l*3
2 楼
250ul 到 500ul PBS重悬细胞后,用1% formaldehyde固定,发现立即结团。各位大神
觉得是什么问题?
也有试过直接在dish上固定细胞,然后刮下来,似乎大部分都是结团的细胞。好苦恼啊
!
觉得是什么问题?
也有试过直接在dish上固定细胞,然后刮下来,似乎大部分都是结团的细胞。好苦恼啊
!
H*N
4 楼
结团为什么不能做?器官组织都能做
B*e
5 楼
这样压迫着肉肉,估计会有后遗症?
U*s
8 楼
the cell density is too high. you may try the formaldehyde crosslink in 10ml
growth medium (w/o serum; 1% formaldehyde) in falcon tubes.
If you grow adherent cells in monolayers, it's better to perform the
crosslink in petri dishes.
The basic principle is that: you want to take a snapshot of all kinds of
interactions with the minimum disturbance to the cells.
【在 l******3 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
:
: 我前几次做都没有这种问题,近几次出现这种情况。所以不知道是不是做的什么地方不
: 对。
: 而且一般protocol上说过度crosslink会导致细胞结团,影响超生shear chromatin。而
: 我加入formaldehyde一颠倒混匀就出现结团。
growth medium (w/o serum; 1% formaldehyde) in falcon tubes.
If you grow adherent cells in monolayers, it's better to perform the
crosslink in petri dishes.
The basic principle is that: you want to take a snapshot of all kinds of
interactions with the minimum disturbance to the cells.
【在 l******3 的大作中提到】
![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
:
: 我前几次做都没有这种问题,近几次出现这种情况。所以不知道是不是做的什么地方不
: 对。
: 而且一般protocol上说过度crosslink会导致细胞结团,影响超生shear chromatin。而
: 我加入formaldehyde一颠倒混匀就出现结团。
l*3
10 楼
10ml
Thanks so much. Your information is really helpful. I will give a try.The
reason I initially tried fixing cells in eppendorf tubes with such a high
density was because I followed the protocol by Covarisinc (the
ultrasonicator I am using).
【在 U**s 的大作中提到】
![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: the cell density is too high. you may try the formaldehyde crosslink in 10ml
: growth medium (w/o serum; 1% formaldehyde) in falcon tubes.
: If you grow adherent cells in monolayers, it's better to perform the
: crosslink in petri dishes.
: The basic principle is that: you want to take a snapshot of all kinds of
: interactions with the minimum disturbance to the cells.
x*s
11 楼
ft我真的量了一下,我大腿比她粗
D*r
12 楼
以前都是在dish上直接固定,效果也还行
h*n
14 楼
我原来也遇到过类似问题,基本上就是细胞太多,而且贴壁细胞消化以后可能膜不完整
,更容易成团。有时候固定时间太长也会成团。
,更容易成团。有时候固定时间太长也会成团。
f*e
20 楼
大部分人不都是dish上直接固定嘛,就是损失会大一点,结块就是细胞太密然后酶消化
造成的呗
造成的呗
h*i
62 楼
男腿吗
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