南京农业大学鲍恩东教授团队在基于猪伪狂犬病病毒载体表达猪瘟病毒E2蛋白领域取得新进展

2023年2月，南京农业大学鲍恩东教授课题组在著名期刊Antiviral Research（IF=10.1，2022年）上在线发表了题为“Recombinant pseudorabies virus (PRV) expressing stabilized E2 of classical swine fever virus (CSFV) protects against both PRV and CSFV”的研究论文，描述了经过理性设计的稳定化猪瘟E2蛋白，将其作为免疫原插入伪狂犬病毒（PRV）载体，成为二价活载体疫苗以同时预防猪瘟病毒（CSFV）和PRV的感染。

伪狂犬病（PR）和猪瘟（CSF）是具有重要经济价值的猪传染病。国内大多数养殖场都对这两种疾病进行免疫接种。利用PRV载体表达CSFV的E2蛋白（PRV-E2）作为二价疫苗已有报道，但在目前的情况下，PRV-E2刺激产生的E2抗体水平并不能达到预期水平。

本研究将热稳定性评价指标与E2蛋白进化信息相结合，选取E2蛋白48个高变异位点，每个位点有2-5种备用氨基酸，对每个氨基酸的相对热力学能量进行比较，最终得到热力学能量最低的突变体E2序列（稳定化的E2）。获得的稳定化的E2序列，其热力学能量较原始序列降低了22个Rosetta能量单位，体外表达和纯化稳定化的E2蛋白表明其对应的热稳定性提高了10.5倍，免疫小鼠后可以产生比原始蛋白更高水平的抗体。基于缺失TK和gE基因的减毒PRV可作为递送外源蛋白的载体，PRV载体免疫后可感染宿主细胞，并在细胞内表达外源蛋白，之后外源蛋白分泌到细胞外，刺激体液免疫，产生针对外源蛋白的抗体。

本研究构建的表达稳定化E2蛋白的重组PRV疫苗，其E2蛋白的分泌效率提高了2.97倍，免疫小鼠后抗体水平提高了2倍，免疫家兔后可同时预防PRV强毒的致死性攻击和CSFV引起的定型热。这些结果表明，本研究构建的活载体重组株是一种有希望同时预防CSFV和PRV感染的二价疫苗。

南京农业大学动物医学院博士研究生孙阳阳为该论文的第一作者，鲍恩东教授、云涛研究员为该论文的通讯作者。该研究由浙江省自然科学基金项目(2023C02023)、浙江省公益研发项目(No.LGN21C180002)和江苏省农业科技自主创新资金项目CX(22)2016等基金资助。

文章链接：https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2023.105548

来源：南京农业大学官网、病毒学界

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