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有做电镜的吗?# Biology - 生物学
w*4
1
新泽西的princeton junction附近有没有什么比较价廉物美,安全可靠的preschool和apartment?
另外,preschool需要排队吗?一般申请后要等多久才能入学?
谢谢。
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c*r
2
cryoEM分辨率较高,什么情况下做不了cryoEM?
最近看了一篇文章,nenetive straining,只到20多A的分辨率,好奇为什么没做
cryoEM
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m*s
3
听说那里烙印开的preschool只要六百多。

和apartment?

【在 w***4 的大作中提到】
: 新泽西的princeton junction附近有没有什么比较价廉物美,安全可靠的preschool和apartment?
: 另外,preschool需要排队吗?一般申请后要等多久才能入学?
: 谢谢。

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s*y
4
我对这个是三脚猫。但是在我的印象里,cryoEM的样品制备可麻烦了。
而nenetive straining 则非常容易做。所以除非有必要,否则没有人自讨苦吃去做
cryo。

【在 c**********r 的大作中提到】
: cryoEM分辨率较高,什么情况下做不了cryoEM?
: 最近看了一篇文章,nenetive straining,只到20多A的分辨率,好奇为什么没做
: cryoEM

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i*0
5
作cryo-EM的难度相当于蛋白结晶,一般要耗3-6月摸索条件。快速冰冻来防止冰晶
的形成,在偶然条件下形成单分子冰层(保持液相的特征)。需要有液氮holder
的电镜,和空气湿度的严格要求来确保图像质量。要达到高分辨率,要收集足够的图像
,是个体力活。目前的软件水平也参差不齐,pick particle基本靠手,
几万个particle,坑爹啊。目前cryoEM最成功的就是病毒颗粒的结构,
因为它高度对称,可以大幅缩小到达高分辨率的图像数,所以才有所谓几个A的分辨率
出现。
Negative stain相对要简单很多,对电镜要求也少一些。上手快,成功率高,只要蛋白
不聚集,找到合适的浓度把蛋白分子颗粒均匀分布在grid上,stain合适,图
像对比度会比cryoEM清晰很多。但因为有重金属铀的覆盖,解出来的结构分辨率
就上不去了。
最牛的是2D-结晶,用电镜作x-ray衍射和数据收集,用晶体学的运算解出二维
晶体的结构。不过目前只有水通道这一个成功的例子。
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c*9
6
不做cryo-em, 主要还是这个技术不够普及。
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i*0
7
作为一项技术,它确实不够普及,可是最近电镜技术的发展也让这个老技术焕发新的生
命力,比如膜蛋白的晶体结构多是通过修饰稳定后才能结晶,可是这样带来的稳态结构
是否能反映天然状态一直是个困扰。cryo-EM是液相状态的结构,可以反映大分
子颗粒的dynamic的构象。一个经典就是ATPase质子通道的多态性(见
Steve Lutke 的文章)。如果可以合作, 还是挺有意思的。
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s*c
8
电镜的优势是很大的,当然技术问题也是很多的。但是用cryo EM来做membrane
protein dynamics的东西,局限性还是很大,不如其它很多的biophysics的手段好。

【在 i***0 的大作中提到】
: 作为一项技术,它确实不够普及,可是最近电镜技术的发展也让这个老技术焕发新的生
: 命力,比如膜蛋白的晶体结构多是通过修饰稳定后才能结晶,可是这样带来的稳态结构
: 是否能反映天然状态一直是个困扰。cryo-EM是液相状态的结构,可以反映大分
: 子颗粒的dynamic的构象。一个经典就是ATPase质子通道的多态性(见
: Steve Lutke 的文章)。如果可以合作, 还是挺有意思的。

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l*1
9
sure, likes Solid or In Cell NMR

【在 s******c 的大作中提到】
: 电镜的优势是很大的,当然技术问题也是很多的。但是用cryo EM来做membrane
: protein dynamics的东西,局限性还是很大,不如其它很多的biophysics的手段好。

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e*s
10
是外行,没机会做,但一直很感兴趣。
Cryo EM最大的优势应该还是做大的Complex吧?Protein complex一直是个挑战。晶体
和核磁做Complex的结构都有很大的挑战,个人感觉Cryo做大的复合物的结构到真的是
优势潜力巨大。
版上有没有专家出来现身说法下。

【在 s******c 的大作中提到】
: 电镜的优势是很大的,当然技术问题也是很多的。但是用cryo EM来做membrane
: protein dynamics的东西,局限性还是很大,不如其它很多的biophysics的手段好。

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c*r
11
蛋白结晶 sometimes is really easy, cyro-EM is difficult for most of the time

【在 i***0 的大作中提到】
: 作cryo-EM的难度相当于蛋白结晶,一般要耗3-6月摸索条件。快速冰冻来防止冰晶
: 的形成,在偶然条件下形成单分子冰层(保持液相的特征)。需要有液氮holder
: 的电镜,和空气湿度的严格要求来确保图像质量。要达到高分辨率,要收集足够的图像
: ,是个体力活。目前的软件水平也参差不齐,pick particle基本靠手,
: 几万个particle,坑爹啊。目前cryoEM最成功的就是病毒颗粒的结构,
: 因为它高度对称,可以大幅缩小到达高分辨率的图像数,所以才有所谓几个A的分辨率
: 出现。
: Negative stain相对要简单很多,对电镜要求也少一些。上手快,成功率高,只要蛋白
: 不聚集,找到合适的浓度把蛋白分子颗粒均匀分布在grid上,stain合适,图
: 像对比度会比cryoEM清晰很多。但因为有重金属铀的覆盖,解出来的结构分辨率

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d*b
12
不做cryo的原因很大可能就是蛋白比较小,在cryo的条件下衬度低,不容易进行后期的
数据处理。
我做七年冷冻电镜了

【在 c**********r 的大作中提到】
: cryoEM分辨率较高,什么情况下做不了cryoEM?
: 最近看了一篇文章,nenetive straining,只到20多A的分辨率,好奇为什么没做
: cryoEM

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b*z
13
楼上回复那么多,只发现这一个懂的,哈哈哈
兄弟在哪个实验室混?

不做cryo的原因很大可能就是蛋白比较小,在cryo的条件下衬度低,不容易进行后期的
数据处理。我做七年冷冻电镜了

【在 d****b 的大作中提到】
: 不做cryo的原因很大可能就是蛋白比较小,在cryo的条件下衬度低,不容易进行后期的
: 数据处理。
: 我做七年冷冻电镜了

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F*Q
14
乱弹一下,各位牛人不要见笑:
CryoEM的历史比起蛋白质晶体学的历史并不短多少,但是它的竞争力却远远不可和蛋白
质晶体学相提并论,研究对象的困难是一个因素,成本高昂也是一个因素,但最大的因
素恐怕是没有找到能够充分发挥学科优势的方展方向。拿自己的弱项(分辨率)拼命去
和 别的学科的长项比,效果会怎么样?
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m*r
15
how about solution NMR?

time

【在 c**********r 的大作中提到】
: 蛋白结晶 sometimes is really easy, cyro-EM is difficult for most of the time
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F*Q
16
对于少数真正热爱科学的人来说,也许是不错的方向,对于大多数需要以谋生为主的人
来说恐怕不是个好的行当。

【在 m********r 的大作中提到】
: how about solution NMR?
:
: time

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l*1
17
plus math/cs/tatistics or theoretical physics at least above Master
graduated level likes Tsinghua Univ or PKU
unless don't touch MD of solution 3D or 4D NMR

【在 F*Q 的大作中提到】
: 对于少数真正热爱科学的人来说,也许是不错的方向,对于大多数需要以谋生为主的人
: 来说恐怕不是个好的行当。

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n*p
18
如果真对Science感兴趣,去做optics,laser 和spectroscopy,电镜在生物学上的应
用已经到头了。Cryo,Tomo等只是做电镜的搞的没价值小把戏。
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m*r
19
how about x-ray crystallography plus solution NMR?

【在 F*Q 的大作中提到】
: 对于少数真正热爱科学的人来说,也许是不错的方向,对于大多数需要以谋生为主的人
: 来说恐怕不是个好的行当。

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c*T
20
能展开分析一下么?
我也对cyro-ET很感兴趣,觉得对于不适于结晶的生物样品,这个技术很强大。

【在 n*********p 的大作中提到】
: 如果真对Science感兴趣,去做optics,laser 和spectroscopy,电镜在生物学上的应
: 用已经到头了。Cryo,Tomo等只是做电镜的搞的没价值小把戏。

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z*i
21
cryo-ET 分辨率太低,也就能看个大概。看原位的东西,对样品的厚度有要求。

【在 c******T 的大作中提到】
: 能展开分析一下么?
: 我也对cyro-ET很感兴趣,觉得对于不适于结晶的生物样品,这个技术很强大。

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