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Cas9 蛋白和gRNA合成哪家强?
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Cas9 蛋白和gRNA合成哪家强?# Biology - 生物学
a*l
1
想用CRISPR在iPSC里搞point mutation,看了一下最简单粗暴的方法是合成Donor DNA
(100bp-200bp),合成gRNA ,然后买现成的Cas9蛋白直接搞。
听说 Integrated DNA Technologies (IDT) 合成DNA 不错,但不知道哪里去合成gRNA
和买Cas9蛋白比较靠谱。具体来说,请教大家以下几个问题,希望大家多多指教!
1)gRNA去哪里合成?听说合成的RNA错误率比较高,还是让公司做 in vitro
transcription 更靠谱?
2) Donor DNA用双链还是单链比较好?
3) Cas9 蛋白在哪里买好?
最好是美国公司。谢谢大家!
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s*r
2
donor如果用ssODN的话效率比较低吧,筛克隆比较麻烦。
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M*g
3
You can try cas9 from New England Biolabs.
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a*l
4
Thanks!

【在 M******g 的大作中提到】
: You can try cas9 from New England Biolabs.
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a*l
5
我看了一些文献说是单链的donor DNA效率高?如果双链更好那就更简单了吧?

【在 s********r 的大作中提到】
: donor如果用ssODN的话效率比较低吧,筛克隆比较麻烦。
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a*l
6
any one knows about reputable RNA synthesis or RNA in vitro transcription
companies? Thanks!
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k*l
7
gRNA synthesis costs over $1,000 and you don't get much
I ordered gBlock DNA template, did in vitro transcription and purification
myself
It's pretty easy
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