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求作农杆菌感受态细胞的经验
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求作农杆菌感受态细胞的经验# Biology - 生物学
s*1
1
怎么好多人跑到外面找专业人士报,能退很多呀,这有很多技巧吗?
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F*4
2
本人F1学生,5月20-23要随老板去台湾开会。得到开会通知之前打算回国休假一个月,
并已订好机票,4月22回国,5月26返美。所以现在的计划是我按原计划回国,在国内办
理入台证,然后买国内到台湾的往返机票,最后再从国内返美。不知道这个行程可不可
行,我是以美国学校学生的身份去开会,台湾的邀请函也是发到美国,所以想请教一下
我是否可以以美国学生的身份在国内办理入台证。如果入台证能够办下来,是否就能保
证一定可以出入台湾,会不会在海关因为某些原因而禁止入境。
如果以上计划不可行,我就要考虑改变回国计划,从美国出发去台湾。
谢谢!
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w*o
3
【 以下文字转载自 Boston 讨论区 】
发信人: wokaowokao (GaN), 信区: Boston
标 题: 公司同事过生日,搞party,送什么好呢
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 30 15:15:23 2011, 美东)
同事,男,30来岁,单身,老美
大家说说送啥好
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s*m
4
呵呵
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n*e
5
(1)韭菜地里长了青苔,是啥原因?该怎么去除?刚割了一茬韭菜,还没有施肥料。是
先除青苔还是先施肥?
(2)中国店买的青江菜种子,现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了,是
品种原因还是怎么的?
(3)油菜开始是撒的种子,很密。现在也到5cm高了,可以移植吧?移植会伤的利害吗?
主要是很密,根估计都挨着。
谢谢
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s*d
6
我昨天把键盘上的键拆下来洗,结果A键掉进下水道了。有谁做做好人,寄个A键给我啊?
愿意出钱购买。
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x*8
7
本人比较菜,作GV3101的电转感受态细胞。懒,先过夜小培养5ml LB,在第二日下午扩
大培养又过夜,第三天早上开始作感受态,没有测od值。用10%甘油洗3次,最后重悬。
结果用一质粒验证,电转2kv,25UF,200欧密嘎,4.4ms电击时间。最后发现一个转化
子都没有。不知问题在哪?大家都是怎么作的啊?求指点,谢谢。
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M*s
8
和做饭差不多。
很多人都会作,水平有些差别而已。
还要看时间是否值得。
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i*i
9
关注下,没参加过,关键是没被邀请过,嘿嘿
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B*g
10
没受到呀

【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
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l*d
11
1)潮湿的原因,没有关系,松松土施肥就行了;
2,3)赶快吃了吧,如果不是抗热品种,很快就开花了。

【在 n********e 的大作中提到】
: (1)韭菜地里长了青苔,是啥原因?该怎么去除?刚割了一茬韭菜,还没有施肥料。是
: 先除青苔还是先施肥?
: (2)中国店买的青江菜种子,现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了,是
: 品种原因还是怎么的?
: (3)油菜开始是撒的种子,很密。现在也到5cm高了,可以移植吧?移植会伤的利害吗?
: 主要是很密,根估计都挨着。
: 谢谢

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f*j
12
找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)

啊?

【在 s*******d 的大作中提到】
: 我昨天把键盘上的键拆下来洗,结果A键掉进下水道了。有谁做做好人,寄个A键给我啊?
: 愿意出钱购买。

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x*8
13
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i*t
14
所谓专业人士,很多都瞎弄,全退的都有,最后等audit补交罚款的不少

【在 s****1 的大作中提到】
: 怎么好多人跑到外面找专业人士报,能退很多呀,这有很多技巧吗?
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i*a
15
Group gift
otherwise gift card.
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n*e
17
韭菜根还在地里,怎么翻土啊?可以加石灰改善吗?
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y*n
18
聪明。

【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊?

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g*4
19
靠,现代人!
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M*s
20
可别随便打击一大片哦。
瞎弄的你可以叫他们骗子。
就别提专业人士这几个字了。

【在 i*****t 的大作中提到】
: 所谓专业人士,很多都瞎弄,全退的都有,最后等audit补交罚款的不少
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e*e
21
amazon gc
amount enough to cover your cost

【在 w********o 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Boston 讨论区 】
: 发信人: wokaowokao (GaN), 信区: Boston
: 标 题: 公司同事过生日,搞party,送什么好呢
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 30 15:15:23 2011, 美东)
: 同事,男,30来岁,单身,老美
: 大家说说送啥好

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c*6
22
财主啊!排包子
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L*1
23
松土,不是翻土。

【在 n********e 的大作中提到】
: 韭菜根还在地里,怎么翻土啊?可以加石灰改善吗?
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x*n
24
F12有用啊, 选择启动设备

【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊?

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a*o
25
脓杆菌电转感受态很简单,过夜的菌液,很浓,不需在意OD,用冷水洗5遍,(10%甘油
洗一下),10%甘油重悬。10毫升菌液可以最后重悬在500ul里。电转2.5kv, 400欧,~
7ms. 加1ml培养基,复苏2小时。对于质粒转化,涂1ul就可以得到很多colony.

【在 x******8 的大作中提到】
: 本人比较菜,作GV3101的电转感受态细胞。懒,先过夜小培养5ml LB,在第二日下午扩
: 大培养又过夜,第三天早上开始作感受态,没有测od值。用10%甘油洗3次,最后重悬。
: 结果用一质粒验证,电转2kv,25UF,200欧密嘎,4.4ms电击时间。最后发现一个转化
: 子都没有。不知问题在哪?大家都是怎么作的啊?求指点,谢谢。

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i*t
26
呵呵,看看几年前的帖子就知道了技巧,都是所谓专业帮弄得,F1那点钱+协议,居然
还能弄出窍门,那就是免税的窍门啦,最后audit罚款的一大堆。

【在 M*******s 的大作中提到】
: 可别随便打击一大片哦。
: 瞎弄的你可以叫他们骗子。
: 就别提专业人士这几个字了。

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w*o
27
gc,这么直接啊

【在 i****a 的大作中提到】
: Group gift
: otherwise gift card.

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y*8
29
青苔本身就是绿肥,可以忽略不计直接施肥。
青江菜和油菜都是冬菜,现在不是季节。

【在 n********e 的大作中提到】
: (1)韭菜地里长了青苔,是啥原因?该怎么去除?刚割了一茬韭菜,还没有施肥料。是
: 先除青苔还是先施肥?
: (2)中国店买的青江菜种子,现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了,是
: 品种原因还是怎么的?
: (3)油菜开始是撒的种子,很密。现在也到5cm高了,可以移植吧?移植会伤的利害吗?
: 主要是很密,根估计都挨着。
: 谢谢

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s*d
30
idea不错,我扣了个小键盘上的键下来,反正也用不着小键盘。感谢。

【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊?

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J*n
31
被你电死了吧,转农杆菌超简单
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w*o
32
这玩意太赤裸了吧

【在 e**e 的大作中提到】
: amazon gc
: amount enough to cover your cost

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l*e
33
GX
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n*e
34
xiexie. 那5区农民夏天吃啥青菜啊?

【在 y*****8 的大作中提到】
: 青苔本身就是绿肥,可以忽略不计直接施肥。
: 青江菜和油菜都是冬菜,现在不是季节。

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I*9
35
我这个傻逼dell键盘连个没用的键都找不到
用的最少的是insert...
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h*e
36
>20kb的质粒是不是很难转进去啊? 还有大家是怎么鉴定的?我每次都用酶切,不好判
断,因为本身都有农杆菌本身就自带质粒。谢谢
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s*e
37
gongxi
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y*8
38
夏天应该是种瓜点豆:黄瓜,丝瓜,冬瓜等,四季豆,豇豆,扁豆等,还可以种青椒,
蕃茄,茄子等等。
夏天可种的叶子菜不多,我只知道几种:空心菜,红薯叶,龙须菜(佛手瓜的嫩芽)。

【在 n********e 的大作中提到】
: xiexie. 那5区农民夏天吃啥青菜啊?
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x*8
39
thank you guys! I feel shameful about myself after reading your notes.:)
Anyway, how about the quality of plasmid? Is there some special requirement
for it?
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O*2
40
did not get baozi :(

【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
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l*6
41
不用管青苔,不影响你收韭菜。

【在 n********e 的大作中提到】
: 韭菜根还在地里,怎么翻土啊?可以加石灰改善吗?
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x*8
42
And,
1. how about the difference between different isolates, e.g. LBA4404 or
GV3101 etc.?
2. Can I use the isolate that is grown on LB plate and put in 4 degrees for
2 weeks?
3. Do I need add some antibiotics, such as rafimycin or gentamycin for
GV3101 when I prepare overnight culture?
Thanks a lot.
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r*r
43
???
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i*e
44
油菜快吃!!!!
我家阿姨种错了,结果10cm 开花。
夏菜增加: 木耳菜,南瓜秧子,枸杞菜
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x*8
45
让您见笑了。那我降低电压试试?
您可以具体指点下不?

【在 J****n 的大作中提到】
: 被你电死了吧,转农杆菌超简单
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z*0
46
GX
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x*8
47
我的11k多,是否也是原因?找个小的试验下。
我觉得鉴定的话是否可以作pcr?

【在 h***e 的大作中提到】
: >20kb的质粒是不是很难转进去啊? 还有大家是怎么鉴定的?我每次都用酶切,不好判
: 断,因为本身都有农杆菌本身就自带质粒。谢谢

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o*e
48
when can I get Baozi?

【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
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h*e
49
小的很好转的 一般只要抗性有就OK,最好抗生素浓度调高点。PCR也可以的,但是只能
检测部分序列。不过我感觉还是酶切放心,但就是容易降解,带很难分辨。

【在 x******8 的大作中提到】
: 我的11k多,是否也是原因?找个小的试验下。
: 我觉得鉴定的话是否可以作pcr?

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y*n
50
没收到啊?

【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
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c*7
51
难道我最土么?我咋记得OD一定要测,很关键
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H*S
52
pai
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x*8
53
化学感受态成功了,呵呵
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o*x
54
gx
avatar
x*8
55
自己上来更新下。
我重新设置了对照,使用了一个小的质粒7k左右,验证我的感受态细胞是没有问题的,
效率还可以;但是我的目的质粒是11k多点,这样的话,就很难转进去了。同一批次的
感受态,转对照没有任何问题,也就是大家说的'转农杆菌很容易‘的说法。但是我的
大质粒是很难转进去,即使转了有几个克隆长出来,效率是很低了。大家展开说说转大
质粒有什么方法吗?楼上的一个说转20k的,你作的如何?
avatar
o*y
56
avatar
h*e
57
>20k的效率很低,长很多的克隆有可能不对
反正我转的都不怎么好 不好验证对不对
avatar
w*4
58
pai baozi
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