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Qiagen割胶回收PCR产物在220有很强吸收峰
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Qiagen割胶回收PCR产物在220有很强吸收峰# Biology - 生物学
g*a
1
现在即使不看显示器,眼睛也还是不舒服,看显示器的话更难受,还伴随着头疼。
在网上查了下,可能是Led的pwm调光机制导致的。请问除了卖掉,有啥解决方法吗?现
在显示器几乎都是led背光,岂不没有那个显示器适合我用的了?
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s*s
2
试了很多条件,用qiagen的gel extraction试剂盒在220nm处总会有吸收峰,
absorbance强度在2.0左右 (nanodrop) 。
网上查了一下据说是盐没有除干净,但是试了两次PE wash和加PE后放置更长时间,都
没有改善。
请教有什么方法可以去掉这个220nm吸收?
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E*e
3
亮度调到顶试试
或者:
http://www.tftcentral.co.uk/articles/flicker_free_database.htm

【在 g*******a 的大作中提到】
: 现在即使不看显示器,眼睛也还是不舒服,看显示器的话更难受,还伴随着头疼。
: 在网上查了下,可能是Led的pwm调光机制导致的。请问除了卖掉,有啥解决方法吗?现
: 在显示器几乎都是led背光,岂不没有那个显示器适合我用的了?

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s*s
4
我通常gel extration以后,再过一遍miniElute或者普通的PCR purification

【在 s******s 的大作中提到】
: 试了很多条件,用qiagen的gel extraction试剂盒在220nm处总会有吸收峰,
: absorbance强度在2.0左右 (nanodrop) 。
: 网上查了一下据说是盐没有除干净,但是试了两次PE wash和加PE后放置更长时间,都
: 没有改善。
: 请教有什么方法可以去掉这个220nm吸收?

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g*t
5
真年轻, 还眼镜痛, 等老了后,看什么都没感觉, 一天看15个小时也没感觉,
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l*a
6
一般没事儿,非要较真,用pcr purification kit再纯化一边,会sacrifice yeild.

【在 s******s 的大作中提到】
: 试了很多条件,用qiagen的gel extraction试剂盒在220nm处总会有吸收峰,
: absorbance强度在2.0左右 (nanodrop) 。
: 网上查了一下据说是盐没有除干净,但是试了两次PE wash和加PE后放置更长时间,都
: 没有改善。
: 请教有什么方法可以去掉这个220nm吸收?

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l*g
8
正常,不会影响后续步骤。
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E*e
9
不用试几天
把屏幕搞成白色,拿根笔在上面快速晃晃就知道了
如果笔在上面能晃出好几个重影的,就是有flicker
如果你是对flicker敏感的眼睛
这样的屏一定会伤你的眼睛

【在 g*******a 的大作中提到】
: 谢谢。准备亮度调到顶试几天,如果还是不行的话就换。
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s*s
10
谢谢楼上各位的解答!
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s*l
11
f.lux 屏幕调成暖色 justgetflux.com/‎
显示器亮度调到顶,在f.lux里快捷键Alt+PageDown再调低亮度。
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s*e
12
搭车问,我同时用Qiagen RNA mini kit提WT和mutant动物肠子的RNA,
已经三次了,每次mutant的RNA nanodrop 260:230<0.5 (WT 260:230>2)
这是为什么?难道mutant肠子中有特别的东西?

【在 l******g 的大作中提到】
: 正常,不会影响后续步骤。
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t*a
13
哈,这个安慰给的

【在 g*******t 的大作中提到】
: 真年轻, 还眼镜痛, 等老了后,看什么都没感觉, 一天看15个小时也没感觉,
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g*5
14
肠子的RNA Is very low yield.
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l*g
15
你搞错了,应该把亮度调节到0
led背光源亮度太高,不如灯管柔和,所以长时间盯着会导致眼睛刺痛流泪,就和看太
阳光效果差不多
我的显示器亮度全在0上,对比度6、70,看时间再长也不觉得不舒服

【在 g*******a 的大作中提到】
: 谢谢。准备亮度调到顶试几天,如果还是不行的话就换。
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l*1
16
next try gentleMACS™ Octo Dissociator
RUN four WT and four Mutant on the same dissociation/RNA extraction
then use Qiagen RNA mini kit
then compare WT and Mutant sample OD value
PDF link:
HTTPS//www.miltenyibiotec.com/~/media/Images/Products/Import/0002000/
IM0002018.ashx
18,600 usd/unit
or small type: gentleMACS™ Dissociator
HTTPS//www.miltenyibiotec.com/~/media/Images/Products/Import/0001600/
IM0001677.ashx
5,700 usd/unit
or contact details:
HTTPS//www.miltenyibiotec.com/en/About-us/Contact.aspx

【在 s*******e 的大作中提到】
: 搭车问,我同时用Qiagen RNA mini kit提WT和mutant动物肠子的RNA,
: 已经三次了,每次mutant的RNA nanodrop 260:230<0.5 (WT 260:230>2)
: 这是为什么?难道mutant肠子中有特别的东西?

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t*e
17
单位和家里都是这个显示器,亮度调到0,对比度70, 眼睛非常舒服
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s*e
18
哇,你真聪明。一下就看出我dissociate组织有问题。确实mutant tissue和WT tissue
区别挺大的,数量也不一样多,我却全靠手磨,有问题也出在这里了。
你贴的东西真不错。买是不现实,我去找找哪个实验室有这个东西,下次去用一下。
很感谢你提供的信息!

【在 l**********1 的大作中提到】
: next try gentleMACS™ Octo Dissociator
: RUN four WT and four Mutant on the same dissociation/RNA extraction
: then use Qiagen RNA mini kit
: then compare WT and Mutant sample OD value
: PDF link:
: HTTPS//www.miltenyibiotec.com/~/media/Images/Products/Import/0002000/
: IM0002018.ashx
: 18,600 usd/unit
: or small type: gentleMACS™ Dissociator
: HTTPS//www.miltenyibiotec.com/~/media/Images/Products/Import/0001600/

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g*a
19
我之前是把亮度调到10左右,对比度6,70,头半个月没感觉,后来眼睛越来越疼。
你把亮度调高,对比度降低到2,30,也可以达到同样效果,那样你的眼睛会疼么?
有的人就是对flicker不敏感,这可能就和花粉过敏一样。
pwm调光,就是靠频闪脉冲宽度调光,高亮度每周期led点亮的时间长,频闪的效果可能
要弱一些。楼上提供的flicker free显示器列表中,某些高端dell显示器中,高亮度设
置无频闪,低亮度高频频闪。

【在 l*******g 的大作中提到】
: 你搞错了,应该把亮度调节到0
: led背光源亮度太高,不如灯管柔和,所以长时间盯着会导致眼睛刺痛流泪,就和看太
: 阳光效果差不多
: 我的显示器亮度全在0上,对比度6、70,看时间再长也不觉得不舒服

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l*1
20
De rein.

tissue

【在 s*******e 的大作中提到】
: 哇,你真聪明。一下就看出我dissociate组织有问题。确实mutant tissue和WT tissue
: 区别挺大的,数量也不一样多,我却全靠手磨,有问题也出在这里了。
: 你贴的东西真不错。买是不现实,我去找找哪个实验室有这个东西,下次去用一下。
: 很感谢你提供的信息!

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g*a
21
谢谢,我试试。
以前装过flux,不太喜欢它的自动调节。看来现在有快捷键手动调节了。

【在 s******l 的大作中提到】
: f.lux 屏幕调成暖色 justgetflux.com/‎
: 显示器亮度调到顶,在f.lux里快捷键Alt+PageDown再调低亮度。

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q*7
22
QIAGEN做为质粒提取的老大,从来没有想过改进。这具体和欧洲人的特性有关吧。你那
测出来的都是洗液(总称solvent)。后面会影响到连接酶的活性,从而影响克隆效率,导
致克隆效率降低。做难连接的大片段时尤其明显。
我现在一直在用这个公司的Kit,便宜(价格是Qiagen的一半),而且有创新。用他们Kit
(胶和PCR片段合二为一的,非常方便)提取的片段就很纯,连接克隆效率都很高。建
议你用用这个。
http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification
http://www.greenbioresearch.com/plasmid-dna-isolation-miniprep-
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s*l
23
这个快捷键是调节亮度。
PWM调光的显示器亮度越低闪的越快。所以要把亮度调到最高。但亮度太高对眼睛不好
,所以用flux再把亮度调低。因为显示器本身的亮度还是最高,所以频闪没有增加。
你可以通过手机或摄像头看屏幕,然后调节亮度就能看屏幕闪不闪了。
至于flux自动调节,是调节色温去除蓝光。蓝光也是造成屏幕疲劳的主要原因。不想要
可以把色温调高。

【在 g*******a 的大作中提到】
: 谢谢,我试试。
: 以前装过flux,不太喜欢它的自动调节。看来现在有快捷键手动调节了。

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q*7
24
你那测出来的都是洗液(总称solvent)。后面会影响到反转录酶的活性。如果每个样品
的浓度不一样,你做qPCR时,要调成一样的浓度,这样你做反转录的每一个样品的反应
液里含有的洗液浓度就不一样。不一样的洗液浓度,抑制反转录酶的程度也不一样。这
样你最后出来的qPCR结果肯定不准确。有的样品里表达低,可能是因为洗液多而抑制了
反转录酶造成的,而不是真正的表达低。如果你同一组的样品,有的表达高,有的表达
低,一般都是这个原因造成的建议你试一试这个公司的KIT,而且还可以同时检测小RNA
。便宜又好用
http://www.greenbioresearch.com/mitotal-rnamini-using-qiagen-ki

【在 s*******e 的大作中提到】
: 搭车问,我同时用Qiagen RNA mini kit提WT和mutant动物肠子的RNA,
: 已经三次了,每次mutant的RNA nanodrop 260:230<0.5 (WT 260:230>2)
: 这是为什么?难道mutant肠子中有特别的东西?

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g*a
25
刚用单反测试了下我的Dell U2412m(LED背光)和Samsung P2770HD(老式CCFL背光),
测试方法参考:
http://www.tftcentral.co.uk/articles/pulse_width_modulation.htm
快门试了1/2s到1/200s
P2770HD始终没有明暗条纹,偶尔有颜色过渡。之前一直用这个显示器,眼睛没有什么
不适,就是颜色表现力太差。
U2412m在最高亮度的时候,1/40s以上还是能看到明显的明暗条纹(我的条纹是上下间
隔的,不是如上网页左右间隔的),最低亮度时更明显,更多,1/2s快门就能看到。还
是把它卖了算了。

【在 s******l 的大作中提到】
: 这个快捷键是调节亮度。
: PWM调光的显示器亮度越低闪的越快。所以要把亮度调到最高。但亮度太高对眼睛不好
: ,所以用flux再把亮度调低。因为显示器本身的亮度还是最高,所以频闪没有增加。
: 你可以通过手机或摄像头看屏幕,然后调节亮度就能看屏幕闪不闪了。
: 至于flux自动调节,是调节色温去除蓝光。蓝光也是造成屏幕疲劳的主要原因。不想要
: 可以把色温调高。

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o*a
26
230nm的问题据说是RLT buffer没弄干净,网上的经验是RPE洗的时候把柱子来回颠倒几
次,连lid都要洗到,还有除RPE的时候离心两次,第二次离心时把柱子转个方向

【在 s*******e 的大作中提到】
: 搭车问,我同时用Qiagen RNA mini kit提WT和mutant动物肠子的RNA,
: 已经三次了,每次mutant的RNA nanodrop 260:230<0.5 (WT 260:230>2)
: 这是为什么?难道mutant肠子中有特别的东西?

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u*a
27
亮度调到最高, 对比度调低. 不然整天对着灯泡看, 眼睛还是不舒服.
我头几天这个显示器的时候, 眼睛被闪得流泪...用了一个星期, 适应了. 如果适应不
了的话, Benq有几款MVA panel的显示器我觉得挺好的, 不闪.

【在 g*******a 的大作中提到】
: 谢谢。准备亮度调到顶试几天,如果还是不行的话就换。
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w*s
28
that is agarose/sugar
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G*h
29
换便宜的老式tn屏
有改善不

【在 u******a 的大作中提到】
: 亮度调到最高, 对比度调低. 不然整天对着灯泡看, 眼睛还是不舒服.
: 我头几天这个显示器的时候, 眼睛被闪得流泪...用了一个星期, 适应了. 如果适应不
: 了的话, Benq有几款MVA panel的显示器我觉得挺好的, 不闪.

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b*n
30
230的峰主要是多糖类的,agarose make sense

【在 w**********s 的大作中提到】
: that is agarose/sugar
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w*u
31
刚入了个eizo的ev2336,希望对眼睛好点儿。
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q*7
32
你可以配点一定浓度的sugar,测测是不是在那有吸收峰。直接纯化PCR产物也在230
那里有个很强的吸收峰,请问那SUGAR是那里来的?agarose怎么在低温下成液体的?

【在 w**********s 的大作中提到】
: that is agarose/sugar
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l*g
33
亮度高才是灯泡
我有过照度仪,对比度变化照度变化很小,主要是亮度影响照度大小
现在的led背光,很多亮度开到0,照度一样比以前灯管开到100还大

【在 u******a 的大作中提到】
: 亮度调到最高, 对比度调低. 不然整天对着灯泡看, 眼睛还是不舒服.
: 我头几天这个显示器的时候, 眼睛被闪得流泪...用了一个星期, 适应了. 如果适应不
: 了的话, Benq有几款MVA panel的显示器我觉得挺好的, 不闪.

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s*s
34
ft, 有QG, agarose当然是液体,否则你加的什么样啊。

【在 q***7 的大作中提到】
: 你可以配点一定浓度的sugar,测测是不是在那有吸收峰。直接纯化PCR产物也在230
: 那里有个很强的吸收峰,请问那SUGAR是那里来的?agarose怎么在低温下成液体的?

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a*s
35
很有用。多谢!

【在 s******l 的大作中提到】
: 这个快捷键是调节亮度。
: PWM调光的显示器亮度越低闪的越快。所以要把亮度调到最高。但亮度太高对眼睛不好
: ,所以用flux再把亮度调低。因为显示器本身的亮度还是最高,所以频闪没有增加。
: 你可以通过手机或摄像头看屏幕,然后调节亮度就能看屏幕闪不闪了。
: 至于flux自动调节,是调节色温去除蓝光。蓝光也是造成屏幕疲劳的主要原因。不想要
: 可以把色温调高。

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m*M
36
我认为影响260/230比值的是你说的QG buffer,而不是agarose.
大家都在这里猜,还不如去测一下。
你可以用NANODROP测一下QG BUFFER的吸收峰,然后再测一个溶了agarose胶的QG
BUFFER测一下,看看有没有区别你就知道了。
同时你也可以测一下洗液的吸收峰在哪里。

【在 s******s 的大作中提到】
: ft, 有QG, agarose当然是液体,否则你加的什么样啊。
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u*a
37
我的理解是, 液晶显示器后面是背光, 亮度最高就是背光常亮, 最费电, 但是不闪. 如
果没有前面的液晶遮挡, 那亮度肯定是最高的了.
背光穿过前面的液晶产生图像, 对比度改变液晶的透明度. 对比度调到最低, 液晶的透
明度就很低了, 能透过的光线也就很少了.
我没有照度仪, 但据我观察, 高亮度低对比度和低亮度的照度应该是接近的. 至少我的
显示器, 对比度最低以后背光几乎就无法通过了.
过高的照度和过高的频闪都可能引起不适, 把亮度调低可以减少照度, 但是频闪
却是最大的, 不符合楼主的要求. 在极高亮度下通过降低对比度达到较少的照度才有可
能达到楼主的要求, 照度和频闪都照顾到了, 缺点是费电.

【在 l*******g 的大作中提到】
: 亮度高才是灯泡
: 我有过照度仪,对比度变化照度变化很小,主要是亮度影响照度大小
: 现在的led背光,很多亮度开到0,照度一样比以前灯管开到100还大

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b*e
38
遇到过和你同样的问题
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w*n
39
换u2410

【在 g*******a 的大作中提到】
: 现在即使不看显示器,眼睛也还是不舒服,看显示器的话更难受,还伴随着头疼。
: 在网上查了下,可能是Led的pwm调光机制导致的。请问除了卖掉,有啥解决方法吗?现
: 在显示器几乎都是led背光,岂不没有那个显示器适合我用的了?

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