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Co-IP control question# Biology - 生物学
y*o
1
哎,真是倒霉,早上接到银行电话,说有几笔可疑的刷卡,一查,果然被盗用了!
全是Skype,National express的,26号开始的到今天早上凌晨,短短3天刷了十几笔,
加起来差不多500块钱,和银行客服联系了,说是已经mark成了fraund,要我等48个小
时再打电话问。。。。
请问有人知道后续流程是怎样的吗?如果BOA不cancel,难道最后该我自己来买单吗?
请了解的同学指教,谢谢了!!
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D*r
2
【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: Dower (Historian), 信区: WaterWorld
标 题: 换个话题算了:2010年中国电影票房城市40强
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Aug 6 04:08:23 2011, 美东)
2010全国各城市电影票房排名
名次 城市 票房总收入:亿 观影人次:百万 全国百强影院数量
1 北京 11.97 2923 15
2 上海 9.75 2242 12
3 深圳 5.13 1232 10
4 广州 5.07 1141 7
5 成都 4.99 1436 6
6 武汉 3.6 1093 4
7 重庆 3.04 906 4
8 杭州 2.9 780 4
9 西安 2.6 682 3
10 南京 2.3 717 4
11 沈阳 2 588 2
12 天津 1.83 508 3
13 苏州 1.66 453 2
14 大连 1.51 412 3
15 郑州 1.45 515 2
16 长沙 1.37 412 3
17 昆明 1.36 386 1
18 哈尔滨 1.35 412 2
19 佛山 1.3 424 0
20 长春 1.27 349 2
21 宁波 1.23 362 1
22 青岛 1.18 375 1
23 东莞 1.08 299 1
24 温州 1.01 236 1
25 南昌 1 303 1
26 福州 0.98 266 1
27 乌市 0.9 345 1
28 无锡 0.9 249 1
29 常州 0.9 290 1
30 济南 0.89 325 1
31 合肥 0.81 245 0
32 太原 0.7 264 0
33 南宁 0.64 188 1
34 贵阳 0.6 188 0
35 海口 0.51 182 0
36 石家庄 0.44 154 0
37 兰州 0.43 135 0
38 银川 0.41 135 0
39 株洲 0.33 123 0
40 包头 0.22 73 0
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X*7
3
自己看人数。大家元宵节快乐,情人节愉快。。。。。。
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d*e
4
想看看蛋白A是否和蛋白B 结合,蛋白A有个myc tag, 蛋白B没有任何tag. 所以IP的时候
就是用anti-myc (9E10)来 pull down蛋白complex,然后用anti-B抗体做WB。
我的negative control 是只表达B蛋白的细胞(没有A蛋白转染表达),这个negative
control 在WB上看不到B,也就是说B和anti-myc抗体或agarose beads 没有 non-speci
fic interaction. 我觉得这个阴性对照是合理的。
可是老板今天非要说这是个 bullshit negative control, you should use mutant pr
oteins (known for no interaction with each other) as negative control.
我听了之后,真TMD要发疯了,这两个蛋白连是否有interaction的确凿证据都没有,我
怎么知道要突变哪里才能导致这A和B没有interaction?
大家说说我的negative control合理吗?老板的问题是不是很白痴?
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C*n
5
信用卡。有$0 fraud liability政策。
这么多叹号干啥。
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D*r
6
人次的单位可能不对

【在 D***r 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
: 发信人: Dower (Historian), 信区: WaterWorld
: 标 题: 换个话题算了:2010年中国电影票房城市40强
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sat Aug 6 04:08:23 2011, 美东)
: 2010全国各城市电影票房排名
: 名次 城市 票房总收入:亿 观影人次:百万 全国百强影院数量
: 1 北京 11.97 2923 15
: 2 上海 9.75 2242 12
: 3 深圳 5.13 1232 10
: 4 广州 5.07 1141 7

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p*e
7
沙发吃双黄
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l*a
8
你的control合理
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f*r
9
别担心哈,打电话去,BOA信用卡benefits不怎么样,客服还是不错的。
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f*l
10
应该是万,不是百万。

【在 D***r 的大作中提到】
: 人次的单位可能不对
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s*r
11
赶上了

【在 X******7 的大作中提到】
: 自己看人数。大家元宵节快乐,情人节愉快。。。。。。
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d*e
12
这么说我老板的问题很白痴了?
明天找他继续理论。真开始鄙视it了

【在 l*****a 的大作中提到】
: 你的control合理
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s*r
13
好快啊, 谢谢

【在 s*********r 的大作中提到】
: 赶上了
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r*m
14
你老板有病。。。
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p*e
15
小气鬼
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c*r
16
你老板这个显然胡扯。
但是你的control也是不够的。
better control是表达myc tag和B,这样可以排除B和myc tag有interaction。
当然还有什么Isotype control啥的,我想你应该已经做了。

时候
negative
speci
pr

【在 d********e 的大作中提到】
: 想看看蛋白A是否和蛋白B 结合,蛋白A有个myc tag, 蛋白B没有任何tag. 所以IP的时候
: 就是用anti-myc (9E10)来 pull down蛋白complex,然后用anti-B抗体做WB。
: 我的negative control 是只表达B蛋白的细胞(没有A蛋白转染表达),这个negative
: control 在WB上看不到B,也就是说B和anti-myc抗体或agarose beads 没有 non-speci
: fic interaction. 我觉得这个阴性对照是合理的。
: 可是老板今天非要说这是个 bullshit negative control, you should use mutant pr
: oteins (known for no interaction with each other) as negative control.
: 我听了之后,真TMD要发疯了,这两个蛋白连是否有interaction的确凿证据都没有,我
: 怎么知道要突变哪里才能导致这A和B没有interaction?
: 大家说说我的negative control合理吗?老板的问题是不是很白痴?

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s*r
17
你大方?
那你给我发情人家安慰包吧, 要双簧的, 恩

【在 p******e 的大作中提到】
: 小气鬼
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d*e
18
myc tag is so small, and I think it's hard to see it on WB.
I didn't do isotype control, maybe I should. thanks for all the suggestions.

【在 c******r 的大作中提到】
: 你老板这个显然胡扯。
: 但是你的control也是不够的。
: better control是表达myc tag和B,这样可以排除B和myc tag有interaction。
: 当然还有什么Isotype control啥的,我想你应该已经做了。
:
: 时候
: negative
: speci
: pr

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p*e
19
我没包子

【在 s*********r 的大作中提到】
: 你大方?
: 那你给我发情人家安慰包吧, 要双簧的, 恩

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c*r
20
嗯?
我是说在negative control里面表达myc tag和B,然后pull down myc,wb for B。这
样你的negative和AB同时表达更接近,比仅仅没有A做negative control可能更好一点
。你觉得怎么样?

suggestions.

【在 d********e 的大作中提到】
: myc tag is so small, and I think it's hard to see it on WB.
: I didn't do isotype control, maybe I should. thanks for all the suggestions.

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X*7
21
=_=,我这叫会过日子。

【在 p******e 的大作中提到】
: 小气鬼
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d*e
22
that makes sense. I was thinking of probing myc after WB for B on the same
membrane.

【在 c******r 的大作中提到】
: 嗯?
: 我是说在negative control里面表达myc tag和B,然后pull down myc,wb for B。这
: 样你的negative和AB同时表达更接近,比仅仅没有A做negative control可能更好一点
: 。你觉得怎么样?
:
: suggestions.

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X*7
23
那是必须滴

【在 s*********r 的大作中提到】
: 好快啊, 谢谢
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d*u
24
其实最好的control应该是在负对照里加一个有myc tag的蛋白比如GFP啊啥的。最好要
和你的sample是相同的质粒只不过蛋白不同,然后做IP。保证能封住所有reviewer的嘴
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s*r
25
两个双簧还是有的,
不给的话,你就是小气鬼,恩

【在 p******e 的大作中提到】
: 我没包子
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c*r
26
嗯,这个确实更好。但是用GFP有个问题,GFP非常稳定,一般表达量会比较高,不知道
会不会false positive。
你这个idea是对的,不过找什么可能还需要考虑一下。

【在 d****u 的大作中提到】
: 其实最好的control应该是在负对照里加一个有myc tag的蛋白比如GFP啊啥的。最好要
: 和你的sample是相同的质粒只不过蛋白不同,然后做IP。保证能封住所有reviewer的嘴

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p*e
27
去发很麻烦。我只是懒虫。

【在 s*********r 的大作中提到】
: 两个双簧还是有的,
: 不给的话,你就是小气鬼,恩

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d*u
28
扔个luciferase基因吧,一般的哺乳动物细胞里也没有底物。

【在 c******r 的大作中提到】
: 嗯,这个确实更好。但是用GFP有个问题,GFP非常稳定,一般表达量会比较高,不知道
: 会不会false positive。
: 你这个idea是对的,不过找什么可能还需要考虑一下。

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s*r
29
小气鬼。。。。

【在 p******e 的大作中提到】
: 去发很麻烦。我只是懒虫。
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g*5
30
you could try express myc-A, AND Aliquot cell lysate then use myc-antibody
or corresponding igG as control?

时候
negative
speci
pr

【在 d********e 的大作中提到】
: 想看看蛋白A是否和蛋白B 结合,蛋白A有个myc tag, 蛋白B没有任何tag. 所以IP的时候
: 就是用anti-myc (9E10)来 pull down蛋白complex,然后用anti-B抗体做WB。
: 我的negative control 是只表达B蛋白的细胞(没有A蛋白转染表达),这个negative
: control 在WB上看不到B,也就是说B和anti-myc抗体或agarose beads 没有 non-speci
: fic interaction. 我觉得这个阴性对照是合理的。
: 可是老板今天非要说这是个 bullshit negative control, you should use mutant pr
: oteins (known for no interaction with each other) as negative control.
: 我听了之后,真TMD要发疯了,这两个蛋白连是否有interaction的确凿证据都没有,我
: 怎么知道要突变哪里才能导致这A和B没有interaction?
: 大家说说我的negative control合理吗?老板的问题是不是很白痴?

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i*i
31
快乐

【在 X******7 的大作中提到】
: 自己看人数。大家元宵节快乐,情人节愉快。。。。。。
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V*8
32
有包子必排!
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Z*e
33
今天还有包子没?

【在 X******7 的大作中提到】
: 自己看人数。大家元宵节快乐,情人节愉快。。。。。。
avatar
X*7
34
有,发完为止。

【在 Z*****e 的大作中提到】
: 今天还有包子没?
avatar
w*r
35
re

【在 X******7 的大作中提到】
: 自己看人数。大家元宵节快乐,情人节愉快。。。。。。
avatar
D*1
36
第17楼:)领包子
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x*g
37
谢谢、谢谢! 排包子!

【在 X******7 的大作中提到】
: 自己看人数。大家元宵节快乐,情人节愉快。。。。。。
avatar
b*l
38
小丫真好!

【在 X******7 的大作中提到】
: 自己看人数。大家元宵节快乐,情人节愉快。。。。。。
avatar
n*s
39
炖了牛肉,还可以灌水,还有包子吃。
avatar
t*r
40
没包子也祝福快乐!
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j*5
41
re
avatar
D*1
42
没收到xiaoya77的包子吧
avatar
X*7
43
昨天没上线,不好意思哦。晚了点。

【在 D*********1 的大作中提到】
: 没收到xiaoya77的包子吧
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X*7
44
还有8个包子。
avatar
g*i
45
严重需要包子,请发,哈哈,xiexie
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j*u
46
哈哈,赞。。。

【在 X******7 的大作中提到】
: 自己看人数。大家元宵节快乐,情人节愉快。。。。。。
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