b*0
2 楼
我们看中的房子由于agent说昨天刚降价落在我们的范围内，他说买主的丈夫已经离开
这个地方，他老婆急着要和他会和，所以也很急着要卖这个房子。现在降价后是309k，
他们能接受280k的offer。
那现在我们是直接开280k的offer，还是再降些，然后在280k的价格上达成协议？
lg担心我们现在开280k，卖方万一知道我们也很想要就再抬高价格，这样我们就很被动
。现在这个budget几乎也是我们能承受的最高价格了。
请大家给意见，谢谢！！
这个地方，他老婆急着要和他会和，所以也很急着要卖这个房子。现在降价后是309k，
他们能接受280k的offer。
那现在我们是直接开280k的offer，还是再降些，然后在280k的价格上达成协议？
lg担心我们现在开280k，卖方万一知道我们也很想要就再抬高价格，这样我们就很被动
。现在这个budget几乎也是我们能承受的最高价格了。
请大家给意见，谢谢！！
m*h
3 楼
乖乖的在店门口等
b*8
4 楼
最近发现一个基因，肝癌里面高表达，用siRNA敲除后，细胞增殖受抑制，细胞周期分
析发现被阻滞在S期，做western 发现cyclin D1 明显上调，请问怎么解释？有什么好
的思路可以继续下去吗？谢谢各位大神！
析发现被阻滞在S期，做western 发现cyclin D1 明显上调，请问怎么解释？有什么好
的思路可以继续下去吗？谢谢各位大神！
c*9
5 楼
depends
如果工作界期间的工作有publication，而且有利于你将来combine academic 和
industrial 领域搞funding. 为什么不写进去。
【在 f*******A 的大作中提到】
: 诚信请问。看到有的人写的很详细有的一笔带过，请问以前的industry经验有人care吗
: ？入职的时候背景调查到这些吗？谢谢
如果工作界期间的工作有publication，而且有利于你将来combine academic 和
industrial 领域搞funding. 为什么不写进去。
【在 f*******A 的大作中提到】
: 诚信请问。看到有的人写的很详细有的一笔带过，请问以前的industry经验有人care吗
: ？入职的时候背景调查到这些吗？谢谢
b*0
6 楼
没有建议，自己顶一下。
l*o
7 楼
居然能不进来， 太赞了！
f*g
8 楼
Sirna 是瞬时敲降吧，另外，要验证其敲降效率，还要多选几条siRNA以防止off-
target.
你过表达d1，看看liver cell是否剧烈增殖，改变细胞周期。移植入小鼠，是否成瘤。
然后就是机制探讨。往各种通路上扯关系。
读文献，is cyclin d1 ko available ? 看看有什么和你的发现一致的表型。
如果胚胎致死，看看条件瞧出有吗，cross with liver-specific cre.
昨天刚刚看到一篇文章，说d1敲除小鼠无血细胞了，估计是胚胎致死
target.
你过表达d1，看看liver cell是否剧烈增殖，改变细胞周期。移植入小鼠，是否成瘤。
然后就是机制探讨。往各种通路上扯关系。
读文献，is cyclin d1 ko available ? 看看有什么和你的发现一致的表型。
如果胚胎致死，看看条件瞧出有吗，cross with liver-specific cre.
昨天刚刚看到一篇文章，说d1敲除小鼠无血细胞了，估计是胚胎致死
m*d
9 楼
开270
【在 b****0 的大作中提到】
: 我们看中的房子由于agent说昨天刚降价落在我们的范围内，他说买主的丈夫已经离开
: 这个地方，他老婆急着要和他会和，所以也很急着要卖这个房子。现在降价后是309k，
: 他们能接受280k的offer。
: 那现在我们是直接开280k的offer，还是再降些，然后在280k的价格上达成协议？
: lg担心我们现在开280k，卖方万一知道我们也很想要就再抬高价格，这样我们就很被动
: 。现在这个budget几乎也是我们能承受的最高价格了。
: 请大家给意见，谢谢！！
【在 b****0 的大作中提到】
: 我们看中的房子由于agent说昨天刚降价落在我们的范围内，他说买主的丈夫已经离开
: 这个地方，他老婆急着要和他会和，所以也很急着要卖这个房子。现在降价后是309k，
: 他们能接受280k的offer。
: 那现在我们是直接开280k的offer，还是再降些，然后在280k的价格上达成协议？
: lg担心我们现在开280k，卖方万一知道我们也很想要就再抬高价格，这样我们就很被动
: 。现在这个budget几乎也是我们能承受的最高价格了。
: 请大家给意见，谢谢！！
p*f
10 楼
好专注。
店里不让进？看见free cake tasting...口水
店里不让进？看见free cake tasting...口水
b*8
11 楼
谢谢你的回复。所有的实验都是用一条阴性对照，两条不同位点的siRNA，细胞周期和
cyclin D1表达变化都是一致的。
另外，可能我没表达清楚我的意思，我的问题是，对于S期阻滞的情况，既往文献一般
都报道cyclin D1表达是下调的，为何我这里反而上调了？
【在 f******g 的大作中提到】
: Sirna 是瞬时敲降吧，另外，要验证其敲降效率，还要多选几条siRNA以防止off-
: target.
: 你过表达d1，看看liver cell是否剧烈增殖，改变细胞周期。移植入小鼠，是否成瘤。
: 然后就是机制探讨。往各种通路上扯关系。
: 读文献，is cyclin d1 ko available ? 看看有什么和你的发现一致的表型。
: 如果胚胎致死，看看条件瞧出有吗，cross with liver-specific cre.
: 昨天刚刚看到一篇文章，说d1敲除小鼠无血细胞了，估计是胚胎致死
cyclin D1表达变化都是一致的。
另外，可能我没表达清楚我的意思，我的问题是，对于S期阻滞的情况，既往文献一般
都报道cyclin D1表达是下调的，为何我这里反而上调了？
【在 f******g 的大作中提到】
: Sirna 是瞬时敲降吧，另外，要验证其敲降效率，还要多选几条siRNA以防止off-
: target.
: 你过表达d1，看看liver cell是否剧烈增殖，改变细胞周期。移植入小鼠，是否成瘤。
: 然后就是机制探讨。往各种通路上扯关系。
: 读文献，is cyclin d1 ko available ? 看看有什么和你的发现一致的表型。
: 如果胚胎致死，看看条件瞧出有吗，cross with liver-specific cre.
: 昨天刚刚看到一篇文章，说d1敲除小鼠无血细胞了，估计是胚胎致死
b*0
12 楼
为什么还要稍高呢？不是稍低吗？
m*h
13 楼
照理说，一般食品店都不让进的
店小儿一看到破狗，就送了他一小勺冰激凌
【在 p********f 的大作中提到】
: 好专注。
: 店里不让进？看见free cake tasting...口水
店小儿一看到破狗，就送了他一小勺冰激凌
【在 p********f 的大作中提到】
: 好专注。
: 店里不让进？看见free cake tasting...口水
a*a
14 楼
d1下调是block在g1后期的checkpoint上，有了足够的D1细胞内rb磷酸化推动细胞进去s期
你的数据可以这么解释
d1太多，导致不成熟的细胞提前进入s期，通不过s期检验点。
可能你首先需要做个同步化看看是不是加速进s期，rb磷酸化如何
然后看看dsb如何，s期检验点查什么东西。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 谢谢你的回复。所有的实验都是用一条阴性对照，两条不同位点的siRNA，细胞周期和
: cyclin D1表达变化都是一致的。
: 另外，可能我没表达清楚我的意思，我的问题是，对于S期阻滞的情况，既往文献一般
: 都报道cyclin D1表达是下调的，为何我这里反而上调了？
你的数据可以这么解释
d1太多，导致不成熟的细胞提前进入s期，通不过s期检验点。
可能你首先需要做个同步化看看是不是加速进s期，rb磷酸化如何
然后看看dsb如何，s期检验点查什么东西。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 谢谢你的回复。所有的实验都是用一条阴性对照，两条不同位点的siRNA，细胞周期和
: cyclin D1表达变化都是一致的。
: 另外，可能我没表达清楚我的意思，我的问题是，对于S期阻滞的情况，既往文献一般
: 都报道cyclin D1表达是下调的，为何我这里反而上调了？
b*0
15 楼
我只是觉得卖方已经告诉你280他们可以接受，我们开270会不会显得没有诚意？
h*d
16 楼
第二张好可爱
b*8
17 楼
谢谢，你的意见对我很有启发，不知道你有没有可以参考的paper？
去s期
【在 a*******a 的大作中提到】
: d1下调是block在g1后期的checkpoint上，有了足够的D1细胞内rb磷酸化推动细胞进去s期
: 你的数据可以这么解释
: d1太多，导致不成熟的细胞提前进入s期，通不过s期检验点。
: 可能你首先需要做个同步化看看是不是加速进s期，rb磷酸化如何
: 然后看看dsb如何，s期检验点查什么东西。
去s期
【在 a*******a 的大作中提到】
: d1下调是block在g1后期的checkpoint上，有了足够的D1细胞内rb磷酸化推动细胞进去s期
: 你的数据可以这么解释
: d1太多，导致不成熟的细胞提前进入s期，通不过s期检验点。
: 可能你首先需要做个同步化看看是不是加速进s期，rb磷酸化如何
: 然后看看dsb如何，s期检验点查什么东西。
B*i
18 楼
give $275K final offer if there is no competition.
f*n
19 楼
赞破狗的定力！
f*w
20 楼
make an offer of 270K. Prepare to bump it up a bit by 2K or 3K.
You are in a very good position to negotiate the price. So slash it as much
as possible. Don't think too much about the mood of the seller. His/her
agent will advise him the best choice. It sounds to me that the seller could
accept 273K.
If there are multiple bidders, you will have to bid up your price quite a
bit...But if that's the case, that shows that the house is well worth the
price. so you could make a higher offer.
You are in a very good position to negotiate the price. So slash it as much
as possible. Don't think too much about the mood of the seller. His/her
agent will advise him the best choice. It sounds to me that the seller could
accept 273K.
If there are multiple bidders, you will have to bid up your price quite a
bit...But if that's the case, that shows that the house is well worth the
price. so you could make a higher offer.
y*i
21 楼
教狗有方 ：）
s*t
22 楼
Ithink 275
j*6
23 楼
这个破狗到底是杂个练出来的噢?太impressive~~~~
s*g
24 楼
先给我包子然后我告诉你怎么办。
【在 b****0 的大作中提到】
: 我们看中的房子由于agent说昨天刚降价落在我们的范围内，他说买主的丈夫已经离开
: 这个地方，他老婆急着要和他会和，所以也很急着要卖这个房子。现在降价后是309k，
: 他们能接受280k的offer。
: 那现在我们是直接开280k的offer，还是再降些，然后在280k的价格上达成协议？
: lg担心我们现在开280k，卖方万一知道我们也很想要就再抬高价格，这样我们就很被动
: 。现在这个budget几乎也是我们能承受的最高价格了。
: 请大家给意见，谢谢！！
【在 b****0 的大作中提到】
: 我们看中的房子由于agent说昨天刚降价落在我们的范围内，他说买主的丈夫已经离开
: 这个地方，他老婆急着要和他会和，所以也很急着要卖这个房子。现在降价后是309k，
: 他们能接受280k的offer。
: 那现在我们是直接开280k的offer，还是再降些，然后在280k的价格上达成协议？
: lg担心我们现在开280k，卖方万一知道我们也很想要就再抬高价格，这样我们就很被动
: 。现在这个budget几乎也是我们能承受的最高价格了。
: 请大家给意见，谢谢！！
y*o
25 楼
lucky dog
【在 m***h 的大作中提到】
: 照理说，一般食品店都不让进的
: 店小儿一看到破狗，就送了他一小勺冰激凌
【在 m***h 的大作中提到】
: 照理说，一般食品店都不让进的
: 店小儿一看到破狗，就送了他一小勺冰激凌
s*g
26 楼
舍不得包子，多花好几千去吧。这个谈判技巧就不告诉你了。
m*h
27 楼
it已经是中年猥琐男了
【在 j******6 的大作中提到】
: 这个破狗到底是杂个练出来的噢?太impressive~~~~
【在 j******6 的大作中提到】
: 这个破狗到底是杂个练出来的噢?太impressive~~~~
m*O
28 楼
个人认为出一个他们能接受的，然后firm比较好
但是跟对方性格和行为方式也有关，但你又不了解他们，不如就按你们的行为方式来
【在 b****0 的大作中提到】
: 我们看中的房子由于agent说昨天刚降价落在我们的范围内，他说买主的丈夫已经离开
: 这个地方，他老婆急着要和他会和，所以也很急着要卖这个房子。现在降价后是309k，
: 他们能接受280k的offer。
: 那现在我们是直接开280k的offer，还是再降些，然后在280k的价格上达成协议？
: lg担心我们现在开280k，卖方万一知道我们也很想要就再抬高价格，这样我们就很被动
: 。现在这个budget几乎也是我们能承受的最高价格了。
: 请大家给意见，谢谢！！
但是跟对方性格和行为方式也有关，但你又不了解他们，不如就按你们的行为方式来
【在 b****0 的大作中提到】
: 我们看中的房子由于agent说昨天刚降价落在我们的范围内，他说买主的丈夫已经离开
: 这个地方，他老婆急着要和他会和，所以也很急着要卖这个房子。现在降价后是309k，
: 他们能接受280k的offer。
: 那现在我们是直接开280k的offer，还是再降些，然后在280k的价格上达成协议？
: lg担心我们现在开280k，卖方万一知道我们也很想要就再抬高价格，这样我们就很被动
: 。现在这个budget几乎也是我们能承受的最高价格了。
: 请大家给意见，谢谢！！
i*p
29 楼
太厉害了！！！
y*0
30 楼
真乖！
想当年我家狗进过的店比我进的都多
想当年我家狗进过的店比我进的都多
x*o
31 楼
乖到不行！
h*1
32 楼
真乖啊。第二张好可爱啊
w*j
33 楼
确实很乖
b*n
34 楼
太牛了，破狗能疯能乖，优点都让他占全了
m*h
35 楼
我以前就梦想过，能不能把狗调教成让他疯就疯，让他乖就乖...那样生活就及其方便了
居然还真调教出来了
【在 b*****n 的大作中提到】
: 太牛了，破狗能疯能乖，优点都让他占全了
居然还真调教出来了
【在 b*****n 的大作中提到】
: 太牛了，破狗能疯能乖，优点都让他占全了
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