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问大伙儿一个CO-IP的问题

问大伙儿一个CO-IP的问题# Biology - 生物学

t*e2012-03-09 08:03

1 楼

最近再给孩子找family care，
楼下正好有一家新开的，去看了看，里面孩子看上去还挺开心的，老师看上去还挺能干的
但是有个问题，现在已经有3个孩子了，据说还有一个要来
如果加上我们的，就有5个孩子了，这5个孩子都在1岁左右，
正负2个月差。里面常驻的就一个老师，另外一个据说只有下午来
，而且还有个她自己的刚刚出生的小
baby，我觉得师生比是太低了，但是刚刚开始找，没有看过别的地方，请问，一般来说
，family care，对于2岁以下组
别，师生比在多少？
多谢了。

e*32012-03-09 08:03

2 楼

最近因为痴迷小李子，所以就把他所演绎的电影又都看了一遍，其中有一部电影叫做《
了不起的盖茨比》，以前没有看过，现在看完之后，内心总是觉得难以平静下来。明明
是那么一个纯善的人，可为什么最后的结局居然是被别人杀死，而且还要被那些记者胡
乱报道成偷情畏罪自杀。
其实，一开始我可能也觉得盖茨比隐瞒自己的身世有些不太好，但是他又刻意做了些什
么吗？他确实是很有钱，虽然不是出身再富贵家庭，他确实是上了战场立了战功，也在
牛津读了书，虽然最后并没有毕业。他的内心并没有想要刻意去隐瞒些什么，只不过是
借助一些人们所看到的一些，然后不做解释罢了。最重要的是，他做一切的唯一私心只
不过是希望能够得到自己心爱的女人，能够让她过上衣食无忧的生活罢了。
电影的最后，盖茨比都是一直在为黛西考虑的，甚至为了等一通他自己都不怎么确定的
电话而选择待在家里。他内心一直渴望着黛西能够跟他一起离开，然而现实却是让人无
奈的。世人的冷漠与自私比想象中的要严重。
不过幸好，盖茨比还有一个朋友，这个朋友的一通电话让他在死亡的那一刻还以为自己
真的等到了黛西的电话，所以在死亡的时候，他依旧是乐观的，没有那么难过。

z*82012-03-09 08:03

3 楼

金星，天生的就是要当名角的。他／她也成为了名角。不论是作为男人，还是作为女人。
先抑后扬，说一下他／她
１。　他／她不是典型意义上的　中国人。不具代表性。她的涵养，还是不够。说得有
点多。主要还是为了钱。哪天她不太说了，那么就真的修炼得差不多了。她要做旧上海
的老克拉，但是她现在还不是。其实，上海老克拉，那已经是　过时货，何必再　羡慕
呢？　要学就学　欧洲绅士，如果你愿意　装逼的话，或者　干脆就还是做自己，　做
ｗｓｎ。
２。　她的舞蹈功力，确实不凡，而且据说把现代舞带入中国，而且还时时把握现代舞
的脉搏。但是，她真的已经是　真正意义上的　大师了吗？成精　了吗？公认了吗？
我觉得还没有。后辈们，完全可以挑战她的权威，世界是你们的，不是她这个年近５０
的。没有必要被她吓倒。舞蹈的修养和想像同样重要。
３。　她的观点，叽里呱啦，也就是一家之言，不用奉若神明。更不要太当真。我也可
以说，你也一定说得不比她差。
４。　如果谁要拿的性别转换　说事，我只能说，你好ｌｏｗ啊，需要爬上井盖，这个
世界很大，比你的偏见大得多得多。
总结一下，　金女士，是一位　勇士，但是　还似乎不是一位　大师。也许再过１０年
，或者２０年。

c*r2012-03-09 08:03

4 楼

用的是Bethyl的抗体，做co-IP,研究的蛋白A主要bind到chromatin上。
用bethyl的方法做的cell lysis, 然后co-IP，work。但是我发现，他们的lysis
buffer太mild，A蛋白主要还是留着pellet中。所以IP下来的只是一小部分，可能是
在cytoplasmic里的A蛋白
于是同时用nuclear extract来做co-IP，input里有很多A蛋白，但是co-IP不work，A蛋白没有pull down下来
所以问题是，为啥同一个antibody，可以pull down cyto fraction里的蛋白A,而不可以pull down nuclear内的蛋白A？
我的解释是，在nuclear extract里，A跟很多蛋白结合，于是antigen被mask了。。。
不知道还有没有别的解释
谢谢各位了

R*i2012-03-09 08:03

5 楼

1:4-1:5在daycare center都是可以的。Family care只有一个老师对5个baby的，我不
会放心。多看几家比较一下没坏处。同时你可以查看你所在的州和郡对childcare的相
应规定和评级。Good luck！

h*02012-03-09 08:03

6 楼

你对人太苛刻，金女士的单纯和直率是最难得的，她对舞蹈的热爱和对中国舞蹈的
贡献不亚于钱学森对航天的贡献。你要是坐在她的位置上，十有八九你不如她，
大师不重要，往往是被封的，关键是如何做人，做自己比做大师难多了。

人。

【在 z**********8 的大作中提到】

: 金星，天生的就是要当名角的。他／她也成为了名角。不论是作为男人，还是作为女人。
: 先抑后扬，说一下他／她
: １。　他／她不是典型意义上的　中国人。不具代表性。她的涵养，还是不够。说得有
: 点多。主要还是为了钱。哪天她不太说了，那么就真的修炼得差不多了。她要做旧上海
: 的老克拉，但是她现在还不是。其实，上海老克拉，那已经是　过时货，何必再　羡慕
: 呢？　要学就学　欧洲绅士，如果你愿意　装逼的话，或者　干脆就还是做自己，　做
: ｗｓｎ。
: ２。　她的舞蹈功力，确实不凡，而且据说把现代舞带入中国，而且还时时把握现代舞
: 的脉搏。但是，她真的已经是　真正意义上的　大师了吗？成精　了吗？公认了吗？
: 我觉得还没有。后辈们，完全可以挑战她的权威，世界是你们的，不是她这个年近５０

w*y2012-03-09 08:03

7 楼

As you suggested, maybe because of co-factors. Or, the A protein is
trunkated when it is moving into the nucleus.

q*m2012-03-09 08:03

8 楼

不理解为什么有人要去选择family care，与其送别人家去带，不如请保姆来自己家带
。要么就送正规的幼儿园好了，我觉得daycare里可以接触更多的孩子和老师，生活也
被训练得更有规律了。

d*u2012-03-09 08:03

9 楼

我倒是同意中国男的应该多注意一下仪表
特别是在国外的
大陆男的跟日韩港台男的在这方面差异巨大

s*t2012-03-09 08:03

10 楼

盐浓度？nuclear extract怎么提取的

b*82012-03-09 08:03

11 楼

小宝宝去family care应该可以少生病吧。
我们这边的family care差不多都有１：６，不过宝宝要比LZ家的大些。应该看看你们洲里的规定，因为有些family care开始进去时宝宝不多，但如果允许的话，会不断扩招的。

z*82012-03-09 08:03

12 楼

金星的舞蹈，尤其是现代舞，得益于其中性的气质。他的技巧很好，足以傲视当时的舞
坛，这个是他的本钱。但是，作为亚洲人，他有先天的缺憾，力量。舞蹈中没有了力量
的表现，技巧再好，也是一种遗憾。很多舞蹈的表现力，是靠力量去表现的。欧美选手
，包括黑人选手，因为力量的充沛，力量的爆发程度高，一俊遮百丑。
金星，后来作为女性，来表演，这个问题就不突出了，甚至成为了优势。
亚洲男演员，先天的力量是无法弥补的。男变女，是一个好办法。玩笑了。

g*52012-03-09 08:03

13 楼

顺求细胞核提取protocol for Coip

【在 s*********t 的大作中提到】

: 盐浓度？nuclear extract怎么提取的

S*p2012-03-09 08:03

14 楼

还有一个她自己刚出生的宝宝。
就这点，不送这个family care.
刚生了娃的，就算铁人，你觉得能带5个1岁多的娃？而且有一个刚出生的娃，每两三个
小时吃喝拉睡，你觉得她有多少时间给其他孩子。

a*u2012-03-09 08:03

15 楼

一看这个人就便秘，极其别扭。

人。

【在 z**********8 的大作中提到】

l*12012-03-09 08:03

16 楼

please go to
//www.proteinguru.com/protocols/IP%20guide2.pdf
or
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/parasitology/u6/UF_2002_MM.pdf
more:
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch03.Cell%
20Fractionation.pdf

【在 g*********5 的大作中提到】

: 顺求细胞核提取protocol for Coip

t*e2012-03-09 08:03

17 楼

多谢了
我也觉得孩子有点多
而且有个老师还带着自己的新生儿。。。
不过就是因为就在楼下是邻居想图个方便。
还是pass吧

I*s2012-03-09 08:03

18 楼

昨天看了两场金星秀，挺好玩的，说得都在理，是个活得很透彻的人。有个疑问就是他
怎么过性生活呢？

c*r2012-03-09 08:03

19 楼

gw2012-03-09 08:03

20 楼

family daycare难道不是在某个老师家里吗?
这个family daycare为什么有三个学生两个老师?
有小baby的是那个常驻的还是下午来的?
如果是下午来的那个,个人觉得这个family daycare不错,
1岁左右小孩,5:1.5比例很好,
而且下午有人来帮忙,不至于常驻的老师过于疲劳

干的

【在 t*******e 的大作中提到】

: 最近再给孩子找family care，
: 楼下正好有一家新开的，去看了看，里面孩子看上去还挺开心的，老师看上去还挺能干的
: 但是有个问题，现在已经有3个孩子了，据说还有一个要来
: 如果加上我们的，就有5个孩子了，这5个孩子都在1岁左右，
: 正负2个月差。里面常驻的就一个老师，另外一个据说只有下午来
: ，而且还有个她自己的刚刚出生的小
: baby，我觉得师生比是太低了，但是刚刚开始找，没有看过别的地方，请问，一般来说
: ，family care，对于2岁以下组
: 别，师生比在多少？
: 多谢了。

z*82012-03-09 08:03

21 楼

如果说老实话，我就没有看到一出她的眩目的舞蹈作品。桃李杯的表演，或者叫考试，
确实牛。动作到位，不多不少。干净啊。中国舞蹈演员的特点。她的那些现代舞，真的
还没有看进去。DC这里的，纽约的那些现代舞, 更抓人。看来，我还要修炼，提高我的
修养和眼界。哈哈
她的那些脱口秀，经历过生活的人，都能说吧。我也能说，不会比他差。毫无压力。但
是，我不觉得自己活得很通透了。烦恼还是不断。

【在 a**********u 的大作中提到】

: 一看这个人就便秘，极其别扭。
:
: 人。

w*y2012-03-09 08:03

22 楼

As you suggested, maybe because of co-factors. Or, the A protein is
trunkated when it is moving into the nucleus.

t*e2012-03-09 08:03

23 楼

就是在这个老师家里
下午来帮忙的那个是她女儿，那个小baby是她外孙女
她们在我们这里有两套公寓一套自住一套开了个family care
那5个1岁小孩里面最大那个差不多18个月的小男孩是她的外孙
实际上就是母女两人开了个family care 母亲full time，女儿part time 自己有两个孩子再收4个。。。

【在 gw 的大作中提到】

: family daycare难道不是在某个老师家里吗?
: 这个family daycare为什么有三个学生两个老师?
: 有小baby的是那个常驻的还是下午来的?
: 如果是下午来的那个,个人觉得这个family daycare不错,
: 1岁左右小孩,5:1.5比例很好,
: 而且下午有人来帮忙,不至于常驻的老师过于疲劳
:
: 干的

n*y2012-03-09 08:03

24 楼

感觉文化水平还是低了点。
那个凤凰台的锵锵三人行之类的强多了吧。

s*t2012-03-09 08:03

25 楼

盐浓度？nuclear extract怎么提取的

s*y2012-03-09 08:03

26 楼

我们这里政府规定的familycare的比例是1：6，但是1岁以下的不能超过2个

o*e2012-03-09 08:03

27 楼

以前在上海看过他的一场现代舞会。前边三个是他团队的几个男的跳的，她跳了最后一
场。
结束后我和同去的同学长久无语。最后终于有个男生忍不住说道，前面三个他扭曲压抑
了，看得难受，最后金星出来的那个终于正常了，却又很快结束了。大家纷纷表示赞同。
我记得前面有一个场面是一个男舞者做上下求索的扭曲状，另一个男舞者从后边走上来
浇了一盆冷水在前边那个男舞者的头上。
真的很现代。

g*52012-03-09 08:03

28 楼

顺求细胞核提取protocol for Coip

【在 s*********t 的大作中提到】

: 盐浓度？nuclear extract怎么提取的

a*a2012-03-09 08:03

29 楼

金星现在老了还表演吗？
大家有哪个视频，给传看看。

同。

【在 o********e 的大作中提到】

: 以前在上海看过他的一场现代舞会。前边三个是他团队的几个男的跳的，她跳了最后一
: 场。
: 结束后我和同去的同学长久无语。最后终于有个男生忍不住说道，前面三个他扭曲压抑
: 了，看得难受，最后金星出来的那个终于正常了，却又很快结束了。大家纷纷表示赞同。
: 我记得前面有一个场面是一个男舞者做上下求索的扭曲状，另一个男舞者从后边走上来
: 浇了一盆冷水在前边那个男舞者的头上。
: 真的很现代。

l*12012-03-09 08:03

30 楼

: 顺求细胞核提取protocol for Coip

r*n2012-03-09 08:03

31 楼

不喜欢，我觉得他/她有些为了证明自己是女人故意把自己搞得很三八很大妈。要看市
井大妈，不如去看那个反串的上海舒老板。人李玉刚没变性，反串都能演出女人气质来
。金星还是不明白女人!=大妈。

c*r2012-03-09 08:03

32 楼

It's not truncated because it was detected in the input

【在 w******y 的大作中提到】

: As you suggested, maybe because of co-factors. Or, the A protein is
: trunkated when it is moving into the nucleus.

c*r2012-03-09 08:03

33 楼

salt concentration is the ~300mM
cells were treated with hypotonic buffer with Triton 100.nuclei is separated
by low speed centrifugation. NH4SO4 were added to a final concentration of
300mM to precipitate the chromatin; then centrifuge to separate nuclear
protein from chromatin, save the supernatant.
add 1:1 3M NH4SO4 to precipitate the protein, and then dissolve protein
pellet with your IP buffer.

【在 s*********t 的大作中提到】

: 盐浓度？nuclear extract怎么提取的

c*r2012-03-09 08:03

34 楼

cells were treated with hypotonic buffer with Triton 100.nuclei is separated
by low speed centrifugation. NH4SO4 were added to a final concentration of
300mM to precipitate the chromatin; then centrifuge to separate nuclear
protein from chromatin, save the supernatant.
add 1:1 3M NH4SO4 to precipitate the protein, and then dissolve protein
pellet with your IP buffer.

【在 g*********5 的大作中提到】

: 顺求细胞核提取protocol for Coip

s*t2012-03-09 08:03

35 楼

为何最后一步要先用NH4SO4沉淀，再用IP buffer 溶解？这么剧烈的条件对于蛋白不好
吧？
直接透析到IP buffer甚至直接稀释，如何？

separated

【在 c********r 的大作中提到】

:
: cells were treated with hypotonic buffer with Triton 100.nuclei is separated
: by low speed centrifugation. NH4SO4 were added to a final concentration of
: 300mM to precipitate the chromatin; then centrifuge to separate nuclear
: protein from chromatin, save the supernatant.
: add 1:1 3M NH4SO4 to precipitate the protein, and then dissolve protein
: pellet with your IP buffer.

g*52012-03-09 08:03

36 楼

thanks for your help. can I just use some kits for the experiment?