l*e
2 楼
我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。
f*8
3 楼
我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
肉和排骨一起做排骨菜吃。
排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
肉和排骨一起做排骨菜吃。
排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
n*w
4 楼
你还染其他的了吗？
m*r
5 楼
我喜欢用中国店的夹心猪肉(pork shoulder butt)，在店里让他们绞两次
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
w*1
6 楼
换formaldehyde 固定。
z*r
7 楼
这个方法不错
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
: 肉和排骨一起做排骨菜吃。
: 排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
: 肉和排骨一起做排骨菜吃。
: 排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
v*a
8 楼
用这个染actin千万不能用methanol一类的，推荐PFA
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
j*u
9 楼
+1
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
: 肉和排骨一起做排骨菜吃。
: 排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
: 肉和排骨一起做排骨菜吃。
: 排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
q*g
10 楼
methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
A*0
11 楼
肥瘦都有得不会很柴～～
l*e
12 楼
一起共染的抗体没问题，试了几次，共染的和单独染的都没看到actin，哎哎。其它部
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
t*4
13 楼
这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
掉血水，要不臭死了
掉血水，要不臭死了
c*r
14 楼
Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
用methonal fix。
用methonal fix。
s*d
15 楼
搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
s*2
16 楼
YES!
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
v*e
17 楼
破猫怎么转战美食版了
【在 s**d 的大作中提到】
: 搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
【在 s**d 的大作中提到】
: 搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
l*e
18 楼
好吧，因为问过别人，他们用的是methanol。
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
c*n
19 楼
加香油加水搅上劲，比较不柴。。。
c*u
20 楼
去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
A*0
21 楼
做馅儿要加葱姜蒜和料酒去腥嗒～～
【在 t**********4 的大作中提到】
: 这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
: 掉血水，要不臭死了
【在 t**********4 的大作中提到】
: 这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
: 掉血水，要不臭死了
l*e
22 楼
我重新订了一管，应该是试了两管。。。。。。。。。。。
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
c*e
23 楼
弱弱说一句，第一眼看到这个标题我就在想，不是猪肉馅的饺子么，为啥会有饺子馅的
猪肉。。。
猪肉。。。
n*w
24 楼
我也觉得20分钟methanol有点长。我一般都是1-5分钟。
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
B*n
25 楼
我今天还让我妈鉴定了costco里的猪肉
那个2.79/lb的肉，比国内有些猪肉还好些
【在 t**********4 的大作中提到】
: 这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
: 掉血水，要不臭死了
那个2.79/lb的肉，比国内有些猪肉还好些
【在 t**********4 的大作中提到】
: 这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
: 掉血水，要不臭死了
b*8
26 楼
而且染Phalloidin之前不能用triton打孔，否则非特异染色会很重，
o*l
27 楼
赞赞赞
自从知道这个法子，馅儿做的可好了。。
【在 s**d 的大作中提到】
: 搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
自从知道这个法子，馅儿做的可好了。。
【在 s**d 的大作中提到】
: 搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
l*e
28 楼
我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。
n*w
29 楼
你还染其他的了吗？
w*1
30 楼
换formaldehyde 固定。
v*a
31 楼
用这个染actin千万不能用methanol一类的，推荐PFA
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
q*g
32 楼
methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
l*e
33 楼
一起共染的抗体没问题，试了几次，共染的和单独染的都没看到actin，哎哎。其它部
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
c*r
34 楼
Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
用methonal fix。
用methonal fix。
s*2
35 楼
YES!
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
l*e
36 楼
好吧，因为问过别人，他们用的是methanol。
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
c*u
37 楼
去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
l*e
38 楼
我重新订了一管，应该是试了两管。。。。。。。。。。。
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
n*w
39 楼
我也觉得20分钟methanol有点长。我一般都是1-5分钟。
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
b*8
40 楼
而且染Phalloidin之前不能用triton打孔，否则非特异染色会很重，
l*e
41 楼
问题出在了用blocking buffer稀释phalloidin。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
w*s
42 楼
4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
s*i
43 楼
RE
NaBh4
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6
【在 w*******s 的大作中提到】
: 4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
: quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
NaBh4
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6
【在 w*******s 的大作中提到】
: 4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
: quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
f*l
44 楼
一定不能用 methanol
PFA 5min RT is long enough although longer fixation does not hurt
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
PFA 5min RT is long enough although longer fixation does not hurt
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
相关阅读
惊天秘闻：两个转基因祸首近日被联手的阴间判官们先后带走2014年eLife真正的影响因子（~8.5X2=17)Santa Cruz的抗体好用吗？求推荐个文章语言润色公司做了cell fractionation以后， nucleus里面啥都没了。。。[got]求文献一篇 Current Protocols in Molecular Biology北卡大被杀害的刘教授是种族仇视下的仇恨犯罪中国为什么生育率很高 (转载)paper help这项研究很有意思[关键词：果蝇 技术 挑战] 如何最大化果蝇基因表达?Bioinformatics Position in a Genomics Center in a University in the Southern California需要买一个存细胞的液氮储存柜请教: miRNA genome-wide screen 时间和费用biosensor的前景[免费分享］anti-GFP和anti-mCherry nanobody 的expression vectorPaper helphow good is h-index of 7 in biomedical area?这Evans放卫星也不是第一次了JHU千老面试住宿/学区问题