c*u
2 楼
我是直接在webofsicence上search 然后打印第一页 . 有什么好的idea?
谢谢.
谢谢.
M*c
3 楼
【 以下文字转载自 LeisureTime 讨论区 】
发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
标 题: 《Black Mass》
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
看了《Black Mass》,描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演,Johnny Depp饰演狡猾
又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger,利用小时玩伴,现在的FBI探员来扩展自己的势
力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落,风格写实。推荐。
发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
标 题: 《Black Mass》
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
看了《Black Mass》,描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演,Johnny Depp饰演狡猾
又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger,利用小时玩伴,现在的FBI探员来扩展自己的势
力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落,风格写实。推荐。
v*a
4 楼
用PCR检测都是有的,但如果设计primer针对全长的蛋白就大多sample都无法克隆出。
大家遇到过类似的事吗?该如何解决呢?谢谢!
大家遇到过类似的事吗?该如何解决呢?谢谢!
l*5
6 楼
看看俺老大的超长贴子, 里面有如何处理CITATION
D*r
7 楼
都上映了啊
我认识一个人在里面客串一个小角色,我去看看有没有他
我认识一个人在里面客串一个小角色,我去看看有没有他
b*o
8 楼
能不能把如何克隆的说的清楚些,这样的描述很难给你提供帮助呀。
B*r
9 楼
at most 400$ or so.
(i actually don't have a budget...)
are those more expensive 400$ really better?
(i actually don't have a budget...)
are those more expensive 400$ really better?
x*o
10 楼
很好看
I*a
11 楼
没看懂,
请把问题讲清楚一点,自己明白问题,别人不明白是没用的。
请把问题讲清楚一点,自己明白问题,别人不明白是没用的。
M*c
13 楼
【 以下文字转载自 LeisureTime 讨论区 】
发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
标 题: 《Black Mass》
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
看了《Black Mass》,描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演,Johnny Depp饰演狡猾
又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger,利用小时玩伴,现在的FBI探员来扩展自己的势
力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落,风格写实。推荐。
发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
标 题: 《Black Mass》
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
看了《Black Mass》,描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演,Johnny Depp饰演狡猾
又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger,利用小时玩伴,现在的FBI探员来扩展自己的势
力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落,风格写实。推荐。
v*a
14 楼
抱歉没有讲清楚。情况是这样的:拿不同cDNA sample做模板,PCR一个gene(非全长)
,大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带(经过测序验证)。然后想用PCR的
方法得到全长的该gene,设计flank该gene两端的引物后,却几乎得不到任何条带。做
到现在,试了自己的sample,也拿别人做的cDNA试(大约20多个来源不同的cDNA
sample),只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
,所以还需要尝试更多,但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
【在 b*****o 的大作中提到】
: 能不能把如何克隆的说的清楚些,这样的描述很难给你提供帮助呀。
,大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带(经过测序验证)。然后想用PCR的
方法得到全长的该gene,设计flank该gene两端的引物后,却几乎得不到任何条带。做
到现在,试了自己的sample,也拿别人做的cDNA试(大约20多个来源不同的cDNA
sample),只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
,所以还需要尝试更多,但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
【在 b*****o 的大作中提到】
: 能不能把如何克隆的说的清楚些,这样的描述很难给你提供帮助呀。
B*r
15 楼
Brooksbrothers factory store里的东西availability 是不是跟网上差不多?
D*r
16 楼
都上映了啊
我认识一个人在里面客串一个小角色,我去看看有没有他
我认识一个人在里面客串一个小角色,我去看看有没有他
x*o
19 楼
很好看
b*n
20 楼
先连到T-easy或者Topo等克隆载体上面再做亚克隆吧
你想克隆的片段多大?
【在 v***a 的大作中提到】
: 抱歉没有讲清楚。情况是这样的:拿不同cDNA sample做模板,PCR一个gene(非全长)
: ,大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带(经过测序验证)。然后想用PCR的
: 方法得到全长的该gene,设计flank该gene两端的引物后,却几乎得不到任何条带。做
: 到现在,试了自己的sample,也拿别人做的cDNA试(大约20多个来源不同的cDNA
: sample),只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
: ,所以还需要尝试更多,但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
你想克隆的片段多大?
【在 v***a 的大作中提到】
: 抱歉没有讲清楚。情况是这样的:拿不同cDNA sample做模板,PCR一个gene(非全长)
: ,大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带(经过测序验证)。然后想用PCR的
: 方法得到全长的该gene,设计flank该gene两端的引物后,却几乎得不到任何条带。做
: 到现在,试了自己的sample,也拿别人做的cDNA试(大约20多个来源不同的cDNA
: sample),只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
: ,所以还需要尝试更多,但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
T*s
22 楼
五十度灰女蹿红太快了
【在 M********c 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 LeisureTime 讨论区 】
: 发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
: 标 题: 《Black Mass》
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
: 看了《Black Mass》,描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
: Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演,Johnny Depp饰演狡猾
: 又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger,利用小时玩伴,现在的FBI探员来扩展自己的势
: 力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落,风格写实。推荐。
【在 M********c 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 LeisureTime 讨论区 】
: 发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
: 标 题: 《Black Mass》
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
: 看了《Black Mass》,描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
: Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演,Johnny Depp饰演狡猾
: 又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger,利用小时玩伴,现在的FBI探员来扩展自己的势
: 力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落,风格写实。推荐。
k*0
23 楼
有没有GC rich的片段?如果GC含量局部很高,PCR时就可能出现问题。
l*e
24 楼
200, 300 的就差不多了
m*s
25 楼
第二张海报是另一个电影,Sicario
b*o
28 楼
1.2kb PCR 应该很容易扩增和克隆的。
不能扩出的原因:
引物设计有问题;amplicon GC含量过高;cDNA来源的组织没有或很低的表达, Go to
UCSC genome browser to check your gene's expression in different tissues,
also you can check your gene's isoforms.
克隆不出来的原因:
要扩增片段的一侧可能有你用来做克隆的酶切位点,建议比较没有切的回收片段和酶切
之后的片段;
建议你连到T载体上,然后测序。
不能扩出的原因:
引物设计有问题;amplicon GC含量过高;cDNA来源的组织没有或很低的表达, Go to
UCSC genome browser to check your gene's expression in different tissues,
also you can check your gene's isoforms.
克隆不出来的原因:
要扩增片段的一侧可能有你用来做克隆的酶切位点,建议比较没有切的回收片段和酶切
之后的片段;
建议你连到T载体上,然后测序。
v*a
30 楼
多谢多谢!
【在 b*****o 的大作中提到】
: 1.2kb PCR 应该很容易扩增和克隆的。
: 不能扩出的原因:
: 引物设计有问题;amplicon GC含量过高;cDNA来源的组织没有或很低的表达, Go to
: UCSC genome browser to check your gene's expression in different tissues,
: also you can check your gene's isoforms.
: 克隆不出来的原因:
: 要扩增片段的一侧可能有你用来做克隆的酶切位点,建议比较没有切的回收片段和酶切
: 之后的片段;
: 建议你连到T载体上,然后测序。
【在 b*****o 的大作中提到】
: 1.2kb PCR 应该很容易扩增和克隆的。
: 不能扩出的原因:
: 引物设计有问题;amplicon GC含量过高;cDNA来源的组织没有或很低的表达, Go to
: UCSC genome browser to check your gene's expression in different tissues,
: also you can check your gene's isoforms.
: 克隆不出来的原因:
: 要扩增片段的一侧可能有你用来做克隆的酶切位点,建议比较没有切的回收片段和酶切
: 之后的片段;
: 建议你连到T载体上,然后测序。
h*r
32 楼
不行就合成一个吧,那怕合成没P出来的那段也行。
r*y
34 楼
TA cloning测序看看吧 还没有遇到过片断被cleave的问题
【在 v***a 的大作中提到】
: 抱歉没有讲清楚。情况是这样的:拿不同cDNA sample做模板,PCR一个gene(非全长)
: ,大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带(经过测序验证)。然后想用PCR的
: 方法得到全长的该gene,设计flank该gene两端的引物后,却几乎得不到任何条带。做
: 到现在,试了自己的sample,也拿别人做的cDNA试(大约20多个来源不同的cDNA
: sample),只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
: ,所以还需要尝试更多,但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
【在 v***a 的大作中提到】
: 抱歉没有讲清楚。情况是这样的:拿不同cDNA sample做模板,PCR一个gene(非全长)
: ,大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带(经过测序验证)。然后想用PCR的
: 方法得到全长的该gene,设计flank该gene两端的引物后,却几乎得不到任何条带。做
: 到现在,试了自己的sample,也拿别人做的cDNA试(大约20多个来源不同的cDNA
: sample),只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
: ,所以还需要尝试更多,但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
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