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急问SDSPAGE胶查看蛋白纯度上样量多少?
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急问SDSPAGE胶查看蛋白纯度上样量多少?# Biology - 生物学
p*g
1
前几天,你大概在朋友圈里分享过这么一件狗血的事件。
一张手写的信上,有人称:今天是前女友梁诗雅结婚的日子,因为之前自己穷,女朋友
和自己分手了,之前他和女友一起存了几百个比特币,现在拿出39个比特币(约208万
元)买了全国100个城市微信号的头条位置,祝福她新婚快乐。而另一张截图则是若干
个微信公号齐刷刷的标题文章《梁诗雅,我花208万祝你新婚快乐!》
又是虐恋,又是狗血,又是暴发户式的一掷千金,集八卦和咸鱼翻身于一体。你想不想
转发一下呢,和朋友圈里的朋友们乐呵一个呢?其实,这就是一个币圈的炒作,既吹大
了比特币的泡沫,又炒红了公司的微信账号。
问题在于,炒作是如此明显,甚至很多已经看穿了问题的人,还是愿意分享这则无厘头
的故事。我们为什么热衷于在网上传播假消息呢?
3月9日出版的新一期《科学》杂志上,麻省理工学院的三位研究者发表了一则迄今为止
最大规模、最系统性的假新闻传播研究。他们分析了过去12年间的12.6万则新闻的传播
,发现:假新闻跑得比真新闻更快、更深、更广!
按他们的研究:真新闻很少能被超过1000人转发,但排名前1%的假新闻却可以传播给一
千到十万人。从时间上来看,要传播到1500个人,真新闻需要花的时间是假新闻的6倍
之多。被人们转发的假新闻有一个明显的特质:新鲜。
简单地说,假消息比真消息更好玩,从而形成了结构性的病毒式传播力(structural
virality)。假消息比真新闻更有戏剧冲突、更狗血、更助于提升传播者的自我成就感。
去年12月,有中国团队在泰国旅游时,一名带队导游被大象踩死。当时就有张传得铺天
盖地的截屏显示:是中国游客扯象尾巴激怒大象。之后媒体辟谣,并不存在扯尾巴的事
情,相反是导游奋不顾身地救人,以身殉职。但是,正能量的真相被公布之后,新闻反
而失去了传播的热度。这就是典型的“假新闻比真新闻的传播力更强”:因为它更有戏
剧性,更能激发传播者的传播兴趣。
进入社交媒体时代之后,内容的生成不再是单向度地依赖于专业的写作者(作家、专业
媒体)。相反,社交化的信息传播方式是对读者形成“强赋权”,将由读者的好恶来决
定内容的转发、生成以及影响范围。《社交经济》一书的作者提出了一个有意思的话题
:为什么在网络社交时代,我们乐于“把时间花在无偿劳动上”?比如说转发朋友圈、
发微博之类的。因为网络构建了另一个真实的世界,它重新定义了财富,财富不仅是指
对于财物的占有,社交也成了财富的重要组成。
所以,我们在社交平台上更加容易传播那些新奇、古怪,更能提升我们社交的内容。而
网络营销、流量经济也正是建立在了我们“无偿传播”这个基础上。流量的设计者必须
保证事实的可传播性,于是就要把本不算激烈冲突的故事,讲得惊涛骇浪、狗血滔天,
让受众去愤怒、去欢呼、去鼓掌、去传播。
去年10月的万圣节期间,有自媒体曝出一段狗血事件:上海一家全家便利店里,几个父
母带着孩子去讨糖,结果变成孩子在货架上拿糖果、拿巧克力,逼着便利店的工作人员
买单!然后,网上一片骂熊孩子的声音。但是,据事后的调查,就是社区便利店的营业
员和孩子们关系不错,主动为孩子买的单,没有狗血“家长纵容孩子抢便利店”。传闻
是很容易走形的,核心事实会被不断加工、添油加醋,强化其可传播性,从而逐渐模糊
掉事情的本质。
再比如,你可能看过,甚至传播过这么一个“故事”:轿车误入绿化带开不出来,车主
情急之下点了10份美团外卖,叫来10位外卖小哥协力把车抬出,然后加一句点评“思路
决定出路”。其实,这本是一则正常的暖闻,恰好有美团外卖小哥路过现场,主动合力
推车,被附近路人拍下并发至某短视频网站,瞬间就传遍网络。但是,传播者并不在乎
图片背后的事实是什么样子的,而是享受在传播过程中得到的点赞和互动。
我们传播消息,不再是为了传播真相,而是为了获得自我成就感。这成为可怕的“后真
相时代”的心理基础。新闻真实性原则、信源可核实原则等人类几千年来积累下来的传
播规范,在社交时代正在被消解。
这几天,你大概在朋友圈还传播过这么一个“故事”《老干妈和马应龙是如何控制美国
监狱的?》,故事言之凿凿地说,老干妈辣酱、马应龙痔疮膏成为了美国监狱黑帮的抢
手货,甚至称加利福尼亚工人詹姆斯,因为专卖老干妈辣酱,成为加州各监狱的教父。
其实,文章中没有一句提到可靠的信源,也没有对应的英文报道、截屏,这本来就是写
手的游戏之作。但是这种虚构写作,并不妨碍大家嗑着瓜子在朋友圈里传播。
这可以看作是社交时代对待内容的“奶嘴需求”:我并不在乎信息的真假,只是需要有
这么一个安慰剂去传播,让大家为我点赞。资讯的功能正在从了解世界的渠道,变成了
自我心理投射、情感的宣泄孔道。
这是一个危险的倾向,至少我们能做到,在转发“新闻”之前,认真一些,否则我们会
被段子、谣言组成的虚空世界所淹没。
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m*e
2
【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
发信人: matrice (matrice), 信区: JobHunting
标 题: 大家说说看平时怎样锻炼才能变得professional?
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 13 22:46:33 2010, 美东)
不管是面试还是将来工作,都需要给别人留下非常professional的印象。但是到底什么
是professional?都包含哪些方面?怎样培养professional career?倒还真的并没有
完全理解。比如很多人都说要表现的很sharp,strong communication ability,还要
be confident,这些到底通过什么表现出来,是性格决定的还是能通过后天培养出来,
各位有没有什么看法?
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f*l
3
at Amazon.com
original price is $2.99
I haven't read the book, but free is always good.
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m*m
4
想看看提纯后的蛋白里有没有杂蛋白,请问10孔12%的SDSPAGE胶,每孔应该上样多少ug
呢?
(我知道一个孔最多上20ul,这样的话我是把蛋白稀释一点成20ul后上样好呢?还是不
要太稀释上5-10ul就好了?)先告诉我上多少 UG 蛋白吧,目的是看纯度,是不是该多
上点,但是又不希望太多,难看又影响分辨率还不容易分开。谢谢指教!
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f*g
5
俺个人理解的professional和你列的几点,除了communication粘点边,其他都不一样。
俺的理解是有一套成型的工作方法,对待工作认真负责,注重全局和细节问题,处理问
题稳重,但又不失灵活,善于teamwork,认真听取同事上级客户意见,合理求同存异,
处理矛盾,及时汇报总结,不突出表现个人英雄主义,重事情而非感情。
或者反过来理解,平时说某人不professional,往往指该家伙不循轨蹈矩,主观固执,
难以沟通合作。
主要是后天培养的,工作经验长了,解决类似问题多了,自然比较明白什么样的方式是
妥当的,相对较好,别人也容易接受的。

【在 m*****e 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
: 发信人: matrice (matrice), 信区: JobHunting
: 标 题: 大家说说看平时怎样锻炼才能变得professional?
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 13 22:46:33 2010, 美东)
: 不管是面试还是将来工作,都需要给别人留下非常professional的印象。但是到底什么
: 是professional?都包含哪些方面?怎样培养professional career?倒还真的并没有
: 完全理解。比如很多人都说要表现的很sharp,strong communication ability,还要
: be confident,这些到底通过什么表现出来,是性格决定的还是能通过后天培养出来,
: 各位有没有什么看法?

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g*l
6
浪费的时间也是成本

【在 f********l 的大作中提到】
: at Amazon.com
: original price is $2.99
: I haven't read the book, but free is always good.

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h*y
7
loading volume should depend on the thickness of the gel, right?

ug

【在 m****m 的大作中提到】
: 想看看提纯后的蛋白里有没有杂蛋白,请问10孔12%的SDSPAGE胶,每孔应该上样多少ug
: 呢?
: (我知道一个孔最多上20ul,这样的话我是把蛋白稀释一点成20ul后上样好呢?还是不
: 要太稀释上5-10ul就好了?)先告诉我上多少 UG 蛋白吧,目的是看纯度,是不是该多
: 上点,但是又不希望太多,难看又影响分辨率还不容易分开。谢谢指教!

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A*0
8
very good. Thanks.

样。

【在 f*****g 的大作中提到】
: 俺个人理解的professional和你列的几点,除了communication粘点边,其他都不一样。
: 俺的理解是有一套成型的工作方法,对待工作认真负责,注重全局和细节问题,处理问
: 题稳重,但又不失灵活,善于teamwork,认真听取同事上级客户意见,合理求同存异,
: 处理矛盾,及时汇报总结,不突出表现个人英雄主义,重事情而非感情。
: 或者反过来理解,平时说某人不professional,往往指该家伙不循轨蹈矩,主观固执,
: 难以沟通合作。
: 主要是后天培养的,工作经验长了,解决类似问题多了,自然比较明白什么样的方式是
: 妥当的,相对较好,别人也容易接受的。

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e*s
9
一般是5ug左右就好了,和体积没啥关系。

ug

【在 m****m 的大作中提到】
: 想看看提纯后的蛋白里有没有杂蛋白,请问10孔12%的SDSPAGE胶,每孔应该上样多少ug
: 呢?
: (我知道一个孔最多上20ul,这样的话我是把蛋白稀释一点成20ul后上样好呢?还是不
: 要太稀释上5-10ul就好了?)先告诉我上多少 UG 蛋白吧,目的是看纯度,是不是该多
: 上点,但是又不希望太多,难看又影响分辨率还不容易分开。谢谢指教!

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s*m
10
为什么要PROFESSINONAL呢?
我发现工作里,真混得舒服爬的快的,没PROFESSIONAL的。
PROFESSIONAL 适用于最底层打工做苦力的老黄牛。

【在 m*****e 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
: 发信人: matrice (matrice), 信区: JobHunting
: 标 题: 大家说说看平时怎样锻炼才能变得professional?
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 13 22:46:33 2010, 美东)
: 不管是面试还是将来工作,都需要给别人留下非常professional的印象。但是到底什么
: 是professional?都包含哪些方面?怎样培养professional career?倒还真的并没有
: 完全理解。比如很多人都说要表现的很sharp,strong communication ability,还要
: be confident,这些到底通过什么表现出来,是性格决定的还是能通过后天培养出来,
: 各位有没有什么看法?

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s*l
11
这问题太tricky了,我以前都load好多(20ug),可以看到很多杂拌,但是主band太明显了(
已经饱和了),结果被committee批评说提蛋白水平太差,蛋白太不纯.
结果我就老实了,按照paper上别人load的强度,同样的sample,我load 1ug后就剩下1条
主band,然后大家都很开心的说蛋白很纯一条带. 所以我觉得最好做个梯度, 从0.5ug到
20ug, 自己清楚一个purity,给别人show另一个purity.

ug

【在 m****m 的大作中提到】
: 想看看提纯后的蛋白里有没有杂蛋白,请问10孔12%的SDSPAGE胶,每孔应该上样多少ug
: 呢?
: (我知道一个孔最多上20ul,这样的话我是把蛋白稀释一点成20ul后上样好呢?还是不
: 要太稀释上5-10ul就好了?)先告诉我上多少 UG 蛋白吧,目的是看纯度,是不是该多
: 上点,但是又不希望太多,难看又影响分辨率还不容易分开。谢谢指教!

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f*s
12
恩,我也想知道怎么锻炼自己。比如至少在表面上,该怎么表现,我觉得这根行为,说
话方式和态度都有关系。不过好像感觉确实像楼上一位说的,好多那些位置比较高的人
,给人的感觉也不是那么“中规中矩”的。只是感觉他们可以随心所欲的变化自己的方
式,有时候觉得,是不是所谓professional就是把戏演好而已 =)
不过倒是也觉得那些爬的快又高的人,大多数本身都是所谓的risk taker,这种性格的
人,大多数时候都可以演的很好,但是有些时候还是会原形毕露的,呵呵,大概就给人
印象深刻觉得他们也不是那么professional 了。

【在 m*****e 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
: 发信人: matrice (matrice), 信区: JobHunting
: 标 题: 大家说说看平时怎样锻炼才能变得professional?
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 13 22:46:33 2010, 美东)
: 不管是面试还是将来工作,都需要给别人留下非常professional的印象。但是到底什么
: 是professional?都包含哪些方面?怎样培养professional career?倒还真的并没有
: 完全理解。比如很多人都说要表现的很sharp,strong communication ability,还要
: be confident,这些到底通过什么表现出来,是性格决定的还是能通过后天培养出来,
: 各位有没有什么看法?

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m*m
13
说得有理。但是我现在得对自己负责,我提纯了要测结构的,所以一定要看到杂的是不
是多。但是不是总是不可能100%纯呢?

了(

【在 s****l 的大作中提到】
: 这问题太tricky了,我以前都load好多(20ug),可以看到很多杂拌,但是主band太明显了(
: 已经饱和了),结果被committee批评说提蛋白水平太差,蛋白太不纯.
: 结果我就老实了,按照paper上别人load的强度,同样的sample,我load 1ug后就剩下1条
: 主band,然后大家都很开心的说蛋白很纯一条带. 所以我觉得最好做个梯度, 从0.5ug到
: 20ug, 自己清楚一个purity,给别人show另一个purity.
:
: ug

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j*i
14
kiss your boss's ass, that's the highest level of professional.
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W*e
15
你这种情况上样多点没啥坏处啊, 难道担心你的蛋白和杂蛋白在胶上分不开?

【在 m****m 的大作中提到】
: 说得有理。但是我现在得对自己负责,我提纯了要测结构的,所以一定要看到杂的是不
: 是多。但是不是总是不可能100%纯呢?
:
: 了(

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p*i
16
貌似可以切膠再去測MS?

【在 m****m 的大作中提到】
: 说得有理。但是我现在得对自己负责,我提纯了要测结构的,所以一定要看到杂的是不
: 是多。但是不是总是不可能100%纯呢?
:
: 了(

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a*a
17
initial screening 90% purity就可以
一般commassie blue stain肉眼能看到的量大概是0.5ug
换句话说你至少要load 5ug以上
你送去给人做结构的样品一般至少要浓缩到10mg/ml以上
跑1ul样品就可以了,根本不用考虑上样体积

【在 m****m 的大作中提到】
: 说得有理。但是我现在得对自己负责,我提纯了要测结构的,所以一定要看到杂的是不
: 是多。但是不是总是不可能100%纯呢?
:
: 了(

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m*m
18
可以,但是LAB MANAGER不同意,说耗费用

【在 p******i 的大作中提到】
: 貌似可以切膠再去測MS?
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n*e
19
晶体结构?还是光谱之类的?蛋白哪有100%纯的,多load点肯定会看到杂带,即使少
load,也可以用不同的染色法看到杂带,比如silver stain.

【在 m****m 的大作中提到】
: 说得有理。但是我现在得对自己负责,我提纯了要测结构的,所以一定要看到杂的是不
: 是多。但是不是总是不可能100%纯呢?
:
: 了(

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j*n
20
如果对蛋白的纯度还没准确测量,那就分别上5、10、15(加了loading buffer)后的
,大致估一下,下次照此办理……
细胞裂解的上清,杂蛋白比较多,可以稍微少上点样;经过凝胶柱或者离子交换提纯的
,要少上些……
跟做菜一样,放多少盐,你自己嘴巴尝尝就有数了……
当然,你得先会做菜。
你问的好几个蛋白分离,检查的问题都很入门啊,不是入错了行吧……
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