overlap PCR中间重叠区域长度请教# Biology - 生物学
j*n
1 楼
一直都用viewpoint的，最近丫偷偷摸摸把利率降到了3%，就觉得不太划算了。麻烦各
位大牛们推荐一个利率高点，信誉靠谱的rewards checking吧，谢了！
位大牛们推荐一个利率高点，信誉靠谱的rewards checking吧，谢了！
m*y
2 楼
在我是歌手里，活生生变成唱跳型，现场HI/带动气氛型歌手，往当年超女何洁
的路子上走了。
大部分伤情的，感怀的，慢歌都效果不好。
的路子上走了。
大部分伤情的，感怀的，慢歌都效果不好。
r*t
3 楼
【 以下文字转载自 Dreamer 讨论区 】
发信人: Dreamer (不要问我从哪里来), 信区: Dreamer
标 题: 我的幸福婚姻将要埋葬于网络时代
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 1 15:21:51 2011, 美东)
这个帖子不属于 婆媳不和贴，地域贴，凤凰男孔雀女贴，千年薄厚贴，海龟小三贴，
搬运贴，中年危机贴。。。的任何一种，只是我对我那将要溃崩瓦解的婚姻有感而发。
在外人看来，我不应该抱怨什莫，夫妻俩人都有体面的工作，收入不算很高但是比上不
足比下有余，家里儿女双全，一房两车，双方父母都建在且健康。但是只有我知道，我
的婚姻已经濒临死亡。原因就是老公沉迷于电脑/网络，而对家里所有人视而不见，不
管是孩子，我，还是父母和他说话，高兴的时候眼睛不离屏幕的回答一声，不高兴的时
候就装作没听见。从早上起床到晚上睡觉，手里不拿着手机/笔记本，眼睛不看着屏幕
的时候，大概就只有开车和洗手的时候了。早上醒来要先在被窝里摆弄一会它的手机，
等到不得不起的时候爬起来，带着手机去厕所，没有半个一个小时坚决不出来，一天在
厕所里至少能呆两三个小时，去商店买东西，手机不离手，吃饭抱着电脑吃，他胃不好
，有时饭前要吃胃药，以前他都会提前半个小时吃药，现在他就故意等到我们要吃饭了
才去吃胃药，然后就能不和我们一起吃，然后我们刚起身他就一个人抱着电脑吃，让他
带儿子出去运动，从来都是把儿子往哪一扔，他就掏手机，有两次忘带手机了，没5分
钟就回来了。在家里有条件的时候，他就会一电脑一手机外加一副耳机全副武装。就连
爱爱都是，完事后马上抱回他的电脑一声不吭了。原来两个人睡一个房间，我本来就是
夜猫，都要11-12点才睡，但他还是抱怨他不困，睡不着躺在床上很难受，一定要看一
会电脑才能睡着，说了他两次，就搬到另一个房间去了，除了爱爱，别的时候从来不进
我的房间。我真的很生气，我又不是特殊职业者，怎莫这样子对我？求欢的时候，对我
百般讨好，裤子还没提好，马上变了一个人，不认识我的样子。
本来他原来也很重视儿子的，现在说起来就是，我们要培养孩子的独立性，中国的父母
华在孩子身上的时间太多，都没有自己的生活了，美国人从来都不管孩子，孩子长得都
提好的。克林顿也不是父母推出来的，奥巴马格没有父母管，拜托，培养独立性并不等
同于不教育孩子好不好？美国家长也不是都不管孩子啊。
我知道网络时代给人们带来了很多便利，我也知道现在很多人沉迷于网络而丢掉了自己
的生活，我只是没想到我中了这麽个大奖，而且是发生在结婚多年孩子双双的时候。真
的希望能回到学生时代，我们白天一起上课，晚上一起去上自习，周末一起去爬山的纯
真年代，那种上网还要去网吧的时候！
从提建议，到提意见，到吵架，就差没把他的命根子电脑和手机一起砸了，我不是泼妇
，我做不出来。我倦了累了，我什莫也不想说了，我白天继续上班，回家继续待娃。我
的婚姻银行里存款已经透支，耐心，爱心，关怀，感恩，消失殆尽，剩下的只有冷淡和
默然（对不起，不是仇恨，爱没了，何谈恨）。
我不知道我的婚姻会走向何方，我懒得去想，一切顺其自然吧。
发信人: Dreamer (不要问我从哪里来), 信区: Dreamer
标 题: 我的幸福婚姻将要埋葬于网络时代
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 1 15:21:51 2011, 美东)
这个帖子不属于 婆媳不和贴，地域贴，凤凰男孔雀女贴，千年薄厚贴，海龟小三贴，
搬运贴，中年危机贴。。。的任何一种，只是我对我那将要溃崩瓦解的婚姻有感而发。
在外人看来，我不应该抱怨什莫，夫妻俩人都有体面的工作，收入不算很高但是比上不
足比下有余，家里儿女双全，一房两车，双方父母都建在且健康。但是只有我知道，我
的婚姻已经濒临死亡。原因就是老公沉迷于电脑/网络，而对家里所有人视而不见，不
管是孩子，我，还是父母和他说话，高兴的时候眼睛不离屏幕的回答一声，不高兴的时
候就装作没听见。从早上起床到晚上睡觉，手里不拿着手机/笔记本，眼睛不看着屏幕
的时候，大概就只有开车和洗手的时候了。早上醒来要先在被窝里摆弄一会它的手机，
等到不得不起的时候爬起来，带着手机去厕所，没有半个一个小时坚决不出来，一天在
厕所里至少能呆两三个小时，去商店买东西，手机不离手，吃饭抱着电脑吃，他胃不好
，有时饭前要吃胃药，以前他都会提前半个小时吃药，现在他就故意等到我们要吃饭了
才去吃胃药，然后就能不和我们一起吃，然后我们刚起身他就一个人抱着电脑吃，让他
带儿子出去运动，从来都是把儿子往哪一扔，他就掏手机，有两次忘带手机了，没5分
钟就回来了。在家里有条件的时候，他就会一电脑一手机外加一副耳机全副武装。就连
爱爱都是，完事后马上抱回他的电脑一声不吭了。原来两个人睡一个房间，我本来就是
夜猫，都要11-12点才睡，但他还是抱怨他不困，睡不着躺在床上很难受，一定要看一
会电脑才能睡着，说了他两次，就搬到另一个房间去了，除了爱爱，别的时候从来不进
我的房间。我真的很生气，我又不是特殊职业者，怎莫这样子对我？求欢的时候，对我
百般讨好，裤子还没提好，马上变了一个人，不认识我的样子。
本来他原来也很重视儿子的，现在说起来就是，我们要培养孩子的独立性，中国的父母
华在孩子身上的时间太多，都没有自己的生活了，美国人从来都不管孩子，孩子长得都
提好的。克林顿也不是父母推出来的，奥巴马格没有父母管，拜托，培养独立性并不等
同于不教育孩子好不好？美国家长也不是都不管孩子啊。
我知道网络时代给人们带来了很多便利，我也知道现在很多人沉迷于网络而丢掉了自己
的生活，我只是没想到我中了这麽个大奖，而且是发生在结婚多年孩子双双的时候。真
的希望能回到学生时代，我们白天一起上课，晚上一起去上自习，周末一起去爬山的纯
真年代，那种上网还要去网吧的时候！
从提建议，到提意见，到吵架，就差没把他的命根子电脑和手机一起砸了，我不是泼妇
，我做不出来。我倦了累了，我什莫也不想说了，我白天继续上班，回家继续待娃。我
的婚姻银行里存款已经透支，耐心，爱心，关怀，感恩，消失殆尽，剩下的只有冷淡和
默然（对不起，不是仇恨，爱没了，何谈恨）。
我不知道我的婚姻会走向何方，我懒得去想，一切顺其自然吧。
s*s
4 楼
overlap PCR中间重叠区域长度请教
两个各3kb的片段
中间重叠21 bp的话
overlap PCR够了不够？
thanks!
两个各3kb的片段
中间重叠21 bp的话
overlap PCR够了不够？
thanks!
l*k
5 楼
别折腾了，我本来用integrity，降了我又跳viewpoint，结果他家也降了。大趋势就是
都要降，迟早的事情，哪家都一样。
【在 j****n 的大作中提到】
: 一直都用viewpoint的，最近丫偷偷摸摸把利率降到了3%，就觉得不太划算了。麻烦各
: 位大牛们推荐一个利率高点，信誉靠谱的rewards checking吧，谢了！
都要降，迟早的事情，哪家都一样。
【在 j****n 的大作中提到】
: 一直都用viewpoint的，最近丫偷偷摸摸把利率降到了3%，就觉得不太划算了。麻烦各
: 位大牛们推荐一个利率高点，信誉靠谱的rewards checking吧，谢了！
n*y
6 楼
田纪赛马
d*r
7 楼
这个男人，老婆一定是到手得很容易。
m*5
8 楼
50bp成功的
据说更短也可以
据说更短也可以
l*t
9 楼
可惜不在texas啊
w*y
10 楼
马上演唱会了，练练hi歌
【在 m******y 的大作中提到】
: 在我是歌手里，活生生变成唱跳型，现场HI/带动气氛型歌手，往当年超女何洁
: 的路子上走了。
: 大部分伤情的，感怀的，慢歌都效果不好。
【在 m******y 的大作中提到】
: 在我是歌手里，活生生变成唱跳型，现场HI/带动气氛型歌手，往当年超女何洁
: 的路子上走了。
: 大部分伤情的，感怀的，慢歌都效果不好。
c*a
11 楼
去看看醫生吧，影響到婚姻了，該戒了
m*y
12 楼
20bp就够了
g*f
13 楼
texas怎么好?
【在 l******t 的大作中提到】
: 可惜不在texas啊
【在 l******t 的大作中提到】
: 可惜不在texas啊
r*k
14 楼
关键是她唱安静的歌不如别人，所以只好另辟蹊径了。
V*B
15 楼
即便不容易
时间久了，也就忘了艰难了
【在 d**********r 的大作中提到】
: 这个男人，老婆一定是到手得很容易。
时间久了，也就忘了艰难了
【在 d**********r 的大作中提到】
: 这个男人，老婆一定是到手得很容易。
l*1
16 楼
the better is between 30-40 bp
if your A 3kp+12 bp(I) and B 3kp+12(II) bp might can not be read on the one side
by ABI auto sequencing,
if lost just this I +II 那就杯具喽
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
if your A 3kp+12 bp(I) and B 3kp+12(II) bp might can not be read on the one side
by ABI auto sequencing,
if lost just this I +II 那就杯具喽
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
f*i
17 楼
This depends on regions. Austin area sucks, just up to 3.15%.
【在 l******t 的大作中提到】
: 可惜不在texas啊
【在 l******t 的大作中提到】
: 可惜不在texas啊
m*y
18 楼
again
m*6
19 楼
应该带你老公去看看心理医生，这么大年纪的男人沉迷网络不应该
s*s
20 楼
你看懂我的问题了吗？
side
【在 l**********1 的大作中提到】
: the better is between 30-40 bp
: if your A 3kp+12 bp(I) and B 3kp+12(II) bp might can not be read on the one side
: by ABI auto sequencing,
: if lost just this I +II 那就杯具喽
side
【在 l**********1 的大作中提到】
: the better is between 30-40 bp
: if your A 3kp+12 bp(I) and B 3kp+12(II) bp might can not be read on the one side
: by ABI auto sequencing,
: if lost just this I +II 那就杯具喽
s*r
21 楼
ccu?
m*6
22 楼
应该带你老公去看看心理医生，这么大年纪的男人沉迷网络不应该
l*1
23 楼
是吗?
下一步不做啦
ensure efficient recombination in host cell
需要的吧?
please refer:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC155262/
Forty-base-pair overlaps are adequate to ensure efficient recombination in yeast (Hua et al. 1997;
Oldenberg et al. 1997). Hence, we considered it likely that 80-bp recombination linkers, with 40 bp of
vector overlap and 40 bp of fragment overlap, would be adequate to stimulate efficient fragment subcloning
【在 s*******s 的大作中提到】
: 你看懂我的问题了吗？
:
: side
下一步不做啦
ensure efficient recombination in host cell
需要的吧?
please refer:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC155262/
Forty-base-pair overlaps are adequate to ensure efficient recombination in yeast (Hua et al. 1997;
Oldenberg et al. 1997). Hence, we considered it likely that 80-bp recombination linkers, with 40 bp of
vector overlap and 40 bp of fragment overlap, would be adequate to stimulate efficient fragment subcloning
【在 s*******s 的大作中提到】
: 你看懂我的问题了吗？
:
: side
s*m
24 楼
reward checking利息一直在降，且有上限，还要折腾，不如存cd了
g*y
25 楼
足够了。
我做三个片段连接，
size 500－800bp,
每两个overlap 13bp,
也做成了。
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
我做三个片段连接，
size 500－800bp,
每两个overlap 13bp,
也做成了。
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
l*1
26 楼
LD
ABI read 3kp is harder than 0.9kp
especially at its side? the opposite side of sequencing PCR primer
position.
【在 g***y 的大作中提到】
: 足够了。
: 我做三个片段连接，
: size 500－800bp,
: 每两个overlap 13bp,
: 也做成了。
ABI read 3kp is harder than 0.9kp
especially at its side? the opposite side of sequencing PCR primer
position.
【在 g***y 的大作中提到】
: 足够了。
: 我做三个片段连接，
: size 500－800bp,
: 每两个overlap 13bp,
: 也做成了。
x*2
27 楼
足够了
放心大胆的做吧
放心大胆的做吧
s*s
28 楼
有点错乱了～
【在 l**********1 的大作中提到】
: LD
: ABI read 3kp is harder than 0.9kp
: especially at its side? the opposite side of sequencing PCR primer
: position.
【在 l**********1 的大作中提到】
: LD
: ABI read 3kp is harder than 0.9kp
: especially at its side? the opposite side of sequencing PCR primer
: position.
w*n
29 楼
具体情况不一样，试一下才知道，overlap区最好不要有错配。
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
C*Y
30 楼
I did some with 18-bp overlap, and most of them worked.
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
z*6
31 楼
用过最多15、6bp成功过...
l*1
32 楼
EN if 15bp=5 amino acid residues that is the conservative amino acid
sequence between different species (i.e.
general fruit fly and house fly and Mediterranean fruit fly
then Overlap PCR 6kp next expression protein is which fly's protein?
【在 z*******6 的大作中提到】
: 用过最多15、6bp成功过...
sequence between different species (i.e.
general fruit fly and house fly and Mediterranean fruit fly
then Overlap PCR 6kp next expression protein is which fly's protein?
【在 z*******6 的大作中提到】
: 用过最多15、6bp成功过...
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