紧急求助:请大家推荐 RACE试剂盒# Biology - 生物学f*e2011-06-21 07:061 楼如果你的好朋友,跟你关系很不错,人也很考谱,去追求一个有女朋友的男人,而且抢到了,你会指责她,和她划清界限,还是支持她这个人(不论你是不是赞同她的价值观)。
W*n2011-06-21 07:062 楼请大家推荐 RACE试剂盒:想扩增获得5‘区及全长基因。查了几家,感觉大家比较推荐genetech的,但是十个反应的要740$,觉得很贵。希望有过经验的朋友指点一下,以前没有做过RACE. 谢谢!
C*e2011-06-21 07:064 楼没用过RACE kit但是做过RACE你要3'不?基因多长?我用的RLM-RACE,就是RNA ligase mediated RACE你搜文献应该能搜到具体就是利用RNA ligase可以连ssRNA+ssDNA合成DNA oligomer,上面有一段adaptor sequence(跟你的目的基因/目的基因组没有同源性就行),5’端和3’端都要-OH吧,然后RNA ligase会催化把这段DNA连到mRNA上,再做1st strand cDNA synthesis然后用gene specific reverse primer和adaptor forward primer (可以是你前面用的adaptor,也可以重新设计引物,往里面来一点,做巢式PCR)来扩你要的基因这样子好像应该比$740便宜很多【在 W*********n 的大作中提到】: 请大家推荐 RACE试剂盒:想扩增获得5‘区及全长基因。: 查了几家,感觉大家比较推荐genetech的,但是十个反应的要740$,觉得很贵。希望有: 过经验的朋友指点一下,以前没有做过RACE. 谢谢!
W*n2011-06-21 07:066 楼谢谢! 我再查查。【在 C*******e 的大作中提到】: 没用过RACE kit: 但是做过RACE: 你要3'不?: 基因多长?: 我用的RLM-RACE,就是RNA ligase mediated RACE: 你搜文献应该能搜到: 具体就是利用RNA ligase可以连ssRNA+ssDNA: 合成DNA oligomer,上面有一段adaptor sequence(跟你的目的基因/目的基因组没有: 同源性就行),5’端和3’端都要-OH吧,然后RNA ligase会催化把这段DNA连到mRNA上: ,再做1st strand cDNA synthesis
W*n2011-06-21 07:0612 楼谢谢各位的信息!【在 f********n 的大作中提到】: 我用下面的这个克隆过2个全长基因哦。不到2千的全长。: CapFishing(seegene, seoul, Korea).