g*u
2 楼
最近被一个问题困扰着:
用某种通道蛋白的抗体(通过Western blot和immunohistochemistry) 来研究此蛋白在
一个组织中的表达情况.在大批量的实验前,先做了个预实验测试了下此抗体的特异性.
很奇怪的是,Western blot和immunohistochemistry 都显示在此蛋白完全敲除的动物组
织中还是有弱的阳性表达(和wild-type相比是很弱,但还是能看到非常弱的条带或者染
色).
难道是一抗或者二抗的浓度过大?还是封闭的不够?
注: 1. 此抗体已经有几篇发表的文章显示是特异性的
2. 基因敲除的动物应该没有问题
3. 弱的阳性表达应该不是来自自发荧光或者artifact
非常感谢您的建议和分析!!!
用某种通道蛋白的抗体(通过Western blot和immunohistochemistry) 来研究此蛋白在
一个组织中的表达情况.在大批量的实验前,先做了个预实验测试了下此抗体的特异性.
很奇怪的是,Western blot和immunohistochemistry 都显示在此蛋白完全敲除的动物组
织中还是有弱的阳性表达(和wild-type相比是很弱,但还是能看到非常弱的条带或者染
色).
难道是一抗或者二抗的浓度过大?还是封闭的不够?
注: 1. 此抗体已经有几篇发表的文章显示是特异性的
2. 基因敲除的动物应该没有问题
3. 弱的阳性表达应该不是来自自发荧光或者artifact
非常感谢您的建议和分析!!!
d*d
3 楼
震撼。
【在 x****o 的大作中提到】
【在 x****o 的大作中提到】
s*s
4 楼
什么叫弱的表达？蛋白WB大小也一致么？
另外，发表的WB图把backgound去掉很容易
【在 g******u 的大作中提到】
: 最近被一个问题困扰着:
: 用某种通道蛋白的抗体(通过Western blot和immunohistochemistry) 来研究此蛋白在
: 一个组织中的表达情况.在大批量的实验前,先做了个预实验测试了下此抗体的特异性.
: 很奇怪的是,Western blot和immunohistochemistry 都显示在此蛋白完全敲除的动物组
: 织中还是有弱的阳性表达(和wild-type相比是很弱,但还是能看到非常弱的条带或者染
: 色).
: 难道是一抗或者二抗的浓度过大?还是封闭的不够?
: 注: 1. 此抗体已经有几篇发表的文章显示是特异性的
: 2. 基因敲除的动物应该没有问题
: 3. 弱的阳性表达应该不是来自自发荧光或者artifact
另外，发表的WB图把backgound去掉很容易
【在 g******u 的大作中提到】
: 最近被一个问题困扰着:
: 用某种通道蛋白的抗体(通过Western blot和immunohistochemistry) 来研究此蛋白在
: 一个组织中的表达情况.在大批量的实验前,先做了个预实验测试了下此抗体的特异性.
: 很奇怪的是,Western blot和immunohistochemistry 都显示在此蛋白完全敲除的动物组
: 织中还是有弱的阳性表达(和wild-type相比是很弱,但还是能看到非常弱的条带或者染
: 色).
: 难道是一抗或者二抗的浓度过大?还是封闭的不够?
: 注: 1. 此抗体已经有几篇发表的文章显示是特异性的
: 2. 基因敲除的动物应该没有问题
: 3. 弱的阳性表达应该不是来自自发荧光或者artifact
r*y
5 楼
这应该是天注定里胡大海的原型。
【在 x****o 的大作中提到】
【在 x****o 的大作中提到】
s*d
6 楼
我也遇到过类似的问题。。 很奇怪。~
x*o
7 楼
很多情节都是一样的，甚至细节
【在 r****y 的大作中提到】
: 这应该是天注定里胡大海的原型。
【在 r****y 的大作中提到】
: 这应该是天注定里胡大海的原型。
g*u
8 楼
western blot的条带大小是一致的.弱的表达就是条带的density在knockout动物组织中
低于wildtype动物组织.
您说的对,发表的WB图是很容易把弱的background去除掉.但这个事实还是存在,欺骗不
了自己啊.
【在 s******s 的大作中提到】
: 什么叫弱的表达？蛋白WB大小也一致么？
: 另外，发表的WB图把backgound去掉很容易
低于wildtype动物组织.
您说的对,发表的WB图是很容易把弱的background去除掉.但这个事实还是存在,欺骗不
了自己啊.
【在 s******s 的大作中提到】
: 什么叫弱的表达？蛋白WB大小也一致么？
: 另外，发表的WB图把backgound去掉很容易
a*a
9 楼
很多人都碰到过。
g*u
10 楼
谢谢楼上各位!
但这是什么原因引起的呢,有什么解决办法没?
难道发表的文章中,弱的表达都被PS掉了?
但这是什么原因引起的呢,有什么解决办法没?
难道发表的文章中,弱的表达都被PS掉了?
S*e
11 楼
如果在wild type里很强，Knockout 里很弱就不要管它了，
千万别PS，搞不好会翻船，撤稿
千万别PS，搞不好会翻船，撤稿
g*u
12 楼
谢谢!没打算PS,这个技巧可不敢玩!
就是有点纳闷为什么已经发表的文章中KO动物的组织中连很弱很弱的条带都没有,完全
是干净的!!!
就是有点纳闷为什么已经发表的文章中KO动物的组织中连很弱很弱的条带都没有,完全
是干净的!!!
b*e
13 楼
同有此困扰，有没有高人。。。
y*8
14 楼
What is the size of the protein?
The specificity of antibody is relative. Even some monoclonal Ab hits non-
specific targets.
So, just let it go.
The specificity of antibody is relative. Even some monoclonal Ab hits non-
specific targets.
So, just let it go.
D*a
15 楼
比如说在肌肉里面敲除了但是在血管里面没有敲除？
j*x
16 楼
这个蛋白有没有什么相似的其他家族成员，但是表达水平低的多？
【在 g******u 的大作中提到】
: 最近被一个问题困扰着:
: 用某种通道蛋白的抗体(通过Western blot和immunohistochemistry) 来研究此蛋白在
: 一个组织中的表达情况.在大批量的实验前,先做了个预实验测试了下此抗体的特异性.
: 很奇怪的是,Western blot和immunohistochemistry 都显示在此蛋白完全敲除的动物组
: 织中还是有弱的阳性表达(和wild-type相比是很弱,但还是能看到非常弱的条带或者染
: 色).
: 难道是一抗或者二抗的浓度过大?还是封闭的不够?
: 注: 1. 此抗体已经有几篇发表的文章显示是特异性的
: 2. 基因敲除的动物应该没有问题
: 3. 弱的阳性表达应该不是来自自发荧光或者artifact
【在 g******u 的大作中提到】
: 最近被一个问题困扰着:
: 用某种通道蛋白的抗体(通过Western blot和immunohistochemistry) 来研究此蛋白在
: 一个组织中的表达情况.在大批量的实验前,先做了个预实验测试了下此抗体的特异性.
: 很奇怪的是,Western blot和immunohistochemistry 都显示在此蛋白完全敲除的动物组
: 织中还是有弱的阳性表达(和wild-type相比是很弱,但还是能看到非常弱的条带或者染
: 色).
: 难道是一抗或者二抗的浓度过大?还是封闭的不够?
: 注: 1. 此抗体已经有几篇发表的文章显示是特异性的
: 2. 基因敲除的动物应该没有问题
: 3. 弱的阳性表达应该不是来自自发荧光或者artifact
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