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做过组织切片免疫荧光的请进

做过组织切片免疫荧光的请进# Biology - 生物学

I*a2012-03-19 07:03

1 楼

小鼠组织切片，想做免疫荧光，
那么组织用什么固定对后面的免疫荧光比较好。
谢谢

b*s2012-03-19 07:03

2 楼

现在通常用的固定基本只有PFA和glut两种。
前者是可逆交联，并且在组织内移动速度快。后者铰链度更大，并且不可逆，固定得更
好。但是移动速度更慢。而且对抗体保存不够好。现在一般采用混合固定，4%PFA加0.5
%的glut。
如果是大的组织，先初步固定之后，再slice成小块继续固定。
如果是免疫荧光，glut的浓度应当低于0.5%

【在 I***a 的大作中提到】

: 小鼠组织切片，想做免疫荧光，
: 那么组织用什么固定对后面的免疫荧光比较好。
: 谢谢

h*o2012-03-19 07:03

3 楼

加了glutaraldehyde以后再做免疫荧光什么的效果很差啊，很多抗体都用不了了。一般
的情况只要用PFA (4% paraformaldehyde)就差不多了。除非你对细胞结构要求很高，
要看胞内细胞器或者做电镜的，可以加一点glut。我以前试过加0.1% glut,再往上加抗
体就失效了

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【在 b******s 的大作中提到】

: 现在通常用的固定基本只有PFA和glut两种。
: 前者是可逆交联，并且在组织内移动速度快。后者铰链度更大，并且不可逆，固定得更
: 好。但是移动速度更慢。而且对抗体保存不够好。现在一般采用混合固定，4%PFA加0.5
: %的glut。
: 如果是大的组织，先初步固定之后，再slice成小块继续固定。
: 如果是免疫荧光，glut的浓度应当低于0.5%

I*a2012-03-19 07:03

4 楼

谢谢，
比如老鼠的的肾切一块下来，放到4%PFA加0.5%的glut，然后呢？是不是可以直接送给
别人做组织切片了，
组织切片是送人做的，自己做不了
另外，glut是什么？能给个全称吗？

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【在 b******s 的大作中提到】

b*s2012-03-19 07:03

5 楼

固定组织需要考虑组织大小，否则不能彻底固定。如果组织小于1mm，2hr PFA足够了。
否则需要4度过夜固定。或者先固定2小时，再切成小块固定。
上面有人说0.1%的glut都会影响抗体结合。你可以自己试试，如果是这样的情况，可以
只用4% PFA。
固定完之后，需要dehydration和infiltration，再包埋切片。
glut: glutaraldehyde
PFA: paraformaldehyde

【在 I***a 的大作中提到】

: 谢谢，
: 比如老鼠的的肾切一块下来，放到4%PFA加0.5%的glut，然后呢？是不是可以直接送给
: 别人做组织切片了，
: 组织切片是送人做的，自己做不了
: 另外，glut是什么？能给个全称吗？
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