG如果也符合，那么理论上也有可能起始翻译，但是效率会比第一个ATG低
: 很多很多倍。你可以设想，在正常蛋白序列中，N端有多个相距不远的M是很正常的事情
: ，要是随机从这些M开始起始翻译，还不乱套了。
: 你也说有了cDNA序列和gene序列了，那么理论上的最长翻译产物自然是清楚的了，用这
: 个氨基酸序列比对模式物种，如果N端能匹配，自然是很强的佐证了。
:
: 里。
这个问题其实是molecular biology比较经典的问题。过去有很多解决方法。但是现在
。。。其实很简单。后面的ATG几乎没有start的机会。除非，搞个牛的基因，full
genomic sequence不清楚，那还需要primer extension一下，否则绝大多数都不需要这
么麻烦。他的race一般过去也是拿到一段sequence，然后重新设计primer在5 prime再
次做race。一般大小的mRNA有个几次就是full sequence了。
如果lz的mRNA有60bp的差别，最简单就是用这60bp做个RT-PCR，或者设计个probe在这
60bp的头上，做个northern就知道哪里开始了。
【在 j****x 的大作中提到】
: 一般而言真核生物翻译起始的规则是，符合Kozak规则的一个ATG就是起始ATG。查一下
: 你这3个离得很近的ATG哪些是符合“AXXATGG”条件的，简言之只要-3位点是A或者+4位
: 点是G，那么就足够起始翻译了。如果你的第一个ATG就符合，那应该就没什么疑虑了。
: 后面的2个ATG如果也符合，那么理论上也有可能起始翻译，但是效率会比第一个ATG低
: 很多很多倍。你可以设想，在正常蛋白序列中，N端有多个相距不远的M是很正常的事情
: ，要是随机从这些M开始起始翻译，还不乱套了。
: 你也说有了cDNA序列和gene序列了，那么理论上的最长翻译产物自然是清楚的了，用这
: 个氨基酸序列比对模式物种，如果N端能匹配，自然是很强的佐证了。
:
: 里。
j*x
33 楼
LZ现在的困惑不是转录起始位点，转录起始位点就是mRNA 5'UTR开始的位置，这个5'
RACE如果做的好的话直接就出来了，毕竟他genomic/cDNA序列基本是明确的，从前RACE
都是根据部分已知的序列来获取剩下的未知序列的，难度差多了。
LZ现在困惑的是翻译起始位点，这个和mRNA 5'端是否有60bp的差别关系不大，通过
northern也无法确定核糖体究竟从哪个ATG开始翻译。如果有ortholog就序列比对一下
看看其他物种中有没有已经鉴定过的同源蛋白，因为相对而言N端是保守的（不讨论
isoforms）。
就像你说的，基本上第一个ATG就是起始ATG，即使不是最佳的Kozak序列，至少也能低
水平的起始翻译，后面的ATG除非有IRES，否则很难有很强的表达，这甚至还有可能是
表达调控的一种方式。
【在 c******r 的大作中提到】
: 嘿嘿，还是你明白
: 这个问题其实是molecular biology比较经典的问题。过去有很多解决方法。但是现在
: 。。。其实很简单。后面的ATG几乎没有start的机会。除非，搞个牛的基因，full
: genomic sequence不清楚，那还需要primer extension一下，否则绝大多数都不需要这
: 么麻烦。他的race一般过去也是拿到一段sequence，然后重新设计primer在5 prime再
: 次做race。一般大小的mRNA有个几次就是full sequence了。
: 如果lz的mRNA有60bp的差别，最简单就是用这60bp做个RT-PCR，或者设计个probe在这
: 60bp的头上，做个northern就知道哪里开始了。
RACE如果做的好的话直接就出来了，毕竟他genomic/cDNA序列基本是明确的，从前RACE
都是根据部分已知的序列来获取剩下的未知序列的，难度差多了。
LZ现在困惑的是翻译起始位点，这个和mRNA 5'端是否有60bp的差别关系不大，通过
northern也无法确定核糖体究竟从哪个ATG开始翻译。如果有ortholog就序列比对一下
看看其他物种中有没有已经鉴定过的同源蛋白，因为相对而言N端是保守的（不讨论
isoforms）。
就像你说的，基本上第一个ATG就是起始ATG，即使不是最佳的Kozak序列，至少也能低
水平的起始翻译，后面的ATG除非有IRES，否则很难有很强的表达，这甚至还有可能是
表达调控的一种方式。
【在 c******r 的大作中提到】
: 嘿嘿，还是你明白
: 这个问题其实是molecular biology比较经典的问题。过去有很多解决方法。但是现在
: 。。。其实很简单。后面的ATG几乎没有start的机会。除非，搞个牛的基因，full
: genomic sequence不清楚，那还需要primer extension一下，否则绝大多数都不需要这
: 么麻烦。他的race一般过去也是拿到一段sequence，然后重新设计primer在5 prime再
: 次做race。一般大小的mRNA有个几次就是full sequence了。
: 如果lz的mRNA有60bp的差别，最简单就是用这60bp做个RT-PCR，或者设计个probe在这
: 60bp的头上，做个northern就知道哪里开始了。
m*o
34 楼
我是不是还没有讲明白，急死了。转录和翻译的起始点我都困惑。
这个5UTR是在原来gene的intron里面。
关于翻译的起始点，是不是原则No1是第一个ATG一般就是起始的，No2 才是考虑Kozak
序列。虽然后面的两个有Kozak序列，但因为第一个ATG挡在那里，所以翻译还是从第一
个开始。
关于转录的起始点，我测了20多个序列了。如果第一个ATG的A为0，那么我只有一个在
大概-70（这是最远的），有2个在-4，其余的大概好几个就在+4+5+6位置，还有好多在
+15to+18之间（这个就是3个ATG的下游了）。（原来说的60个bp的差别该改成88个）。
如果在3个ATG的下游，那岂不就没法翻译了吗。不过PCR倾向于拷短的条带，所以有可
能放大了短的片段。
然后我用RT-PCR把5‘引物放在+24，可以看到很强的条带，放到-20条带就弱了很多，
放到-70位置，就更弱了。但是都能看到条带，而且对照很干净，所以就是说这些不同
长度的RNA都存在。而且还有可能-90的位置可能也转录了，但是我没有得到克隆测序。
所以我现在就很想知道转录到底哪是起始点。
另外做5-RACE，大家可以得到很一致的序列吗？kit的protocol也建议多测序，我想得
到不同的长度也很正常，但是我做另一组的RACE的时候就很怪，5个克隆全是一样的序
列，结果呢就是后面的exon跑到了前面去了。
所以我就困惑困惑------
这个5UTR是在原来gene的intron里面。
关于翻译的起始点，是不是原则No1是第一个ATG一般就是起始的，No2 才是考虑Kozak
序列。虽然后面的两个有Kozak序列，但因为第一个ATG挡在那里，所以翻译还是从第一
个开始。
关于转录的起始点，我测了20多个序列了。如果第一个ATG的A为0，那么我只有一个在
大概-70（这是最远的），有2个在-4，其余的大概好几个就在+4+5+6位置，还有好多在
+15to+18之间（这个就是3个ATG的下游了）。（原来说的60个bp的差别该改成88个）。
如果在3个ATG的下游，那岂不就没法翻译了吗。不过PCR倾向于拷短的条带，所以有可
能放大了短的片段。
然后我用RT-PCR把5‘引物放在+24，可以看到很强的条带，放到-20条带就弱了很多，
放到-70位置，就更弱了。但是都能看到条带，而且对照很干净，所以就是说这些不同
长度的RNA都存在。而且还有可能-90的位置可能也转录了，但是我没有得到克隆测序。
所以我现在就很想知道转录到底哪是起始点。
另外做5-RACE，大家可以得到很一致的序列吗？kit的protocol也建议多测序，我想得
到不同的长度也很正常，但是我做另一组的RACE的时候就很怪，5个克隆全是一样的序
列，结果呢就是后面的exon跑到了前面去了。
所以我就困惑困惑------
p*i
35 楼
转录的起始位点：
如果有TATA BOX, 很可能是single transcription start site，
但是大多数真核gene都没有TATA BOX，所以都是有好几个TSS clusters，每个TSS
cluster里面的TSS们大概在200bp这么大的范围之内
如果有几个相聚较远的TSS cluster，那么这个gene有可能有不同的mRNA species，但
是还是要做实验去验证
是不是应该针对每一个mRNA species，再单独考虑start codon 的问题？
however... 貌似很多gene都有不同的mRNA species，但是不一定这些mRNA species都
有功能，更不一定都会translate成蛋白
你说你的目的是得到一个蛋白的short form，
你expect short form和wild type的区别是什么？
after all, if there is nothing new about this short form, you cannot publish
, right?
是不是可以把可能的short form的ORF都表达出来，然后和wild type做对比？
【在 m***o 的大作中提到】
: 我是不是还没有讲明白，急死了。转录和翻译的起始点我都困惑。
: 这个5UTR是在原来gene的intron里面。
: 关于翻译的起始点，是不是原则No1是第一个ATG一般就是起始的，No2 才是考虑Kozak
: 序列。虽然后面的两个有Kozak序列，但因为第一个ATG挡在那里，所以翻译还是从第一
: 个开始。
: 关于转录的起始点，我测了20多个序列了。如果第一个ATG的A为0，那么我只有一个在
: 大概-70（这是最远的），有2个在-4，其余的大概好几个就在+4+5+6位置，还有好多在
: +15to+18之间（这个就是3个ATG的下游了）。（原来说的60个bp的差别该改成88个）。
: 如果在3个ATG的下游，那岂不就没法翻译了吗。不过PCR倾向于拷短的条带，所以有可
: 能放大了短的片段。
如果有TATA BOX, 很可能是single transcription start site，
但是大多数真核gene都没有TATA BOX，所以都是有好几个TSS clusters，每个TSS
cluster里面的TSS们大概在200bp这么大的范围之内
如果有几个相聚较远的TSS cluster，那么这个gene有可能有不同的mRNA species，但
是还是要做实验去验证
是不是应该针对每一个mRNA species，再单独考虑start codon 的问题？
however... 貌似很多gene都有不同的mRNA species，但是不一定这些mRNA species都
有功能，更不一定都会translate成蛋白
你说你的目的是得到一个蛋白的short form，
你expect short form和wild type的区别是什么？
after all, if there is nothing new about this short form, you cannot publish
, right?
是不是可以把可能的short form的ORF都表达出来，然后和wild type做对比？
【在 m***o 的大作中提到】
: 我是不是还没有讲明白，急死了。转录和翻译的起始点我都困惑。
: 这个5UTR是在原来gene的intron里面。
: 关于翻译的起始点，是不是原则No1是第一个ATG一般就是起始的，No2 才是考虑Kozak
: 序列。虽然后面的两个有Kozak序列，但因为第一个ATG挡在那里，所以翻译还是从第一
: 个开始。
: 关于转录的起始点，我测了20多个序列了。如果第一个ATG的A为0，那么我只有一个在
: 大概-70（这是最远的），有2个在-4，其余的大概好几个就在+4+5+6位置，还有好多在
: +15to+18之间（这个就是3个ATG的下游了）。（原来说的60个bp的差别该改成88个）。
: 如果在3个ATG的下游，那岂不就没法翻译了吗。不过PCR倾向于拷短的条带，所以有可
: 能放大了短的片段。
m*o
36 楼
Philipli,十分感谢你的建议。
做short form 的目的是：wild type 和short form是在不同的组织中表达。以前认为
这个gene only expressed in one specific tissue A, but after the lab got the
knock out mice, it has different phenotype. We trying to figure out the
mechanism if these related with the specific tissue A or the gene also
expressed in other tissue but at short form.
我现在是打算把这个short form最长的ORF表达出来看看，但是老板感兴趣的那个组织
我没有检测到，所以还会继续race.
还有问题没有彻底明白：
1 现在这个short form的TSS,我测到的是大概90bp的差别，是不是可以说是一个TSS
cluster?
2 你说每个cluster里面有大概200bp的差别，记得看过一篇文章说短的5UTR，可能就意
味着很强的表达，那如果有200bp的差别，那细胞岂不是有很多mRNA就miss掉了ATG，那
岂不是一种浪费？
3 mRNA species 是不是就指不同的tss 而且会导致产生不同长度的蛋白，和
alternative splicing 是两个概念吗？
谢谢！
做short form 的目的是：wild type 和short form是在不同的组织中表达。以前认为
这个gene only expressed in one specific tissue A, but after the lab got the
knock out mice, it has different phenotype. We trying to figure out the
mechanism if these related with the specific tissue A or the gene also
expressed in other tissue but at short form.
我现在是打算把这个short form最长的ORF表达出来看看，但是老板感兴趣的那个组织
我没有检测到，所以还会继续race.
还有问题没有彻底明白：
1 现在这个short form的TSS,我测到的是大概90bp的差别，是不是可以说是一个TSS
cluster?
2 你说每个cluster里面有大概200bp的差别，记得看过一篇文章说短的5UTR，可能就意
味着很强的表达，那如果有200bp的差别，那细胞岂不是有很多mRNA就miss掉了ATG，那
岂不是一种浪费？
3 mRNA species 是不是就指不同的tss 而且会导致产生不同长度的蛋白，和
alternative splicing 是两个概念吗？
谢谢！
c*r
37 楼
有证据证明这个short form存在吗？
the
【在 m***o 的大作中提到】
: Philipli,十分感谢你的建议。
: 做short form 的目的是：wild type 和short form是在不同的组织中表达。以前认为
: 这个gene only expressed in one specific tissue A, but after the lab got the
: knock out mice, it has different phenotype. We trying to figure out the
: mechanism if these related with the specific tissue A or the gene also
: expressed in other tissue but at short form.
: 我现在是打算把这个short form最长的ORF表达出来看看，但是老板感兴趣的那个组织
: 我没有检测到，所以还会继续race.
: 还有问题没有彻底明白：
: 1 现在这个short form的TSS,我测到的是大概90bp的差别，是不是可以说是一个TSS
the
【在 m***o 的大作中提到】
: Philipli,十分感谢你的建议。
: 做short form 的目的是：wild type 和short form是在不同的组织中表达。以前认为
: 这个gene only expressed in one specific tissue A, but after the lab got the
: knock out mice, it has different phenotype. We trying to figure out the
: mechanism if these related with the specific tissue A or the gene also
: expressed in other tissue but at short form.
: 我现在是打算把这个short form最长的ORF表达出来看看，但是老板感兴趣的那个组织
: 我没有检测到，所以还会继续race.
: 还有问题没有彻底明白：
: 1 现在这个short form的TSS,我测到的是大概90bp的差别，是不是可以说是一个TSS
m*o
38 楼
western blot上在别的组织上有个短的条带在WT上有，但是在knockout上就消失，别的
非特异条带没有变化。但是我现在觉得这个我找到的shortform不是看到的那个条带，
因为根据这个序列推测蛋白要小很多。
现在我比较确定这个shortform mRNA 的表达在我做的这个组织上很高，因为RT用这个
短的5UTR为forward primer（全长没有这个序列），可以看到很亮的条带，但是别的组
织没有。
我现在也有些不知该怎么往下做，因为抗体不是很好，很多非特异条带。
非特异条带没有变化。但是我现在觉得这个我找到的shortform不是看到的那个条带，
因为根据这个序列推测蛋白要小很多。
现在我比较确定这个shortform mRNA 的表达在我做的这个组织上很高，因为RT用这个
短的5UTR为forward primer（全长没有这个序列），可以看到很亮的条带，但是别的组
织没有。
我现在也有些不知该怎么往下做，因为抗体不是很好，很多非特异条带。
m*o
39 楼
刚补习了些基础知识，我想这种情况就是所谓的alternative promoter。进化就是用这
种方法来进行组织特异性表达，和调控。
种方法来进行组织特异性表达，和调控。
p*i
40 楼
你现在有一个从intron5开始，接上exon6的RNA
就现有的序列，你不妨把可能的ORF(从每个ATG开始)都translate一遍：
一种可能是short form protein和wild type蛋白是相同reading frame，只是短了很多
。如果是这样的话，wild type蛋白的functional domain在short form protein里还有
多少？
另外一种可能就是short form protein有新的reading frame...
当然，还有可能就是你现在看到的ATG都不是start codon...
【在 m***o 的大作中提到】
: western blot上在别的组织上有个短的条带在WT上有，但是在knockout上就消失，别的
: 非特异条带没有变化。但是我现在觉得这个我找到的shortform不是看到的那个条带，
: 因为根据这个序列推测蛋白要小很多。
: 现在我比较确定这个shortform mRNA 的表达在我做的这个组织上很高，因为RT用这个
: 短的5UTR为forward primer（全长没有这个序列），可以看到很亮的条带，但是别的组
: 织没有。
: 我现在也有些不知该怎么往下做，因为抗体不是很好，很多非特异条带。
就现有的序列，你不妨把可能的ORF(从每个ATG开始)都translate一遍：
一种可能是short form protein和wild type蛋白是相同reading frame，只是短了很多
。如果是这样的话，wild type蛋白的functional domain在short form protein里还有
多少？
另外一种可能就是short form protein有新的reading frame...
当然，还有可能就是你现在看到的ATG都不是start codon...
【在 m***o 的大作中提到】
: western blot上在别的组织上有个短的条带在WT上有，但是在knockout上就消失，别的
: 非特异条带没有变化。但是我现在觉得这个我找到的shortform不是看到的那个条带，
: 因为根据这个序列推测蛋白要小很多。
: 现在我比较确定这个shortform mRNA 的表达在我做的这个组织上很高，因为RT用这个
: 短的5UTR为forward primer（全长没有这个序列），可以看到很亮的条带，但是别的组
: 织没有。
: 我现在也有些不知该怎么往下做，因为抗体不是很好，很多非特异条带。
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