g*s
2 楼
各位前辈,
小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
在pulldown以后,我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
bead上脱落下来。我洗过很多遍,都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
这种脱落,谢了!
小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
在pulldown以后,我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
bead上脱落下来。我洗过很多遍,都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
这种脱落,谢了!
H*s
5 楼
你的问题是pull down之后,streptavidin还处在二聚体状态,这是导致streptavidin
在后面的加热过程中变性的原因。形成四聚体的streptavidin应该是非常非常稳定的,
加热到100度都未必能够导致streptavidin变性(Fidelio GD,1999)。补救措施,在
pull down之后,加入过量biotin,是反应饱和,然后在加热。
【在 g*****s 的大作中提到】
: 各位前辈,
: 小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
: 在pulldown以后,我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
: bead上脱落下来。我洗过很多遍,都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
: 这种脱落,谢了!
在后面的加热过程中变性的原因。形成四聚体的streptavidin应该是非常非常稳定的,
加热到100度都未必能够导致streptavidin变性(Fidelio GD,1999)。补救措施,在
pull down之后,加入过量biotin,是反应饱和,然后在加热。
【在 g*****s 的大作中提到】
: 各位前辈,
: 小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
: 在pulldown以后,我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
: bead上脱落下来。我洗过很多遍,都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
: 这种脱落,谢了!
f*e
6 楼
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