【在 d****u 的大作中提到】 : 哺乳动物细胞里做genome wide crisper screen的就那么几篇吧,都在大牛杂志上呢。 : 至于Cas9和sgRNA是不是在一个载体上,根据我们的经验,目前最好用的是Zhang Feng : lab的version 2 all in one vector。 : 有几个实验室载体分开的,必然会有某一个载体的滴度特别低。过这个情况也因为细胞 : 的不同而异,我们用的是原代细胞,不见得有普遍性。 : 不过我完全不能理解为什么CRISPR要分成两个载体然后再搞一个inducible system。 : 从screen的角度来讲,crispr library的数据明显要比shRNA library的数据信噪比高.
d*u
14 楼
我们目前的经验是all in one vector和separate vector的滴度差别并没有那么显著( 这个经验是4个月前的,现在有可能有更好的)。而且因为我们用的是primary cell, 本身就不像cell line那样可以传很多很多代。我们用的那个single cas9 vector滴度 又特别低(现在可能有更好的)。光把细胞养起来就好几个passage过去了。 在这种情 况下,all in one vector对我们来说更合适。