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Co-IP control question

Co-IP control question# Biology - 生物学

y*o2010-10-19 07:10

1 楼

哎，真是倒霉，早上接到银行电话，说有几笔可疑的刷卡，一查，果然被盗用了！
全是Skype，National express的，26号开始的到今天早上凌晨，短短3天刷了十几笔，
加起来差不多500块钱，和银行客服联系了，说是已经mark成了fraund，要我等48个小
时再打电话问。。。。
请问有人知道后续流程是怎样的吗？如果BOA不cancel，难道最后该我自己来买单吗？
请了解的同学指教，谢谢了！！

D*r2010-10-19 07:10

2 楼

【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
发信人: Dower (Historian), 信区: WaterWorld
标题: 换个话题算了：2010年中国电影票房城市40强
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Aug 6 04:08:23 2011, 美东)
2010全国各城市电影票房排名
名次城市票房总收入：亿观影人次：百万全国百强影院数量
1 北京 11.97 2923 15
2 上海 9.75 2242 12
3 深圳 5.13 1232 10
4 广州 5.07 1141 7
5 成都 4.99 1436 6
6 武汉 3.6 1093 4
7 重庆 3.04 906 4
8 杭州 2.9 780 4
9 西安 2.6 682 3
10 南京 2.3 717 4
11 沈阳 2 588 2
12 天津 1.83 508 3
13 苏州 1.66 453 2
14 大连 1.51 412 3
15 郑州 1.45 515 2
16 长沙 1.37 412 3
17 昆明 1.36 386 1
18 哈尔滨 1.35 412 2
19 佛山 1.3 424 0
20 长春 1.27 349 2
21 宁波 1.23 362 1
22 青岛 1.18 375 1
23 东莞 1.08 299 1
24 温州 1.01 236 1
25 南昌 1 303 1
26 福州 0.98 266 1
27 乌市 0.9 345 1
28 无锡 0.9 249 1
29 常州 0.9 290 1
30 济南 0.89 325 1
31 合肥 0.81 245 0
32 太原 0.7 264 0
33 南宁 0.64 188 1
34 贵阳 0.6 188 0
35 海口 0.51 182 0
36 石家庄 0.44 154 0
37 兰州 0.43 135 0
38 银川 0.41 135 0
39 株洲 0.33 123 0
40 包头 0.22 73 0

X*72010-10-19 07:10

3 楼

自己看人数。大家元宵节快乐，情人节愉快。。。。。。

d*e2010-10-19 07:10

4 楼

想看看蛋白A是否和蛋白B 结合，蛋白A有个myc tag, 蛋白B没有任何tag. 所以IP的时候
就是用anti-myc (9E10)来 pull down蛋白complex，然后用anti-B抗体做WB。
我的negative control 是只表达B蛋白的细胞（没有A蛋白转染表达），这个negative
control 在WB上看不到B，也就是说B和anti-myc抗体或agarose beads 没有 non-speci
fic interaction. 我觉得这个阴性对照是合理的。
可是老板今天非要说这是个 bullshit negative control, you should use mutant pr
oteins (known for no interaction with each other) as negative control.
我听了之后，真TMD要发疯了，这两个蛋白连是否有interaction的确凿证据都没有，我
怎么知道要突变哪里才能导致这A和B没有interaction?
大家说说我的negative control合理吗？老板的问题是不是很白痴？

C*n2010-10-19 07:10

5 楼

信用卡。有$0 fraud liability政策。
这么多叹号干啥。

D*r2010-10-19 07:10

6 楼

人次的单位可能不对

【在 D***r 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: Dower (Historian), 信区: WaterWorld
: 标题: 换个话题算了：2010年中国电影票房城市40强
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sat Aug 6 04:08:23 2011, 美东)
: 2010全国各城市电影票房排名
: 名次城市票房总收入：亿观影人次：百万全国百强影院数量
: 1 北京 11.97 2923 15
: 2 上海 9.75 2242 12
: 3 深圳 5.13 1232 10
: 4 广州 5.07 1141 7

p*e2010-10-19 07:10

7 楼

沙发吃双黄

l*a2010-10-19 07:10

8 楼

你的ｃｏｎｔｒｏｌ合理

f*r2010-10-19 07:10

9 楼

别担心哈，打电话去，BOA信用卡benefits不怎么样，客服还是不错的。

f*l2010-10-19 07:10

10 楼

应该是万，不是百万。

【在 D***r 的大作中提到】

: 人次的单位可能不对

s*r2010-10-19 07:10

11 楼

赶上了

【在 X******7 的大作中提到】

: 自己看人数。大家元宵节快乐，情人节愉快。。。。。。

d*e2010-10-19 07:10

12 楼

这么说我老板的问题很白痴了？
明天找他继续理论。真开始鄙视it了

【在 l*****a 的大作中提到】

: 你的ｃｏｎｔｒｏｌ合理

s*r2010-10-19 07:10

13 楼

好快啊，谢谢

【在 s*********r 的大作中提到】

: 赶上了

r*m2010-10-19 07:10

14 楼

你老板有病。。。

p*e2010-10-19 07:10

15 楼

小气鬼

c*r2010-10-19 07:10

16 楼

你老板这个显然胡扯。
但是你的control也是不够的。
better control是表达myc tag和B，这样可以排除B和myc tag有interaction。
当然还有什么Isotype control啥的，我想你应该已经做了。

时候
negative
speci
pr

【在 d********e 的大作中提到】

: 想看看蛋白A是否和蛋白B 结合，蛋白A有个myc tag, 蛋白B没有任何tag. 所以IP的时候
: 就是用anti-myc (9E10)来 pull down蛋白complex，然后用anti-B抗体做WB。
: 我的negative control 是只表达B蛋白的细胞（没有A蛋白转染表达），这个negative
: control 在WB上看不到B，也就是说B和anti-myc抗体或agarose beads 没有 non-speci
: fic interaction. 我觉得这个阴性对照是合理的。
: 可是老板今天非要说这是个 bullshit negative control, you should use mutant pr
: oteins (known for no interaction with each other) as negative control.
: 我听了之后，真TMD要发疯了，这两个蛋白连是否有interaction的确凿证据都没有，我
: 怎么知道要突变哪里才能导致这A和B没有interaction?
: 大家说说我的negative control合理吗？老板的问题是不是很白痴？

s*r2010-10-19 07:10

17 楼

你大方？
那你给我发情人家安慰包吧，要双簧的，恩

【在 p******e 的大作中提到】

: 小气鬼

d*e2010-10-19 07:10

18 楼

myc tag is so small, and I think it's hard to see it on WB.
I didn't do isotype control, maybe I should. thanks for all the suggestions.

【在 c******r 的大作中提到】

: 你老板这个显然胡扯。
: 但是你的control也是不够的。
: better control是表达myc tag和B，这样可以排除B和myc tag有interaction。
: 当然还有什么Isotype control啥的，我想你应该已经做了。
:
: 时候
: negative
: speci
: pr

p*e2010-10-19 07:10

19 楼

我没包子

【在 s*********r 的大作中提到】

: 你大方？
: 那你给我发情人家安慰包吧，要双簧的，恩

c*r2010-10-19 07:10

20 楼

嗯？
我是说在negative control里面表达myc tag和B，然后pull down myc，wb for B。这
样你的negative和AB同时表达更接近，比仅仅没有A做negative control可能更好一点
。你觉得怎么样？

suggestions.

【在 d********e 的大作中提到】

: myc tag is so small, and I think it's hard to see it on WB.
: I didn't do isotype control, maybe I should. thanks for all the suggestions.

X*72010-10-19 07:10

21 楼

=_=，我这叫会过日子。

【在 p******e 的大作中提到】

: 小气鬼

d*e2010-10-19 07:10

22 楼

that makes sense. I was thinking of probing myc after WB for B on the same
membrane.

【在 c******r 的大作中提到】

: 嗯？
: 我是说在negative control里面表达myc tag和B，然后pull down myc，wb for B。这
: 样你的negative和AB同时表达更接近，比仅仅没有A做negative control可能更好一点
: 。你觉得怎么样？
:
: suggestions.

X*72010-10-19 07:10

23 楼

那是必须滴

【在 s*********r 的大作中提到】

: 好快啊，谢谢

d*u2010-10-19 07:10

24 楼

其实最好的control应该是在负对照里加一个有myc tag的蛋白比如GFP啊啥的。最好要
和你的sample是相同的质粒只不过蛋白不同，然后做IP。保证能封住所有reviewer的嘴

s*r2010-10-19 07:10

25 楼

两个双簧还是有的，
不给的话，你就是小气鬼，恩

【在 p******e 的大作中提到】

: 我没包子

c*r2010-10-19 07:10

26 楼

嗯，这个确实更好。但是用GFP有个问题，GFP非常稳定，一般表达量会比较高，不知道
会不会false positive。
你这个idea是对的，不过找什么可能还需要考虑一下。

【在 d****u 的大作中提到】

: 其实最好的control应该是在负对照里加一个有myc tag的蛋白比如GFP啊啥的。最好要
: 和你的sample是相同的质粒只不过蛋白不同，然后做IP。保证能封住所有reviewer的嘴

p*e2010-10-19 07:10

27 楼

去发很麻烦。我只是懒虫。

【在 s*********r 的大作中提到】

: 两个双簧还是有的，
: 不给的话，你就是小气鬼，恩

d*u2010-10-19 07:10

28 楼

扔个luciferase基因吧，一般的哺乳动物细胞里也没有底物。

【在 c******r 的大作中提到】

: 嗯，这个确实更好。但是用GFP有个问题，GFP非常稳定，一般表达量会比较高，不知道
: 会不会false positive。
: 你这个idea是对的，不过找什么可能还需要考虑一下。

s*r2010-10-19 07:10

29 楼

小气鬼。。。。

【在 p******e 的大作中提到】

: 去发很麻烦。我只是懒虫。

g*52010-10-19 07:10

30 楼

you could try express myc-A, AND Aliquot cell lysate then use myc-antibody
or corresponding igG as control?

时候
negative
speci
pr

【在 d********e 的大作中提到】