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郁闷之极,求教CHIP# Biology - 生物学
t*m
1
暑假小孩回北京探究。抵京后到哪个机关备案呢?接待人(小孩父亲)所在街道的派出
所?
如果抵京后,入住涉外酒店,是否酒店就能代外籍客人备案了?
谢谢
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d*0
2
跟好声音不是一个档次啊
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t*1
3
我愿意怎么定义就怎么定义。
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m*o
4
chromatin immunoprecipitation做了一个多月了,可是在最开始的步骤上就迈不开步
子。我是用的SDS free lysis buffer:1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
. 超声后离心,14000 rpm 10min,DNA 总是在离心后的沉淀里,上清很少。但是DNA的
大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗, 因为DNA上有蛋白,比较大?还是
说细胞核没有裂好?因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核,再超声,离心就没这个问题
。如果DNA 大小在几百个bp了,是不是说明核已经裂了呢?我可以干脆省掉离心这步吗
?或者就用4000rpm 离心beads的速度离?有哪位知道吗?怎么我老是碰到一些看起来
对别人根本不是问题的问题呢?十分十分感谢您的任何建议回答!
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C*t
5
暂住人有没有外国国籍并不重要;重要的是暂住人有没有中国国籍。暂住人不具有中国
国籍的话便须办理登记手续。
在城镇民居借宿的须在24小时内向暂住地公安派出所登记;暂住涉外旅店则由旅店向当
地公安派出所登记。
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G*8
6
听了一首就不想看下去了。
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b*i
7
Not sure why you have to use SDS-free lysis buffer. I assume that someone
told you, maybe your PI, right?
1% SDS lysis buffer is quite standard. If you do not have specific reason
to avoid it, such as studying
chromatin binding complex, 1% SDS is fine for most of transfection factor
binding studies.

deoxycholate

【在 m***o 的大作中提到】
: chromatin immunoprecipitation做了一个多月了,可是在最开始的步骤上就迈不开步
: 子。我是用的SDS free lysis buffer:1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
: . 超声后离心,14000 rpm 10min,DNA 总是在离心后的沉淀里,上清很少。但是DNA的
: 大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗, 因为DNA上有蛋白,比较大?还是
: 说细胞核没有裂好?因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核,再超声,离心就没这个问题
: 。如果DNA 大小在几百个bp了,是不是说明核已经裂了呢?我可以干脆省掉离心这步吗
: ?或者就用4000rpm 离心beads的速度离?有哪位知道吗?怎么我老是碰到一些看起来
: 对别人根本不是问题的问题呢?十分十分感谢您的任何建议回答!

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g*m
8
搞笑吧你。谁管你。能入境离境就可以了。

【在 t*m 的大作中提到】
: 暑假小孩回北京探究。抵京后到哪个机关备案呢?接待人(小孩父亲)所在街道的派出
: 所?
: 如果抵京后,入住涉外酒店,是否酒店就能代外籍客人备案了?
: 谢谢

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s*o
9
JUDGE一个一个像欠了他们钱似的,没有一点娱乐感
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s*e
10
Avoiding SDS in the lysis step is an ridiculous idea. The first-time to see. It is obviously against basic knowledge of ChIP, you should trash that protocol.

【在 b********i 的大作中提到】
: Not sure why you have to use SDS-free lysis buffer. I assume that someone
: told you, maybe your PI, right?
: 1% SDS lysis buffer is quite standard. If you do not have specific reason
: to avoid it, such as studying
: chromatin binding complex, 1% SDS is fine for most of transfection factor
: binding studies.
:
: deoxycholate

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r*8
11
1 是
2 是
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d*0
12
高晓松,孙楠都挺SB的。

【在 s**********o 的大作中提到】
: JUDGE一个一个像欠了他们钱似的,没有一点娱乐感
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m*o
13
谢谢楼上两位。但是我们实验室以前的一个postdoc确实是用SDS free的裂解液做出的
很多结果。刚开始也是用1%SDS,结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
stardard,I think I will try this. Thank you all!
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r*1
14
个人经验,没人管你,住店也好,回家也好
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p*n
15
chip 这玩意忒容易瞎搞作假了,对前人的结果别太信任

【在 m***o 的大作中提到】
: 谢谢楼上两位。但是我们实验室以前的一个postdoc确实是用SDS free的裂解液做出的
: 很多结果。刚开始也是用1%SDS,结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
: stardard,I think I will try this. Thank you all!

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C*t
16
外国人在内地暂住期间不依法向公安机关办理登记手续的,常有被边防检查机关惩处罚
款后方放行。
不法分子被查获的总体比例不高。

【在 g*m 的大作中提到】
: 搞笑吧你。谁管你。能入境离境就可以了。
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m*o
17
容易造假?是吗?我觉得比较模糊的一点是它没有个很好的CONTROL。大部分是开始的
时候用等量的细胞,但是那么多步骤,有一点没有搞好,就不是等量的input了。
另外,我还发现,超声后,同一样品,离心前取的样,和离心后取的样,跑胶的时候
DNA的大小不一样。离心后DNA总是比离心前的DNA小。是不是核膜会跟DNA交联一起,一
离心把些核膜给甩掉了?有谁可以帮解释一下吗?谢谢!
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h*9
18
IgG control, input control, non-related AB control, non-related DNA control.
Repeats.

【在 m***o 的大作中提到】
: 容易造假?是吗?我觉得比较模糊的一点是它没有个很好的CONTROL。大部分是开始的
: 时候用等量的细胞,但是那么多步骤,有一点没有搞好,就不是等量的input了。
: 另外,我还发现,超声后,同一样品,离心前取的样,和离心后取的样,跑胶的时候
: DNA的大小不一样。离心后DNA总是比离心前的DNA小。是不是核膜会跟DNA交联一起,一
: 离心把些核膜给甩掉了?有谁可以帮解释一下吗?谢谢!

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a*e
19
how long did you fix that, at what concentration?

deoxycholate

【在 m***o 的大作中提到】
: chromatin immunoprecipitation做了一个多月了,可是在最开始的步骤上就迈不开步
: 子。我是用的SDS free lysis buffer:1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
: . 超声后离心,14000 rpm 10min,DNA 总是在离心后的沉淀里,上清很少。但是DNA的
: 大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗, 因为DNA上有蛋白,比较大?还是
: 说细胞核没有裂好?因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核,再超声,离心就没这个问题
: 。如果DNA 大小在几百个bp了,是不是说明核已经裂了呢?我可以干脆省掉离心这步吗
: ?或者就用4000rpm 离心beads的速度离?有哪位知道吗?怎么我老是碰到一些看起来
: 对别人根本不是问题的问题呢?十分十分感谢您的任何建议回答!

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m*o
20
10 min with 1% paraformaldehyde. It looks most protocols use this condition.
Thank you!
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a*e
21
change that to 0.4% and try again.
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a*o
22
you can try 0.1-1% SDS. If you worry about SDS, you can dilute when you do
IP.

【在 m***o 的大作中提到】
: 谢谢楼上两位。但是我们实验室以前的一个postdoc确实是用SDS free的裂解液做出的
: 很多结果。刚开始也是用1%SDS,结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
: stardard,I think I will try this. Thank you all!

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m*o
23
Thanks ahche and amedio! but what is the side effect of over crosslinking.
Is it better than less crosslinking?
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