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抗体过Mono Q柱损失：上了2mg洗脱下来只有1mg

抗体过Mono Q柱损失：上了2mg洗脱下来只有1mg# Biology - 生物学

d*g2019-04-01 07:04

1 楼

如题，抗体过Mono Q 柱损失，上了2mg结果洗脱下来的只有1mg。从抗体上柱到洗脱下
来之前，通过flowthrough中UV280的检测，看不到任何的蛋白不挂柱而造成的流失：
UV280一直在基线水平，和过Buffer A-20mM Tris的水平一样。但是收集到所有洗脱下
来的抗体组分，根据测得的浓度和体积的乘积，加和所有的fractions，结果就是2mg的
上样，只得到1mg。请问是损失了1mg吗？损失的部分去哪里了呢？
同时，还有一个问题：
同一个均一样品（Protein A纯化过的抗体，透析到PBS中），为何分两次上样（每次
3mg），即使设置条件完全一致，结果出来的峰形会不一样呢？怎样可以让峰形稳定
一些？
谢谢！

f*e2019-04-01 07:04

2 楼

过柱损失50%是正常范围内的，那些号称回收率90%以上的都是理想状态下，或者某些蛋
白，大部分都有损失。Q 是离子交换，一般不像亲和层析一样，能结合所有样品。

t*m2019-04-01 07:04

3 楼

比如死柱子上了

【在 d*******g 的大作中提到】

: 如题，抗体过Mono Q 柱损失，上了2mg结果洗脱下来的只有1mg。从抗体上柱到洗脱下
: 来之前，通过flowthrough中UV280的检测，看不到任何的蛋白不挂柱而造成的流失：
: UV280一直在基线水平，和过Buffer A-20mM Tris的水平一样。但是收集到所有洗脱下
: 来的抗体组分，根据测得的浓度和体积的乘积，加和所有的fractions，结果就是2mg的
: 上样，只得到1mg。请问是损失了1mg吗？损失的部分去哪里了呢？
: 同时，还有一个问题：
: 同一个均一样品（Protein A纯化过的抗体，透析到PBS中），为何分两次上样（每次
: 3mg），即使设置条件完全一致，结果出来的峰形会不一样呢？怎样可以让峰形稳定
: 一些？
: 谢谢！

d*g2019-04-01 07:04

4 楼

谢谢！你这么一说，感觉心情好多了~

【在 f****e 的大作中提到】

: 过柱损失50%是正常范围内的，那些号称回收率90%以上的都是理想状态下，或者某些蛋
: 白，大部分都有损失。Q 是离子交换，一般不像亲和层析一样，能结合所有样品。

d*g2019-04-01 07:04

5 楼

应该不是。我一般纯化五六次之后，要用很严苛的洗剂方法清晰柱子（1M NaOH， 6M
盐酸胍， 70%乙醇），结果洗不下来很多蛋白。

【在 t**m 的大作中提到】

: 比如死柱子上了

f*e2019-04-01 07:04

6 楼

不用客气

【在 d*******g 的大作中提到】

: 谢谢！你这么一说，感觉心情好多了~