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求助,real-time PCR的技术重复结果不稳定
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求助,real-time PCR的技术重复结果不稳定# Biology - 生物学
n*9
1
【 以下文字转载自 NextGeneration 讨论区 】
发信人: niuniu9 (ox bb), 信区: NextGeneration
标 题: 牙不整齐
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Oct 19 12:17:33 2010, 美东)
我闺女8个月出了三颗牙,有两个是歪歪的,和牙床有角度的,有经验的MM们说一说,
将来换牙之后有可能整齐吗?
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h*9
2
1。问有没有I-94 in possession.现在i-94都是电子版的了,要retrieve.那算不算in
possession?
2. B2 status应该不算从H-1B status derive出来的吧?
谢了。
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a*4
3
最近到处看到的都是关于乐视的招聘信息,看来落地美国硅谷发展迅速啊,什么三星、
苹果、Google等高管都被挖过去了,感觉乐视还是有雄心壮志,腰包挺深的。但是他们
描述的那种未来理想型的发展,听起来挺脑洞大开,不知道内行人能不能听得懂。我唯
一对乐视的了解就是他们电视、盒子、还有现在手机都做的不错,至于他们想打入的无
人汽车和虚拟现实等技术,就要拭目以待了。
说这个事情是今天看到他们在论坛俱乐部http://www.mitbbs.com/club_bbsdoc/LeEco.html里面一篇文章,讲以前在三星领导90人的团队设计整个Galaxy系列和Note系列手机用户界面的设计师韩国人金炳周,后来到LG设计电视,现在也跳槽到乐视美国,成为他们EUI部门电视和VR的UI/UX设计总监。这是不是说明现在这些老牌高科技巨头都不行了,根本留不住人才?乐视应该工资没有三星LG这些公司高吧,股票也暂时没有那么值钱,是企业文化跟不上社会变化吗?
分享几段摘抄过来值得看的,访问金炳周的内容:
金炳周:“当我还在三星的时候,我做了很多关于企业和市场的调研,乐视在中国的移
动业务方面做得十分出色。LeEco有内容、有服务,也有各种不同类型的终端承载所有
内容。它不只是一个营销的手法,而是规模十分广大的商业模式。在今年年底,我们还
将推出新的EUI 6.0版本,这将是UI系统的一个大大升级,用户会在视觉上很直观地感
受到跨平台流畅操作,也会在交互体验上有更强的视觉冲击力。”
金炳周:“是什么让一个人的成就与众不同?是知识和经验累计成的执行力。如果你真
的想有所改变,就必须具备这两项条件,强烈的热情和执行力。信任是最具挑战性和最
让我满意的东西。当你加入新的公司,如果在短短的时间内得到了同事的信任,那就是
一个巨大的成功。如果你得到了用户的信任,那就是更大的成功。这种经验或感觉,就
好像每时每刻都在建立公司的形象和品牌。”
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Y*u
4
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leonana (leonany) 于 (Mon Oct 17 23:22:50 2011, 美东) 提到:
自己把自己钉上十字架?
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gundam (Hi-v) 于 (Mon Oct 17 23:24:32 2011, 美东) 提到:
换你怎么做?
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leonana (leonany) 于 (Mon Oct 17 23:42:17 2011, 美东) 提到:
快刀斩乱麻
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heyes (hoooyou) 于 (Mon Oct 17 23:47:08 2011, 美东) 提到:
两天没来,这里就炒炒成这样了,大师门都从打坐的垫子上,噌噌跃起,甩开膀子,裸
体群殴乐。佛家以seeU为带领,开展了轰轰烈烈的文艺大整风运动。。。哈!
好热闹!看来是快过节了。。。
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heyes (hoooyou) 于 (Mon Oct 17 23:49:38 2011, 美东) 提到:
Yisu人相对厚道。要换我,先出来把看不顺眼的一个一个骂一圈,完事!
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leonana (leonany) 于 (Mon Oct 17 23:56:24 2011, 美东) 提到:
高兴不?
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leonana (leonany) 于 (Mon Oct 17 23:57:15 2011, 美东) 提到:
她是默默牺牲型的
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bdbd (kakali) 于 (Tue Oct 18 00:03:56 2011, 美东) 提到:
当初是Jeaniris硬缠着Yisu要当板斧的,现在又逼人家下台让她上。。。。就是Yisu手
太软啦,早就不该让她干的,现在到反过来倒打一耙。
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heyes (hoooyou) 于 (Tue Oct 18 00:21:08 2011, 美东) 提到:
哈!高兴是高兴,不过想到对于高兴快乐太执取,是“贪”念,我正想要好好内观一下
这个高兴的贪念。
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 00:27:37 2011, 美东) 提到:
真是的,别人噌噌跃起,你怎么坐下了
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SeeU (See you) 于 (Tue Oct 18 01:25:22 2011, 美东) 提到:
说辞职的是 Yisu, 说不辞的也是 Yisu,
推荐 JeanIris 竞选下任版主的是 Yisu, 要罢免 JeanIris 版副的也是 Yisu
你能说∶耶稣是这样的人嘛?
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 01:29:55 2011, 美东) 提到:
耶稣被钉上去之前的那几句话看过没? 另外你指控亦苏的证据呢?
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SeeU (See you) 于 (Tue Oct 18 01:35:13 2011, 美东) 提到:
你能说 Yisu 没有作这些事吗?
叫水王与 Yisu 对质吧。PM 都公布一下。
正主出来才有用。我只是催场。
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wisdomlover (一片冰心在玉壶) 于 (Tue Oct 18 01:39:14 2011, 美东) 提到:
为什么他们要公布?
他们私下交换
PMs难道有问题呀? 不懂。
而且别人又怎么知道,
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wisdomlover (一片冰心在玉壶) 于 (Tue Oct 18 01:41:59 2011, 美东) 提到:
”推荐 JeanIris 竞选下任版主的是 Yisu, 要罢免 JeanIris 版副的也是 Yisu“
There is no conflict ya.而且版主也没有什么权利可以推荐下一个版主。
所以说鼓励更合适。
大家到时候会表达意见。 我看从BORAD的意见会有很多人不同意JEANIRIS的。
而且的确如果YISU下了,整个TEAM就下了, 把机会给别人更好, 这个TEAM没必要继续占位。
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wisdomlover (一片冰心在玉壶) 于 (Tue Oct 18 01:54:42 2011, 美东) 提到:
就算YISU处理和板斧的事情不当,
你和JEANIRIS站出来,给她造这么大的罪名,
还是挺不好的。
真的, 你和JEANIRIS 发的对她的指控,从我们旁观者来看都是
站不住脚的呀, 而且真的是欲加之罪的感觉。
最多是YISU处理不当,这件事绝对不会到说的那些指控地步。
就算YISU给大家发PM了, 难道还有别的目的? 除了希望版面和谐繁荣。
最多是处理不当,怎么可能是要哦做什么。
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heyes (hoooyou) 于 (Tue Oct 18 01:55:10 2011, 美东) 提到:
爱儿兰好象人还可以, 版副蛮尽心的, 说的很多话还算蛮客观的.
其实我觉得吧, 如果她和班主有什么冲突, 应该让他们自己解决, 大伙不参与就是.
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heyes (hoooyou) 于 (Tue Oct 18 02:00:02 2011, 美东) 提到:
我这刚一坐下, 就捂出了以下"八荣八耻"
(供各位高人探讨)
以热爱慧版为荣、以危害慧版为耻,
以崇尚打坐为荣、以噌噌跃起为耻,
以辛勤灌水为荣、以看贴不回为耻,
以该骂就骂为荣、以藏着掖着为耻,
以轻松愉快为荣、以一本正经为耻,
以苦苦无常为荣、以高兴快乐为耻,
以超脱涅盘为荣、以骄奢淫逸为耻,
以不信上述为荣、以恪守教条为耻。
所以, 我知耻乐 ("以高兴快乐为耻")
同时, 我也感到很光荣 ("以崇尚打坐为荣")...
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 02:01:54 2011, 美东) 提到:
你那叫催场? 我觉得有几个人评论得好,根本就是批斗
你是不是在暗示,只要作版主就不可以改变主意?有点霸道过分了吧
就你到现在为止公布的东东,看不出她符合你给她戴上的高帽子,你是还有别的资料呢
,还是怎么回事?
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heyes (hoooyou) 于 (Tue Oct 18 02:03:47 2011, 美东) 提到:
哦, 我明白了, Yisu 这名字太象耶稣了...
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 02:05:53 2011, 美东) 提到:
就符合两条?
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heyes (hoooyou) 于 (Tue Oct 18 02:11:05 2011, 美东) 提到:
耶稣是上帝的儿子, 他想干嘛就干嘛. 我看蛮合理的...
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 02:13:56 2011, 美东) 提到:
耶稣和亦酥?
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aroluna (aroluna) 于 (Tue Oct 18 03:38:36 2011, 美东) 提到:
哇, 可以论断耶稣是什么样的人了,把自己当上帝了么,
行为不合你的意就不行了,
控制欲也很强嘛。
幸好现在是民主社会,不是文革时代了。
这个版和基板真是让人大开眼界的说。
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yingkao (依靠) 于 (Tue Oct 18 05:44:29 2011, 美东) 提到:
有这事?!
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 12:16:11 2011, 美东) 提到:
如果说Yisu怕自己辞了JeanIris成了下任版主,这个担心很是没有必要了。既然有辞的
心,就没必要想着控制以后啊。这个版面在有些id心中的重要性,我是体会不出来了
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forl (forl) 于 (Tue Oct 18 12:21:17 2011, 美东) 提到:
汗。。。乱入进来。。。
想说,偶咋完全没觉得JeanIris客观啊。。。
嚼着她动不动就是这个调调:你完全错误/你根本没入门blablabla/或者这是对的!/这
是正确的!/我理解的是对的!blablabla。。。而且相当笃定,惊叹号的语气。。。
心想说,这谁啊,是佛啊还是神啊还是圣母啊还是啥?orzzzzzz
反正不支持她当版主。。。。自PIAAAA-_-
而且制版理念也是同一个原因吧,“偶的理念才应该是对的是正确的是该被执行的”。
。。。可又不是版主,坑爹orzzzz
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 12:45:41 2011, 美东) 提到:
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 12:48:47 2011, 美东) 提到:
waichi当年不也是经常下几个字的论断,你咋不让他注意呢
我倒是绝对版副的那个调调不算啥,表达自己的观点的一个方式而已
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wisdomlover (一片冰心在玉壶) 于 (Tue Oct 18 12:52:18 2011, 美东) 提到:
WAICHI至少有禅定功夫。可以指点一下别人吧。
可能这个版面出现的唯一能禅定的人?
不知道PUPP 是否也是。
BTW,本人还是不支持 外道, 不能因为有禅定就支持。
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 12:54:19 2011, 美东) 提到:
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 13:00:45 2011, 美东) 提到:
有本事也好,没本事也好,表达自己的观点,用自己喜欢的语气,无可厚非了
版副的语言风格,水王的语言风格,我也不喜欢。但是这个不应该成为被人攻击的证据
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 13:01:40 2011, 美东) 提到:
我还觉得waichi有打压别人的倾向呢
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 13:02:29 2011, 美东) 提到:
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 13:03:36 2011, 美东) 提到:
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 13:07:06 2011, 美东) 提到:
谁让你自己不是版主呢,哈哈
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 13:10:26 2011, 美东) 提到:
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 13:11:35 2011, 美东) 提到:
除非有进一步的证据,否则咱们对waichi的分歧就会一直存在。
这点上看,SeeU想得到更多地证据也可以理解,我是希望他是错的
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forl (forl) 于 (Tue Oct 18 13:13:24 2011, 美东) 提到:
不认得waichi。。。。
如果也让人烦了,还不是一样烦
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 13:14:06 2011, 美东) 提到:
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 13:14:35 2011, 美东) 提到:
这我咋知道,你自己琢磨吧
我能搞明白我自己就不错了
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forl (forl) 于 (Tue Oct 18 13:15:00 2011, 美东) 提到:
只是说不支持板斧当版主罢了。。。
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Nathan (Gift) 于 (Tue Oct 18 13:16:47 2011, 美东) 提到:
水王很偏激,意气用事,包括他对YISU的屡次挑衅。哈哈,每次我都会来看这两个怎
么过招。-------但是,他事情都做在明面,且,他不是佛弟子,不是版务人员。
版副和这个SeeU,两个将学佛当成功名事来做,那真是有趣。
-------------
我觉得Yisu版主做得不错。不过,倒不必执着于谁做版务的问题,我还赞成runsun做
版主呢。万事随缘
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 13:16:53 2011, 美东) 提到:
有人烦,也有人喜欢呀
实在看不下去,找版主,可以搞个投票,用民主的方式来决定是否允许,lol
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 13:19:29 2011, 美东) 提到:
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 13:20:38 2011, 美东) 提到:
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forl (forl) 于 (Tue Oct 18 13:26:52 2011, 美东) 提到:
哈哈哈,如果runsun当版主的话貌似本版会相当欢乐?
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forl (forl) 于 (Tue Oct 18 13:28:12 2011, 美东) 提到:
有人烦有人喜欢是正常的吧。。。
决定是否允许神马?
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Nathan (Gift) 于 (Tue Oct 18 13:41:46 2011, 美东) 提到:
runsun倒象是个真心求佛的人,大概是因缘未达,反而剑走偏锋,和这个SeeU一样,为
学日益,为道日损。
不过,也不用说别人,我自个儿也大大的看不开,脾气见长,时时模仿大德说长论
短呢。 -----------所谓三界火宅,皆是自心不能清凉。
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 13:51:55 2011, 美东) 提到:
这个反对,跑日上来只会助长他的狂妄心,会比基板还极品
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forl (forl) 于 (Tue Oct 18 13:52:43 2011, 美东) 提到:
汗,想说,貌似还蛮喜欢看runsun与人的长篇掐架贴。。。相当欢乐啊有木有-_-
(偶就素个唯恐天下不乱的家伙!被殴飞…………orzzz)
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 13:54:42 2011, 美东) 提到:
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forl (forl) 于 (Tue Oct 18 13:57:47 2011, 美东) 提到:
汗。。。这个结论从何而来。。。anyway,今天乱入/抽风太多自PIAAA+爬走。。。
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 14:04:24 2011, 美东) 提到:
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 14:06:44 2011, 美东) 提到:
你是在基板被带坏了。hoho~~~
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 14:07:56 2011, 美东) 提到:
你说跑日做版主?就算比基板还极品,他也折腾不出啥来,也就四个月呗
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luobing (萝冰) 于 (Tue Oct 18 14:11:04 2011, 美东) 提到:
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qiaqiafeng ($_$) 于 (Tue Oct 18 14:18:19 2011, 美东) 提到:
南桔北枳?我看到这个版也没见他变好。
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qiaqiafeng ($_$) 于 (Tue Oct 18 14:20:50 2011, 美东) 提到:
你们版闹关基板啥事儿?
你们都挺高尚的,不至于如此东拉西扯阴损基版吧。
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 14:37:19 2011, 美东) 提到:
我说的是,就算runsun做了版主,行事比基板的前几任还极品极端,也折腾不出啥。论
事,没有论人。
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 15:52:49 2011, 美东) 提到:
不必要的烦恼为啥要特意去找?对跑日也是
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 15:54:17 2011, 美东) 提到:
有什么可烦恼的?
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 16:06:58 2011, 美东) 提到:
现在这点芝麻绿豆大的小事,版上就起码有三个人很烦恼
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 16:11:31 2011, 美东) 提到:
哈,正好给他们修炼的机会
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 16:14:19 2011, 美东) 提到:
不忍心哪,再说先别提修不修炼出得来, 这人品早就丢光了
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akju (金斗爸) 于 (Tue Oct 18 16:16:45 2011, 美东) 提到:
没关系,人是会变的,rp光了也能再回来
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leonana (leonany) 于 (Tue Oct 18 16:25:08 2011, 美东) 提到:
大头菜?剥了一层又一层
avatar
A*i
5
如题!父母要回国了。如果能用,以后父母看照片方便些。 谢谢!
avatar
x*e
6
用的是BIO-RAD的CFX-96 的机器,每个样品做3个技术重复,居然在3个技术重复里面Ct
值有2-3的差异。技术重复都是配成mixture然后pipet到3个well里面的,照理应该是绝
对一样的啊,分装的时候操作也很小心。
用的SYBR green是以前order的ROCHE公司的,在BIO-RAD的机器上做应该没有问题吧?
样品很珍贵,试了几次都快用光了,大家觉得有哪些可能原因?先谢了。
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y*2
7
1, yes
2. no
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t*0
8
我在国内试过,超级慢,推荐用金山快盘

【在 A*****i 的大作中提到】
: 如题!父母要回国了。如果能用,以后父母看照片方便些。 谢谢!
avatar
h*n
9
Ct值大概多少?
avatar
r*r
10
我在国内用dropbox都得翻墙。。。

【在 t****0 的大作中提到】
: 我在国内试过,超级慢,推荐用金山快盘
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Z*5
11
机器多久没校正了?
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A*i
12
翻墙是什么意思?:)
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x*e
13
对照用的是Ubiqutin,Ct值的3个重复分别是23,25,29,误差太大了,我的target基
因的Ct也大概是在23-30之间。我刚刚搜了一下,说模板浓度太低会影响重复性,但如
果Ct在23或者25左右应该不算太低吧。
机器是2个月前才买的新机器,应该不会有受热不均的问题吧?
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b*t
14
全世界都能用的东西,国内都不能用。
但国内肯定有一样的东西,全世界都能用。
avatar
x*e
15
以前很少做real-time,机器要如何校正啊?
avatar
A*i
16
精辟啊!

【在 b*******t 的大作中提到】
: 全世界都能用的东西,国内都不能用。
: 但国内肯定有一样的东西,全世界都能用。

avatar
r*a
17
板子封好了吗?上机前有没有离心?

Ct

【在 x**e 的大作中提到】
: 用的是BIO-RAD的CFX-96 的机器,每个样品做3个技术重复,居然在3个技术重复里面Ct
: 值有2-3的差异。技术重复都是配成mixture然后pipet到3个well里面的,照理应该是绝
: 对一样的啊,分装的时候操作也很小心。
: 用的SYBR green是以前order的ROCHE公司的,在BIO-RAD的机器上做应该没有问题吧?
: 样品很珍贵,试了几次都快用光了,大家觉得有哪些可能原因?先谢了。

avatar
l*t
18
牛!

【在 b*******t 的大作中提到】
: 全世界都能用的东西,国内都不能用。
: 但国内肯定有一样的东西,全世界都能用。

avatar
x*e
19
板子应该封好了,做完以后看well里面的产物体积没有明显的变化。倒是没有离心,但
我加的时候都是直接加到管底,也留意了没有东西挂在管壁上。
avatar
j*u
20
en

【在 b*******t 的大作中提到】
: 全世界都能用的东西,国内都不能用。
: 但国内肯定有一样的东西,全世界都能用。

avatar
A*y
21
I hope you have checked your primer linearity at least. I don't think Biorad CFX-96 needs adjustment. Its optic is based on the chrome4 fiber-optic module.
avatar
t*z
22
如果有条件的话离下心吧,赶掉小气泡,样品少的话,就不要用板上最边缘那一圈,它
们容易漏气。
avatar
v*2
23
Have you done the melting curves? how many products do you have after the
real time PCR? Have you perform the cDNA gradient dilution to optimize your
template concentration? Have you use ROX as refrence? And where do you fill
your samples? is it in edge?
Biorad real time PCR is not so specific, from my experience, Applied system
is far better.
avatar
o*e
24
try Bio-rad's reagent. It will work much better.
avatar
j*n
25
我用过biorad的iq5 一般机器给的几个孔的std大于0.25都认为是重复性不好。我以前
出过一次类似的问题, 最早最早来这个实验室的时候出现的, 是因为最后加的那个酶
混合物, 做master solution的时候没混合彻底,因为那个是保存在甘油里面的,需要
额外多混合几次,然后加模板也要用pipetor上下混合5次以上
除此之外 我没出过类似的问题
试剂不是影响的关键,这种qPCR机器跟试剂技术早已烂大街了,我在biorad机器上几乎用过大部分公司的产品,一致性都是相当好的。
还有,不排除机器老化后,孔之间的温控不均一,不过这个可以通过调整样品位置来排查。
avatar
o*4
26
看样子,离心是关键啊
avatar
s*u
27
All reagents, buffer need thaw and centrifuge throughly.
avatar
j*x
28
这种误差无论在任何机器上使用任何试剂耗材,正常操作下都是不大可能出现的。
1. master mix解冻后要先混匀
2. 有些实验室为了省钱,反应体系只用10ul/well甚至更低。除非你已经很熟练了或者
有机器人,否则不建议这么做。
3. DNA模板用量至少不应低于2ul/well,一般建议4-6ul(必要时应先稀释DNA样本),
这样可以显著减少pipetting error。
4. 加样之后离心是必须步骤,即便留意了加在了管底管壁无明显残留。其实个人感觉
不建议加到管底,这样容易在tip头上粘附残留,带出时还会粘到孔口。直接加到侧壁
上最好,还有自然的混匀过程,封口后离心。
avatar
x*e
29
SYBR green都是在4°保存的,应该不存在均匀与否的问题。cDNA模板都是加的2ul,但
体系是10ul的。回头想一想,还真有可能是离心的问题。我大周末之前做的都还行。周
末由于我们系没有平板离心机,而有离心机的老美实验室又没有人来,所以就图了方便
没有离心了,但加样的时候还是注意了这个问题的,特异加到管底,减少残留在管壁的
可能性。
再试试离心后的结果吧。多谢各位
avatar
i*l
30
离心to mix well 是关键啊

【在 o**4 的大作中提到】
: 看样子,离心是关键啊
avatar
o*4
31
re

【在 i***l 的大作中提到】
: 离心to mix well 是关键啊
avatar
C*u
32
还有一种可能就是你的plate底部粘到了什么dust,肉眼可能看不到,但是会显著影响
你的CT值,所以我一般都把plate放在foil上做的

【在 x**e 的大作中提到】
: SYBR green都是在4°保存的,应该不存在均匀与否的问题。cDNA模板都是加的2ul,但
: 体系是10ul的。回头想一想,还真有可能是离心的问题。我大周末之前做的都还行。周
: 末由于我们系没有平板离心机,而有离心机的老美实验室又没有人来,所以就图了方便
: 没有离心了,但加样的时候还是注意了这个问题的,特异加到管底,减少残留在管壁的
: 可能性。
: 再试试离心后的结果吧。多谢各位

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i*l
33
“技术重复都是配成mixture然后pipet到3个well里面的,照理应该是绝对一样的啊,
分装的时候操作也很小心。”
大哥,技术重复不是那样做的!应该每样都分别加,才叫技术重复啊!
BTW,Master Mix和Primer, cDNA,水这些好像真还不那么容易混匀的。
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i*l
34
大哥,技术重复不是那样做的!应该每样都分别加,才叫技术重复啊!
BTW,Master Mix和Primer, cDNA,水这些好像真还不那么容易混匀的。

Ct

【在 x**e 的大作中提到】
: 用的是BIO-RAD的CFX-96 的机器,每个样品做3个技术重复,居然在3个技术重复里面Ct
: 值有2-3的差异。技术重复都是配成mixture然后pipet到3个well里面的,照理应该是绝
: 对一样的啊,分装的时候操作也很小心。
: 用的SYBR green是以前order的ROCHE公司的,在BIO-RAD的机器上做应该没有问题吧?
: 样品很珍贵,试了几次都快用光了,大家觉得有哪些可能原因?先谢了。

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l*9
35
感觉real time就是很不靠谱……
有把好枪才是关键……
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a*7
36
我们Sybr Green都在-20C保存,15ul体系,6ul cDNA。加完封口混匀了离心一小会。一
步都不能少
封口要把膜来回用力按紧好几次,从中间向边缘绕圈按,先按边缘中间容易鼓起来。

【在 x**e 的大作中提到】
: SYBR green都是在4°保存的,应该不存在均匀与否的问题。cDNA模板都是加的2ul,但
: 体系是10ul的。回头想一想,还真有可能是离心的问题。我大周末之前做的都还行。周
: 末由于我们系没有平板离心机,而有离心机的老美实验室又没有人来,所以就图了方便
: 没有离心了,但加样的时候还是注意了这个问题的,特异加到管底,减少残留在管壁的
: 可能性。
: 再试试离心后的结果吧。多谢各位

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a*7
37
刚来实验室两个中国师兄的枪都收拾的很好,每次用完放回架子上还把所有量程调到最
大。
后来来了两美国人,都是工作以后回来读PhD的,每次用完枪就放桌子上,桌子上
protocol,tube和开着盖子的枪头盒子堆得到处都是,再后来的师弟就跟着乱丢枪,有
的时候找不到就从别人架子上拿,拿完也不放回去,搞得现在实验室枪和枪头很乱,现
在都不敢做PCR了,就怕枪和枪头污染了。诶

【在 l*******9 的大作中提到】
: 感觉real time就是很不靠谱……
: 有把好枪才是关键……

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