y*n
2 楼
梅尔吉布森这部二战片基于真实人物改编，冲绳岛战役中不带任何武器的军医赤手空拳
救下75人
剧情相当戏剧化
蜘蛛侠Andrew Garfield担纲主演
救下75人
剧情相当戏剧化
蜘蛛侠Andrew Garfield担纲主演
w*2
3 楼
one developer encounters 3,997 devices
这里有没有暗猪的开发人员？
这种情况一般怎么办的？程序能多灵活适应？还是就瞄着一两种popular的设计来？
这里有没有暗猪的开发人员？
这种情况一般怎么办的？程序能多灵活适应？还是就瞄着一两种popular的设计来？
h*9
4 楼
一个准备用来做knock-in老鼠的targeting vector（14kb),用invitrogen的kit做了
maxi-prep,然后用NotI linearize,我确定NotI是单一酶切位点,可是为什么出来这么多
大大小小的片断（4kb,2.5kb,1.5kb,100bp)？
maxi-prep,然后用NotI linearize,我确定NotI是单一酶切位点,可是为什么出来这么多
大大小小的片断（4kb,2.5kb,1.5kb,100bp)？
Z*e
5 楼
postdoc还是工业界的？
这个每年都在变，而要根据当地的行情
就跟给二手车定价一样
看去年招的化学phd，跟你mileage差不多，品牌差不多的人，算一个平均工资，可
能还做点加权什么的，就是prevailing wage。这个由dol说了算
【在 k****k 的大作中提到】
: 请问加州化学PhD申请H1B的收入底线是多少？拜谢！
这个每年都在变，而要根据当地的行情
就跟给二手车定价一样
看去年招的化学phd，跟你mileage差不多，品牌差不多的人，算一个平均工资，可
能还做点加权什么的，就是prevailing wage。这个由dol说了算
【在 k****k 的大作中提到】
: 请问加州化学PhD申请H1B的收入底线是多少？拜谢！
g*n
6 楼
不错，比科幻烂片好看多了
a*y
7 楼
安猪程序是比较灵活
不过貌似也应为设备不兼容经常有问题。
【在 w********2 的大作中提到】
: one developer encounters 3,997 devices
: 这里有没有暗猪的开发人员？
: 这种情况一般怎么办的？程序能多灵活适应？还是就瞄着一两种popular的设计来？
不过貌似也应为设备不兼容经常有问题。
【在 w********2 的大作中提到】
: one developer encounters 3,997 devices
: 这里有没有暗猪的开发人员？
: 这种情况一般怎么办的？程序能多灵活适应？还是就瞄着一两种popular的设计来？
m*5
8 楼
Ki质粒星切很常见
问题不大，可以用
问题不大，可以用
k*k
9 楼
工业界的，有小公司给不到6万。是不是不行啊？
a*m
10 楼
我不是开发人员，但是通常来说，硬件平台和软件/应用程序之间还有一层东西（固件/
驱动）用来支持。
简单例子，我想大多数windows程序是不用一定要针对Dell，IBM，HP，ASUS，sony分别
设计的。。。
【在 w********2 的大作中提到】
: one developer encounters 3,997 devices
: 这里有没有暗猪的开发人员？
: 这种情况一般怎么办的？程序能多灵活适应？还是就瞄着一两种popular的设计来？
h*9
11 楼
是什么原因呢？genomic DNA 污染？就觉得看到这么多小片断，往下做，心里不踏实。
core facility的人让我把我要的band从gel里切出来，纯化一下，再做
electroporation.
【在 m******5 的大作中提到】
: Ki质粒星切很常见
: 问题不大，可以用
core facility的人让我把我要的band从gel里切出来，纯化一下，再做
electroporation.
【在 m******5 的大作中提到】
: Ki质粒星切很常见
: 问题不大，可以用
Z*e
12 楼
不清楚，可能还要看bonus什么的
这个网站可以有助于你评估
http://myvisajobs.com/
好象还是一个版上的虫虫开的
【在 k****k 的大作中提到】
: 工业界的，有小公司给不到6万。是不是不行啊？
这个网站可以有助于你评估
http://myvisajobs.com/
好象还是一个版上的虫虫开的
【在 k****k 的大作中提到】
: 工业界的，有小公司给不到6万。是不是不行啊？
w*2
13 楼
windows 程序好像有个所谓最低配置要求的说法。
什么OS，什么ram，什么硬盘，什么分辨率等等。
我对android 开发不了解，我个人觉得屏幕能灵活大小有好的地方，但设计上可能会难
达到一个最优化的设计。
件/
【在 a*m 的大作中提到】
:
: 我不是开发人员，但是通常来说，硬件平台和软件/应用程序之间还有一层东西（固件/
: 驱动）用来支持。
: 简单例子，我想大多数windows程序是不用一定要针对Dell，IBM，HP，ASUS，sony分别
: 设计的。。。
什么OS，什么ram，什么硬盘，什么分辨率等等。
我对android 开发不了解，我个人觉得屏幕能灵活大小有好的地方，但设计上可能会难
达到一个最优化的设计。
件/
【在 a*m 的大作中提到】
:
: 我不是开发人员，但是通常来说，硬件平台和软件/应用程序之间还有一层东西（固件/
: 驱动）用来支持。
: 简单例子，我想大多数windows程序是不用一定要针对Dell，IBM，HP，ASUS，sony分别
: 设计的。。。
N2
14 楼
太多的dna了
试试点单位0.5-1ug/per reaction
【在 h***9 的大作中提到】
: 是什么原因呢？genomic DNA 污染？就觉得看到这么多小片断，往下做，心里不踏实。
: core facility的人让我把我要的band从gel里切出来，纯化一下，再做
: electroporation.
试试点单位0.5-1ug/per reaction
【在 h***9 的大作中提到】
: 是什么原因呢？genomic DNA 污染？就觉得看到这么多小片断，往下做，心里不踏实。
: core facility的人让我把我要的band从gel里切出来，纯化一下，再做
: electroporation.
d*h
15 楼
85K
s*s
16 楼
体系放大点，用NotI-HF切看看？
【在 h***9 的大作中提到】
: 一个准备用来做knock-in老鼠的targeting vector（14kb),用invitrogen的kit做了
: maxi-prep,然后用NotI linearize,我确定NotI是单一酶切位点,可是为什么出来这么多
: 大大小小的片断（4kb,2.5kb,1.5kb,100bp)？
【在 h***9 的大作中提到】
: 一个准备用来做knock-in老鼠的targeting vector（14kb),用invitrogen的kit做了
: maxi-prep,然后用NotI linearize,我确定NotI是单一酶切位点,可是为什么出来这么多
: 大大小小的片断（4kb,2.5kb,1.5kb,100bp)？
m*5
17 楼
band切完再胶回收后electroporation效率会降低很多
【在 h***9 的大作中提到】
: 是什么原因呢？genomic DNA 污染？就觉得看到这么多小片断，往下做，心里不踏实。
: core facility的人让我把我要的band从gel里切出来，纯化一下，再做
: electroporation.
【在 h***9 的大作中提到】
: 是什么原因呢？genomic DNA 污染？就觉得看到这么多小片断，往下做，心里不踏实。
: core facility的人让我把我要的band从gel里切出来，纯化一下，再做
: electroporation.
n*8
18 楼
you need uncut DNA as control
h*9
19 楼
先谢谢大家的答复。
报告一下进展。我后来用Not1-HF切了，杂带还是在。未切的质粒里也有同样的杂带，
证明不是酶切的问题。试了老早以前做的另一个maxi prep的质粒，同样用Not1-HF切，
那个却很干净，没有杂带。
另外，差不多同时做的mini prep的这个出问题的maxi prep质粒，也出现同样的杂带。证明不是maxi prep kit的问题。
我现在怀疑是competent cell的问题了，因为老早以前用的是公司买的，最近用的是同事做
的。准备弄点公司买来的cell,重做maxi prep.
【在 h***9 的大作中提到】
: 一个准备用来做knock-in老鼠的targeting vector（14kb),用invitrogen的kit做了
: maxi-prep,然后用NotI linearize,我确定NotI是单一酶切位点,可是为什么出来这么多
: 大大小小的片断（4kb,2.5kb,1.5kb,100bp)？
报告一下进展。我后来用Not1-HF切了，杂带还是在。未切的质粒里也有同样的杂带，
证明不是酶切的问题。试了老早以前做的另一个maxi prep的质粒，同样用Not1-HF切，
那个却很干净，没有杂带。
另外，差不多同时做的mini prep的这个出问题的maxi prep质粒，也出现同样的杂带。证明不是maxi prep kit的问题。
我现在怀疑是competent cell的问题了，因为老早以前用的是公司买的，最近用的是同事做
的。准备弄点公司买来的cell,重做maxi prep.
【在 h***9 的大作中提到】
: 一个准备用来做knock-in老鼠的targeting vector（14kb),用invitrogen的kit做了
: maxi-prep,然后用NotI linearize,我确定NotI是单一酶切位点,可是为什么出来这么多
: 大大小小的片断（4kb,2.5kb,1.5kb,100bp)？
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