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没有终止序列，基因还会表达么

没有终止序列，基因还会表达么# Biology - 生物学

S*e2012-10-10 07:10

1 楼

在考虑做两个基因在同一个质粒的construct,所以想起来这个问题。
若把一个ORF后面的 SV40 PolyA 去掉（后面紧跟另一个CMV promoter + another ORF
），还会表达么，还是说有弱的表达？

m*52012-10-10 07:10

2 楼

会减弱表达，参考NMD
most importantly , why do you have to do that?

【在 S******e 的大作中提到】

: 在考虑做两个基因在同一个质粒的construct,所以想起来这个问题。
: 若把一个ORF后面的 SV40 PolyA 去掉（后面紧跟另一个CMV promoter + another ORF
: ），还会表达么，还是说有弱的表达？

S*e2012-10-10 07:10

3 楼

两个质粒共转染效率比较低，我希望大多数细胞同时表达两个基因，
其实还有个试验是需要三个基因同时在一个细胞里表达，
不知道有什么好的转染方法么，
我用lip2000，总达不到希望的效果

【在 m******5 的大作中提到】

: 会减弱表达，参考NMD
: most importantly , why do you have to do that?

V*f2012-10-10 07:10

4 楼

中间加个 IRES就可以表达两个基因了, 不需要去 stop codon

j*x2012-10-10 07:10

5 楼

事实上有不少商业载体都是这么干的，2个不同的Promoter+ORF串联，最后加上公用的
polyA signal，产生3' overlapping transcripts，比如invitrogen著名的pLenti
gateway系列。这种转录结构其实也不是人类原创了，而是从病毒那里学来的，最典型
的就是HBV，所有5个转录本，7个编码蛋白，共用唯一一个polyA site。
至于说表达水平，决定的因素有很多，但是最基本的一个原则是，两个串联应该使用不
用的promoter，否则很可能出现竞争性抑制。

ORF

【在 S******e 的大作中提到】