基因打靶新进展？ - 未名空间MITBBS历史存档

d*o2014-01-16 08:01

1 楼

http://support.lenovo.com/us/en/documents/hf004122
Dear Lenovo Customer,
April 21, 2015 -- In cooperation with the Consumer Product Safety Commission
(CPSC), Lenovo is expanding the recall announced March 27, 2014. Lenovo is
voluntarily recalling affected lithium-ion batteries worldwide. These
batteries were manufactured for use with ThinkPad notebook computers that
shipped between February, 2010 and June, 2012. In the interest of public
safety, Lenovo will offer customers free-of-charge replacement batteries for
all recalled batteries.
View battery recall FAQs.
Lenovo sold the batteries with new notebook computers or as optional or
replacement batteries on the models listed below.
Edge 11, Edge 13, Edge 14, Edge 15, Edge 120, Edge 125, Edge 320, Edge
325, Edge 420, Edge 425, Edge 430, Edge 520, Edge 525, Edge 530
X200, X201, X200S, X201S, X220, X220T, X100E, X120E, X121E, X130E
T410, T420, T510, T520
W510, W520
L412, L420/421, L512, L520
T430 (China and Europe only)
X131E (Australia only)
Until a replacement battery arrives, you should turn off the system, remove
the battery, and only power your ThinkPad by plugging in the AC adapter and
power cord.

b*e2014-01-16 08:01

2 楼

这是本版名ID微博上的一段话。这几年Talen和Cas9很火，想知道这个技术现在到什么
地步了？会不会最终完全取代胚胎干细胞方法呢？有没有牛人评一下？
“这两天真是太兴奋了。基于EGE系统的大片段基因敲进成功了，使基因敲进和条件性
基因敲除动物制备过程缩短到两三个月，成本也大大降低，使得模式动物能够走入几乎
所有实验室。同时，我们实现了在两个不同基因位点实现同时敲进，使得在动物体内研
究基因相互作用变得更容易。而且，可做物种更多了”。

y*i2014-01-16 08:01

3 楼

去他的微博看了一下，好像是他们公司自己发展出来的技术
“我们用Extreme Genome Editing (EGE)系统通过基因敲进的方式，分别跟ACTB（细胞
骨架）和LMNB1（核蛋白）加上GFP标签。可以看到其效率比CRISPR/Cas9高很多倍。而
且，通过各种检测，发现90％以上是同源重组，随机插入很少。现在我们正在做多基因
敲进，这对于研究细胞内蛋白相互作用非常有帮助。”
“这是在两个不同基因上分别敲进了DsRed和DTR-EGFP，并做成融合蛋白。这次敲进不
是用ODN, 而是比较大的DNA片段敲进。看来我们的EGE系统真的非常好用。是不是应该
发一篇文章。”

【在 b********e 的大作中提到】

: 这是本版名ID微博上的一段话。这几年Talen和Cas9很火，想知道这个技术现在到什么
: 地步了？会不会最终完全取代胚胎干细胞方法呢？有没有牛人评一下？
: “这两天真是太兴奋了。基于EGE系统的大片段基因敲进成功了，使基因敲进和条件性
: 基因敲除动物制备过程缩短到两三个月，成本也大大降低，使得模式动物能够走入几乎
: 所有实验室。同时，我们实现了在两个不同基因位点实现同时敲进，使得在动物体内研
: 究基因相互作用变得更容易。而且，可做物种更多了”。

w*a2014-01-16 08:01

4 楼

这个先申请专利吧，发了文章被别的公司抢注专利，回头不让你原创作者用了。。。

【在 y***i 的大作中提到】

: 去他的微博看了一下，好像是他们公司自己发展出来的技术
: “我们用Extreme Genome Editing (EGE)系统通过基因敲进的方式，分别跟ACTB（细胞
: 骨架）和LMNB1（核蛋白）加上GFP标签。可以看到其效率比CRISPR/Cas9高很多倍。而
: 且，通过各种检测，发现90％以上是同源重组，随机插入很少。现在我们正在做多基因
: 敲进，这对于研究细胞内蛋白相互作用非常有帮助。”
: “这是在两个不同基因上分别敲进了DsRed和DTR-EGFP，并做成融合蛋白。这次敲进不
: 是用ODN, 而是比较大的DNA片段敲进。看来我们的EGE系统真的非常好用。是不是应该
: 发一篇文章。”

j*i2014-01-16 08:01

5 楼

什么原理，我原来以为是依赖非同源重组机制，不过看来还是靠同源重组。效率提高很
诱人啊。可以发个nature methods 或 nature biotech吧。

b*e2014-01-16 08:01

6 楼

应该发个文章，怎么着对公司也是一个正面宣传吧。比如华大。

【在 j******i 的大作中提到】

: 什么原理，我原来以为是依赖非同源重组机制，不过看来还是靠同源重组。效率提高很
: 诱人啊。可以发个nature methods 或 nature biotech吧。

r*z2014-01-16 08:01

7 楼

做Cre鼠？

l*k2014-01-16 08:01

8 楼

自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
基因组编辑系统。然后我们就看这个系统是不是可以在大鼠上用。因为信心比较大，我
们就直接进行双基因敲进实验了。分别是在大鼠CD4基因后面加上DsRed，在FoxP3后面
加上 IRES-DTR-2A-EGFP-pA。每次注射之后移植受精卵80－100个，出生大鼠30－40只
。我们发现大概25－30％的pups成功，而且这其中的50％以上是双敲进。到现在可以看
得出，其实不管是做cre工具大鼠，还是做条件性敲除（比如做一个长打靶载体或分别
对应两个loxP位点的打靶载体），都会很容易了。不仅时间可以缩短到2、3个月，而且
因为没有抗性基因，也不需要去掉NeoR等步骤，以及担心嵌合体鼠germline
transmission。应该是一个很好的方法。我们也准备在今年将这个技术用到小鼠上。这
样做小鼠的速度会快很多，而且价格也会大大地下降。
不管是ZFN、TALEN、还是CRISPR，其脱靶的可能性是可以预测的。也需要对可能的脱靶
位点进行检测。当然也可以通过传代对潜在突变位点进行稀释。因为是通过打靶载体（
而不是ODN)同源重组来做的，所以可以通过southern blot来确定有没有随机插入。尤
其是在做条件性基因敲除的时候，不用担心如果用ODN可能会有随机插入而无法用
Southern blot检测。
现在的问题是，这个系统里面有几个关键成分，我们目前并不想透露。其实一旦透露大
家就会觉得非常简单。但如果发文章的话，或许就会要求我们透露这些？还是可以以
正在申请专利为由拒绝透露？
我想是不是可以发一个小文章，主要是讲大鼠Treg。因为CD4+ T 细胞是红色的，Treg
是红＋绿色的，而且因为这个FoxP3上有白喉毒素受体，可以将Treg从体内deplete掉。
这样因为重点放在了这个细胞群的功能研究上，所以可以对大鼠的制备过程不必着重提
? 至于Nature Biotech级别的文章，对于我们这样的公司，我觉得或许我们不应该很
看重？

【在 b********e 的大作中提到】

: 这是本版名ID微博上的一段话。这几年Talen和Cas9很火，想知道这个技术现在到什么
: 地步了？会不会最终完全取代胚胎干细胞方法呢？有没有牛人评一下？
: “这两天真是太兴奋了。基于EGE系统的大片段基因敲进成功了，使基因敲进和条件性
: 基因敲除动物制备过程缩短到两三个月，成本也大大降低，使得模式动物能够走入几乎
: 所有实验室。同时，我们实现了在两个不同基因位点实现同时敲进，使得在动物体内研
: 究基因相互作用变得更容易。而且，可做物种更多了”。

j*i2014-01-16 08:01

9 楼

你可以边申请专利边投的吧。
同源重组的效率在primary cell里边比cell line里边低不少。你们的这个技术细节我
不知道，看起来好像还是同源重组，但是利用了某种方法，使效率提高了很多。这个是
很令人兴奋的。我不是做老鼠的，但是ZFN, TALEN, CRISPR都在使用，一直苦于没有办
法提高同源重组的效率。
你们这个技术跟这遍cell应该类似吧？Cell. 2013 Sep 12;154(6):1370-9. doi: 10.
1016/j.cell.2013.08.022. Epub 2013 Aug 29.

j*i2014-01-16 08:01

10 楼

你可以边申请专利边投的吧。
同源重组的效率在primary cell里边比cell line里边低不少。你们的这个技术细节我
不知道，看起来好像还是同源重组，但是利用了某种方法，使效率提高了很多。这个是
很令人兴奋的。我不是做老鼠的，但是ZFN, TALEN, CRISPR都在使用，一直苦于没有办
法提高同源重组的效率。
你们这个技术跟这遍cell应该类似吧？Cell. 2013 Sep 12;154(6):1370-9. doi: 10.
1016/j.cell.2013.08.022. Epub 2013 Aug 29.

l*k2014-01-16 08:01

11 楼

我们用的不是他们用的方法，而是开发了一个新方法。

【在 j******i 的大作中提到】

: 你可以边申请专利边投的吧。
: 同源重组的效率在primary cell里边比cell line里边低不少。你们的这个技术细节我
: 不知道，看起来好像还是同源重组，但是利用了某种方法，使效率提高了很多。这个是
: 很令人兴奋的。我不是做老鼠的，但是ZFN, TALEN, CRISPR都在使用，一直苦于没有办
: 法提高同源重组的效率。
: 你们这个技术跟这遍cell应该类似吧？Cell. 2013 Sep 12;154(6):1370-9. doi: 10.
: 1016/j.cell.2013.08.022. Epub 2013 Aug 29.

T*u2014-01-16 08:01

12 楼

你需要先申请专利，再发表paper。
另外，还得确定你做的改进能够被patent
如果你是在别人的patented technology上做了改进，你得先license。
最好咨询real patent lawyer
另外你的client用了EGE genenrated mice是否在文章中reveal the details about
generating mice/rat? otherwise they need a paper or patent to refer to.

【在 l**********k 的大作中提到】

: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的

T*u2014-01-16 08:01

13 楼

我非常理解你的难处。
也许就是简单的组分的改变。
类比于drug discovery industry
发现了某个OTC FDA approved drug可以治疗另外一种疾病。
要不要申请专利其实是很头疼的问题。
因为即使申请了，你也没有办法限制其他研究者，医生使用这个compound.
但if you do not publish with paper or patent, the validity of the mice or
the data produced with the mice/rat with be challenged by the scientific
community or the reviewer, which might finally affect your market and
potential clients.
Just my 2 cents

【在 l**********k 的大作中提到】

: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的

w*r2014-01-16 08:01

14 楼

申请专利是王道，发文章对你公司有啥用？发方法类文章，技术细节是一定要公布的，
要不然不就成了商业广告。

【在 l**********k 的大作中提到】

: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的

w*r2014-01-16 08:01

15 楼

就说用crispr做的，不就完事了吗，
其实直接注射卵核，即使没有crispr,同源重组率也是极高的

【在 T****u 的大作中提到】

: 你需要先申请专利，再发表paper。
: 另外，还得确定你做的改进能够被patent
: 如果你是在别人的patented technology上做了改进，你得先license。
: 最好咨询real patent lawyer
: 另外你的client用了EGE genenrated mice是否在文章中reveal the details about
: generating mice/rat? otherwise they need a paper or patent to refer to.

b*r2014-01-16 08:01

16 楼

基因打靶和干细胞有毛关系啊，怎么能打靶就没干细胞了，应该是打靶容易了，干细胞
更容易上临床才对

T*u2014-01-16 08:01

17 楼

。。。。currently Genome editing generates KO mice without going through ES
cell stage.
You are talking different things such as hES based therapy.

【在 b****r 的大作中提到】

: 基因打靶和干细胞有毛关系啊，怎么能打靶就没干细胞了，应该是打靶容易了，干细胞
: 更容易上临床才对

k*o2014-01-16 08:01

18 楼

你们的技术重组的效率比Jaenish lab的方法高大概多少？

【在 l**********k 的大作中提到】

: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的

j*i2014-01-16 08:01

19 楼

请问你们在细胞系里边的同源重组效率是多少？用的是什么细胞？我们用ZFN, 在没有
使用药物的情况下，最多只能达到8%。如果是primary细胞，效率就更低了。

【在 l**********k 的大作中提到】

: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的

n*y2014-01-16 08:01

20 楼

联系党生，发Cell Research就可以了，不用公布细节的，就说patent pending。专利
要申请的，在这之前，你要保证公司内部不要流出细节

j*i2014-01-16 08:01

21 楼

看开点吧，就是提高了效率的而已，用的都是现有的技术，学术意义上进步不大，上
nature methods, nature biotech很难。这个crispr+同源重组插入大片段，已经发了
在cell老鼠的文章，效率10-30%。Genome Research上也发了crispr＋非同源重组在
Zerbrafish插入长基因。

l*k2014-01-16 08:01

22 楼

稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？实际上很多做神经研究的人都想
用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
的提供稳定的技术服务。
我们用Jaenish文章里的方法也做不出来，但我听说他们有非常好的显微注射高手，所
以我们怀疑可能是我们公司的注射手艺还不够好。但不管好不好，总要把这个项目做起
来呀。所以我们一直在研发新方法。而这种方法我们觉得效率非常高，结果重复性好，
跟谁注射也关系不大。
马上我们会先做出一些ROSA-loxP-STOP-loxP-EYFP类的工具大鼠，以及一些常用的Cre
大鼠，这样大家就可以做条件性敲除了。我觉得3、5个月我们就可以做出几十种Cre大
鼠出来，估计会对国内的科研有所帮助。
所有的技术都是站在前人的肩膀上，这个方法也不是大家想象中的把各种已知分子进行
组合这么简单。我相信我们这个技术应该是可以申请专利的。就是因为太简单了，申
请专利对我们不一定是一件好事。

【在 l**********k 的大作中提到】

: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的

w*r2014-01-16 08:01

23 楼

稳定，重复性好，对于急需发文章的大牛，或博后来说不是太重要
公司就没法自己骗自己了，长木有一手资料，不是纸上谈兵，这个技术的应用价值巨大
不过从发文章角度，新颖性可能不是太强，别人一学就会，影响生意

ES

【在 l**********k 的大作中提到】

: 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
: 很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
: 但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
: 其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
: 细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
: 我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
: ）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？实际上很多做神经研究的人都想
: 用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
: ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
: 的提供稳定的技术服务。

w*a2014-01-16 08:01

24 楼

真正work得很好的技术都是超级简单的技术，比如PCR，RNAi。
还是可以申请专利赚钱的，卖专利比卖产品效率高呀。

ES

【在 l**********k 的大作中提到】

: 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
: 很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
: 但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
: 其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
: 细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
: 我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
: ）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？实际上很多做神经研究的人都想
: 用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
: ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
: 的提供稳定的技术服务。

H*a2014-01-16 08:01

25 楼

有位国内显微注的高手现在在美国，她准备今年6月底开始在美国找microinjection位
置。她有7,8年的专职microinjection经历。主要从事：
Nuclear transfer cloning
intracytoplasmic sperm injection
pronuclear injection
blastocyst, 8-cell embryo microinjection of ES cells.
Rederivation
能否指点在美国如何找到专职的显微注射位置？她非常喜欢microinjection，不想找其
它位置。

ES

【在 l**********k 的大作中提到】

: 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
: 很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
: 但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
: 其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
: 细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
: 我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
: ）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？实际上很多做神经研究的人都想
: 用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
: ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
: 的提供稳定的技术服务。

v*e2014-01-16 08:01

26 楼

你这么说起来，我想你们没必要申请专利，也不要发表文章，除非你觉得技术被拿走泄
密的可能性很大；而且申请专利未必能保护的了你们，你想啊，别人要是也用你的技术
做敲除，你找出证据说别人侵权的难度很大；而且，你的专利并不是单独的，你需要用
别人的专利去覆盖，不管是talen,还是cas9,现在肯定已经不少专利的，你们要花很多
钱和精力去处理专利的问题，不划算

【在 l**********k 的大作中提到】

: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的

w*a2014-01-16 08:01

27 楼

开玩笑吧，单独的实验室嫌麻烦不注册专利而去发个文章也就算了。
公司如果有核心技术不用专利保护是很危险的，让别人抢注了，你自己哭都没地方去。
至于专利怎么撰写，那是律师的事情。

【在 v********e 的大作中提到】

: 你这么说起来，我想你们没必要申请专利，也不要发表文章，除非你觉得技术被拿走泄
: 密的可能性很大；而且申请专利未必能保护的了你们，你想啊，别人要是也用你的技术
: 做敲除，你找出证据说别人侵权的难度很大；而且，你的专利并不是单独的，你需要用
: 别人的专利去覆盖，不管是talen,还是cas9,现在肯定已经不少专利的，你们要花很多
: 钱和精力去处理专利的问题，不划算

r*z2014-01-16 08:01

28 楼

我猜是donor片段两端设计成带有ngg序列的，利用改造过的不会发生切割的cas9指引
donor到要替换的位点，提高效率

T*u2014-01-16 08:01

29 楼

it won't work in this way

【在 r***z 的大作中提到】

: 我猜是donor片段两端设计成带有ngg序列的，利用改造过的不会发生切割的cas9指引
: donor到要替换的位点，提高效率

j*i2014-01-16 08:01

30 楼

我猜可能有更有效的deliver方法，比如virus. 这样显微注射的要求就降低了。

d*p2014-01-16 08:01

31 楼

Nonintegrated virus?

【在 j******i 的大作中提到】

: 我猜可能有更有效的deliver方法，比如virus. 这样显微注射的要求就降低了。

j*i2014-01-16 08:01

32 楼

对头。我猜的。可能完全不是这样。

【在 d*p 的大作中提到】

: Nonintegrated virus?

d*p2014-01-16 08:01

33 楼

Unfortunately, I am working on it.

【在 j******i 的大作中提到】

: 对头。我猜的。可能完全不是这样。