o*n
2 楼
这两段DNA编码的蛋白有一个残基的区别，假设它们叫A和B。我要在同一种细菌里表达A
或者B，然后把表达A或者B的细菌混合在一起长，最后我需要想办法区分表达A和B的DNA
，也就是这两段只有一个碱基不同的DNA。
我查过，能切其中一种DNA的内切酶有两种没得卖，有一种切的位点太多。我刚刚想到
能否
PCR个很短的片段出来，避开这种酶其它的位点，不过我还不知道很短的PCR好不好做。
我得满足以下条件：
1. 我不能加tag，因为之前的实验没有加tag；
2. 我不能拿去next-gen sequencing；
3. 我们是分子实验室，没有跑蛋白胶的器材;
4. 补充下，还得能至少半定量，就是能看出来两段DNA的大致比例。
我知道DGGE/TGGE可以，但要跑胶；我找到这篇文章，http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0055154，好像更麻烦。wiki的页面上提到鉴定SNP用的办法好像都要跑胶或者做质谱。
还有什么办法吗？
或者B，然后把表达A或者B的细菌混合在一起长，最后我需要想办法区分表达A和B的DNA
，也就是这两段只有一个碱基不同的DNA。
我查过，能切其中一种DNA的内切酶有两种没得卖，有一种切的位点太多。我刚刚想到
能否
PCR个很短的片段出来，避开这种酶其它的位点，不过我还不知道很短的PCR好不好做。
我得满足以下条件：
1. 我不能加tag，因为之前的实验没有加tag；
2. 我不能拿去next-gen sequencing；
3. 我们是分子实验室，没有跑蛋白胶的器材;
4. 补充下，还得能至少半定量，就是能看出来两段DNA的大致比例。
我知道DGGE/TGGE可以，但要跑胶；我找到这篇文章，http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0055154，好像更麻烦。wiki的页面上提到鉴定SNP用的办法好像都要跑胶或者做质谱。
还有什么办法吗？
r*1
3 楼
target 黑五 有50off
【在 g******a 的大作中提到】
: 现在至圣诞之前，
: 能买到打折的吗？
: 谢谢！
【在 g******a 的大作中提到】
: 现在至圣诞之前，
: 能买到打折的吗？
: 谢谢！
d*p
4 楼
design primers with the different bases at the end of 3'
g*a
5 楼
谢谢。
需要提前排队的那种吗？
【在 r*******1 的大作中提到】
: target 黑五 有50off
需要提前排队的那种吗？
【在 r*******1 的大作中提到】
: target 黑五 有50off
X*n
6 楼
TaqMan® Allelic Discrimination assay
h*z
7 楼
verizon 现在trade in any smart phone worth $300, 相当于电话便宜300
【在 g******a 的大作中提到】
: 现在至圣诞之前，
: 能买到打折的吗？
: 谢谢！
【在 g******a 的大作中提到】
: 现在至圣诞之前，
: 能买到打折的吗？
: 谢谢！
s*s
8 楼
没仔细看。是不是有个氨基酸分别，要用DNA简单的判断？
你再做一个好切的同义突变放在蛋白的其他位置上不就行了
达A
DNA
【在 o******n 的大作中提到】
: 这两段DNA编码的蛋白有一个残基的区别，假设它们叫A和B。我要在同一种细菌里表达A
: 或者B，然后把表达A或者B的细菌混合在一起长，最后我需要想办法区分表达A和B的DNA
: ，也就是这两段只有一个碱基不同的DNA。
: 我查过，能切其中一种DNA的内切酶有两种没得卖，有一种切的位点太多。我刚刚想到
: 能否
: PCR个很短的片段出来，避开这种酶其它的位点，不过我还不知道很短的PCR好不好做。
: 我得满足以下条件：
: 1. 我不能加tag，因为之前的实验没有加tag；
: 2. 我不能拿去next-gen sequencing；
: 3. 我们是分子实验室，没有跑蛋白胶的器材;
你再做一个好切的同义突变放在蛋白的其他位置上不就行了
达A
DNA
【在 o******n 的大作中提到】
: 这两段DNA编码的蛋白有一个残基的区别，假设它们叫A和B。我要在同一种细菌里表达A
: 或者B，然后把表达A或者B的细菌混合在一起长，最后我需要想办法区分表达A和B的DNA
: ，也就是这两段只有一个碱基不同的DNA。
: 我查过，能切其中一种DNA的内切酶有两种没得卖，有一种切的位点太多。我刚刚想到
: 能否
: PCR个很短的片段出来，避开这种酶其它的位点，不过我还不知道很短的PCR好不好做。
: 我得满足以下条件：
: 1. 我不能加tag，因为之前的实验没有加tag；
: 2. 我不能拿去next-gen sequencing；
: 3. 我们是分子实验室，没有跑蛋白胶的器材;
a*t
9 楼
boost的6s 16gb版本算下来400多刀
i*l
10 楼
i did this, working well for my SNP
【在 X***n 的大作中提到】
: TaqMan® Allelic Discrimination assay
【在 X***n 的大作中提到】
: TaqMan® Allelic Discrimination assay
s*e
11 楼
这个不能用在upgrade 必须monthly pay那种
【在 h**z 的大作中提到】
: verizon 现在trade in any smart phone worth $300, 相当于电话便宜300
【在 h**z 的大作中提到】
: verizon 现在trade in any smart phone worth $300, 相当于电话便宜300
o*n
12 楼
谢谢各位的回复。
二三楼的回答好像是一个意思。那个kit看起来很好，正合我的要求。:)
四楼的回复也给了我启发。其实我之前做了另两个DNA，用酶切分开的它们。这次的两
个本想尽量保持方法一致，无奈没合适的酶。我不想改变蛋白，因为可能影响功能，但
你说的办法，可以在细菌生长结束后，扩增这两种DNA的时候加进去，应该只多了一步
而已。如果我没理解错，加入这个新的位点，是在引物里加，引物和其中一种DNA
specifically结合，另一种DNA因为错了个碱基，就不能被扩增，所以酶切可以区分开
它们。这样估计annealing温度要好高吧，然后有点不好（半）定量。
二三楼的回答好像是一个意思。那个kit看起来很好，正合我的要求。:)
四楼的回复也给了我启发。其实我之前做了另两个DNA，用酶切分开的它们。这次的两
个本想尽量保持方法一致，无奈没合适的酶。我不想改变蛋白，因为可能影响功能，但
你说的办法，可以在细菌生长结束后，扩增这两种DNA的时候加进去，应该只多了一步
而已。如果我没理解错，加入这个新的位点，是在引物里加，引物和其中一种DNA
specifically结合，另一种DNA因为错了个碱基，就不能被扩增，所以酶切可以区分开
它们。这样估计annealing温度要好高吧，然后有点不好（半）定量。
g*a
13 楼
有单买手机的DEAL吗？
谢谢！
谢谢！
c*g
14 楼
你可以用两个DNA共同区域的引物扩增包含这个polymorphism的片段。
然后Sanger sequence这个PCR产物（实际上是个mixture），看两个碱基的峰的比值。
你可以做个标准曲线，用梯度的已知比例的DNA。然后你就可以估计这里面两个allele
的比例了。
【在 o******n 的大作中提到】
: 谢谢各位的回复。
: 二三楼的回答好像是一个意思。那个kit看起来很好，正合我的要求。:)
: 四楼的回复也给了我启发。其实我之前做了另两个DNA，用酶切分开的它们。这次的两
: 个本想尽量保持方法一致，无奈没合适的酶。我不想改变蛋白，因为可能影响功能，但
: 你说的办法，可以在细菌生长结束后，扩增这两种DNA的时候加进去，应该只多了一步
: 而已。如果我没理解错，加入这个新的位点，是在引物里加，引物和其中一种DNA
: specifically结合，另一种DNA因为错了个碱基，就不能被扩增，所以酶切可以区分开
: 它们。这样估计annealing温度要好高吧，然后有点不好（半）定量。
然后Sanger sequence这个PCR产物（实际上是个mixture），看两个碱基的峰的比值。
你可以做个标准曲线，用梯度的已知比例的DNA。然后你就可以估计这里面两个allele
的比例了。
【在 o******n 的大作中提到】
: 谢谢各位的回复。
: 二三楼的回答好像是一个意思。那个kit看起来很好，正合我的要求。:)
: 四楼的回复也给了我启发。其实我之前做了另两个DNA，用酶切分开的它们。这次的两
: 个本想尽量保持方法一致，无奈没合适的酶。我不想改变蛋白，因为可能影响功能，但
: 你说的办法，可以在细菌生长结束后，扩增这两种DNA的时候加进去，应该只多了一步
: 而已。如果我没理解错，加入这个新的位点，是在引物里加，引物和其中一种DNA
: specifically结合，另一种DNA因为错了个碱基，就不能被扩增，所以酶切可以区分开
: 它们。这样估计annealing温度要好高吧，然后有点不好（半）定量。
g*a
15 楼
有单买手机的DEAL吗？
谢谢！
谢谢！
o*n
16 楼
这个办法好，我先试这个。:)
allele
【在 c*****g 的大作中提到】
: 你可以用两个DNA共同区域的引物扩增包含这个polymorphism的片段。
: 然后Sanger sequence这个PCR产物（实际上是个mixture），看两个碱基的峰的比值。
: 你可以做个标准曲线，用梯度的已知比例的DNA。然后你就可以估计这里面两个allele
: 的比例了。
allele
【在 c*****g 的大作中提到】
: 你可以用两个DNA共同区域的引物扩增包含这个polymorphism的片段。
: 然后Sanger sequence这个PCR产物（实际上是个mixture），看两个碱基的峰的比值。
: 你可以做个标准曲线，用梯度的已知比例的DNA。然后你就可以估计这里面两个allele
: 的比例了。
f*a
17 楼
boost mobile iphone 6s, $200 off
楼上已经告诉你了。
【在 g******a 的大作中提到】
: 有单买手机的DEAL吗？
: 谢谢！
楼上已经告诉你了。
【在 g******a 的大作中提到】
: 有单买手机的DEAL吗？
: 谢谢！
o*n
18 楼
直接测质粒会不会准些？因为PCR有可能因为饱和了看不出太大差别。
allele
【在 c*****g 的大作中提到】
: 你可以用两个DNA共同区域的引物扩增包含这个polymorphism的片段。
: 然后Sanger sequence这个PCR产物（实际上是个mixture），看两个碱基的峰的比值。
: 你可以做个标准曲线，用梯度的已知比例的DNA。然后你就可以估计这里面两个allele
: 的比例了。
allele
【在 c*****g 的大作中提到】
: 你可以用两个DNA共同区域的引物扩增包含这个polymorphism的片段。
: 然后Sanger sequence这个PCR产物（实际上是个mixture），看两个碱基的峰的比值。
: 你可以做个标准曲线，用梯度的已知比例的DNA。然后你就可以估计这里面两个allele
: 的比例了。
J*9
19 楼
可以试一试设计dCAPS：
http://helix.wustl.edu/dcaps/dcaps.html
http://helix.wustl.edu/dcaps/dcaps.html
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