l*e
2 楼
我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。
f*8
3 楼
我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
肉和排骨一起做排骨菜吃。
排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
肉和排骨一起做排骨菜吃。
排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
n*w
4 楼
你还染其他的了吗？
m*r
5 楼
我喜欢用中国店的夹心猪肉(pork shoulder butt)，在店里让他们绞两次
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
w*1
6 楼
换formaldehyde 固定。
z*r
7 楼
这个方法不错
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
: 肉和排骨一起做排骨菜吃。
: 排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
: 肉和排骨一起做排骨菜吃。
: 排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
v*a
8 楼
用这个染actin千万不能用methanol一类的，推荐PFA
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
j*u
9 楼
+1
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
: 肉和排骨一起做排骨菜吃。
: 排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我一般都是买了Costco的大猪排把排骨上很厚的那层肉割下来剁了包饺子，排骨上留的
: 肉和排骨一起做排骨菜吃。
: 排骨上那层厚肉有肥有瘦，包了饺子很好吃，炒菜也很好。。我就是喜欢吃排骨。。。
q*g
10 楼
methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
A*0
11 楼
肥瘦都有得不会很柴～～
l*e
12 楼
一起共染的抗体没问题，试了几次，共染的和单独染的都没看到actin，哎哎。其它部
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
t*4
13 楼
这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
掉血水，要不臭死了
掉血水，要不臭死了
c*r
14 楼
Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
用methonal fix。
用methonal fix。
s*d
15 楼
搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 自己在家grind的话，用猪肉的哪种cut不那么柴？
s*2
16 楼
YES!
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
v*e
17 楼
破猫怎么转战美食版了
【在 s**d 的大作中提到】
: 搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
【在 s**d 的大作中提到】
: 搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
l*e
18 楼
好吧，因为问过别人，他们用的是methanol。
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
c*n
19 楼
加香油加水搅上劲，比较不柴。。。
c*u
20 楼
去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
A*0
21 楼
做馅儿要加葱姜蒜和料酒去腥嗒～～
【在 t**********4 的大作中提到】
: 这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
: 掉血水，要不臭死了
【在 t**********4 的大作中提到】
: 这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
: 掉血水，要不臭死了
l*e
22 楼
我重新订了一管，应该是试了两管。。。。。。。。。。。
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
c*e
23 楼
弱弱说一句，第一眼看到这个标题我就在想，不是猪肉馅的饺子么，为啥会有饺子馅的
猪肉。。。
猪肉。。。
n*w
24 楼
我也觉得20分钟methanol有点长。我一般都是1-5分钟。
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
B*n
25 楼
我今天还让我妈鉴定了costco里的猪肉
那个2.79/lb的肉，比国内有些猪肉还好些
【在 t**********4 的大作中提到】
: 这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
: 掉血水，要不臭死了
那个2.79/lb的肉，比国内有些猪肉还好些
【在 t**********4 的大作中提到】
: 这里的猪肉都有血，不觉得臭吗？我一般都不知道用哪种肉做馅，大部分肉炒菜都先煮
: 掉血水，要不臭死了
b*8
26 楼
而且染Phalloidin之前不能用triton打孔，否则非特异染色会很重，
o*l
27 楼
赞赞赞
自从知道这个法子，馅儿做的可好了。。
【在 s**d 的大作中提到】
: 搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
自从知道这个法子，馅儿做的可好了。。
【在 s**d 的大作中提到】
: 搅一阵放一点水和一点油再搅再放，啥肉都不柴
l*e
28 楼
我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。
n*w
29 楼
你还染其他的了吗？
w*1
30 楼
换formaldehyde 固定。
v*a
31 楼
用这个染actin千万不能用methanol一类的，推荐PFA
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
q*g
32 楼
methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
l*e
33 楼
一起共染的抗体没问题，试了几次，共染的和单独染的都没看到actin，哎哎。其它部
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
c*r
34 楼
Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
用methonal fix。
用methonal fix。
s*2
35 楼
YES!
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
l*e
36 楼
好吧，因为问过别人，他们用的是methanol。
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
c*u
37 楼
去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
l*e
38 楼
我重新订了一管，应该是试了两管。。。。。。。。。。。
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
n*w
39 楼
我也觉得20分钟methanol有点长。我一般都是1-5分钟。
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
b*8
40 楼
而且染Phalloidin之前不能用triton打孔，否则非特异染色会很重，
l*e
41 楼
问题出在了用blocking buffer稀释phalloidin。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
w*s
42 楼
4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
s*i
43 楼
RE
NaBh4
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6
【在 w*******s 的大作中提到】
: 4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
: quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
NaBh4
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6
【在 w*******s 的大作中提到】
: 4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
: quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
f*l
44 楼
一定不能用 methanol
PFA 5min RT is long enough although longer fixation does not hurt
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
PFA 5min RT is long enough although longer fixation does not hurt
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
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