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Tet on system问题# Biology - 生物学
b*e
1
二人晚餐。。。done...
主菜做法:
1) 仓鱼洗乾净,厨房纸吸乾水,鱼背界刀一寸,切蒜蓉调豉汁,碟上放两根筷子盛起
仓鱼,把豉汁淋在鱼上,上气後蒸八分钟,取出,放点葱丝或葱花,洒热油,上菜。
2) 虾去虾线,加盐出水,水龙头下冲水,豆腐切粒状,蒜头用刀背拍扁,调芡汁备用
。热油,快炒虾仁至八成熟,盛起。添点油,爆香蒜头,豆腐从锅边滑下,放着微煎一
下,淋茨汁,虾仁放回锅里,慢动作炒几下,让芡汁裹着豆腐,洒上葱花,盛起上碟。
猪骨萝卜汤做法:
红白萝卜去皮(白萝卜量少於红萝卜),切大块。烧水准备煲汤,另一边锅同样烧开水
,把猪骨掉进去,去血沫,捞起,放水洗净猪骨。猪骨煲个半小时,下红萝卜,再熬半
小时,最後下白萝卜,再熬一会,差不多煲好时,放少许盐,自行试味。
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m*t
2
上礼拜开始vst完蛋之后就没有好的app可以看美剧了。
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k*e
3
用的是clontech的pRetro-Tight系统。之前出现问题,现在想找问题在哪。于是要
transient tranfect 两个个质粒到细胞中:
1.pRetro-Advanced
2.pRetro-Tight-luc
请问这两个质粒的比例?
实验的目的是检测这套system是否可用,然后再做稳定表达。
谢谢!
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h*y
4
When you do transient transfection, millions of copies of plasmid DNA can be
introduced into a cell. The ratio between two plasmids is somewhat irrelev
ant.

【在 k***e 的大作中提到】
: 用的是clontech的pRetro-Tight系统。之前出现问题,现在想找问题在哪。于是要
: transient tranfect 两个个质粒到细胞中:
: 1.pRetro-Advanced
: 2.pRetro-Tight-luc
: 请问这两个质粒的比例?
: 实验的目的是检测这套system是否可用,然后再做稳定表达。
: 谢谢!

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Z*5
5
应该是相关的。否则那么多用pGL3 + pRL-TK的结果就没法解释了。

be
irrelev

【在 h******y 的大作中提到】
: When you do transient transfection, millions of copies of plasmid DNA can be
: introduced into a cell. The ratio between two plasmids is somewhat irrelev
: ant.

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h*y
6
That is a different story. The pRL-TK is used as control to normalization,
and since TK promoter is a strong promoter and RLuc's activity is very high,
you only need very few pRL-TK. The closer the activity of RLuc is over the
detection limit of your system, the better it is
for normalization purpose.

【在 Z******5 的大作中提到】
: 应该是相关的。否则那么多用pGL3 + pRL-TK的结果就没法解释了。
:
: be
: irrelev

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j*x
7
如果假定每个transfection reagent-plasmid complex单元中两个质粒的比例是一定的
(这个前提并不难推断),那么进入单个细胞中的两个质粒的比例也就是一定的。
至于用报告质粒共转染作normalization,一定程度上也是基于了这个前提。如果两者
进入细胞不成比例的话,用这个方法来消除转染效率的不同就没有多少意义了。

be
irrelev

【在 h******y 的大作中提到】
: When you do transient transfection, millions of copies of plasmid DNA can be
: introduced into a cell. The ratio between two plasmids is somewhat irrelev
: ant.

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