郁闷之极，求教CHIP# Biology - 生物学
t*m
1 楼
暑假小孩回北京探究。抵京后到哪个机关备案呢？接待人（小孩父亲）所在街道的派出
所？
如果抵京后，入住涉外酒店，是否酒店就能代外籍客人备案了？
谢谢
所？
如果抵京后，入住涉外酒店，是否酒店就能代外籍客人备案了？
谢谢
d*0
2 楼
跟好声音不是一个档次啊
t*1
3 楼
我愿意怎么定义就怎么定义。
m*o
4 楼
chromatin immunoprecipitation做了一个多月了，可是在最开始的步骤上就迈不开步
子。我是用的SDS free lysis buffer：1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
. 超声后离心,14000 rpm 10min，DNA 总是在离心后的沉淀里，上清很少。但是DNA的
大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗， 因为DNA上有蛋白，比较大？还是
说细胞核没有裂好？因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核，再超声，离心就没这个问题
。如果DNA 大小在几百个bp了，是不是说明核已经裂了呢？我可以干脆省掉离心这步吗
？或者就用4000rpm 离心beads的速度离？有哪位知道吗？怎么我老是碰到一些看起来
对别人根本不是问题的问题呢？十分十分感谢您的任何建议回答！
子。我是用的SDS free lysis buffer：1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
. 超声后离心,14000 rpm 10min，DNA 总是在离心后的沉淀里，上清很少。但是DNA的
大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗， 因为DNA上有蛋白，比较大？还是
说细胞核没有裂好？因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核，再超声，离心就没这个问题
。如果DNA 大小在几百个bp了，是不是说明核已经裂了呢？我可以干脆省掉离心这步吗
？或者就用4000rpm 离心beads的速度离？有哪位知道吗？怎么我老是碰到一些看起来
对别人根本不是问题的问题呢？十分十分感谢您的任何建议回答！
C*t
5 楼
暂住人有没有外国国籍并不重要；重要的是暂住人有没有中国国籍。暂住人不具有中国
国籍的话便须办理登记手续。
在城镇民居借宿的须在24小时内向暂住地公安派出所登记；暂住涉外旅店则由旅店向当
地公安派出所登记。
国籍的话便须办理登记手续。
在城镇民居借宿的须在24小时内向暂住地公安派出所登记；暂住涉外旅店则由旅店向当
地公安派出所登记。
G*8
6 楼
听了一首就不想看下去了。
b*i
7 楼
Not sure why you have to use SDS-free lysis buffer. I assume that someone
told you, maybe your PI, right?
1% SDS lysis buffer is quite standard. If you do not have specific reason
to avoid it, such as studying
chromatin binding complex, 1% SDS is fine for most of transfection factor
binding studies.
deoxycholate
【在 m***o 的大作中提到】
: chromatin immunoprecipitation做了一个多月了，可是在最开始的步骤上就迈不开步
: 子。我是用的SDS free lysis buffer：1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
: . 超声后离心,14000 rpm 10min，DNA 总是在离心后的沉淀里，上清很少。但是DNA的
: 大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗， 因为DNA上有蛋白，比较大？还是
: 说细胞核没有裂好？因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核，再超声，离心就没这个问题
: 。如果DNA 大小在几百个bp了，是不是说明核已经裂了呢？我可以干脆省掉离心这步吗
: ？或者就用4000rpm 离心beads的速度离？有哪位知道吗？怎么我老是碰到一些看起来
: 对别人根本不是问题的问题呢？十分十分感谢您的任何建议回答！
told you, maybe your PI, right?
1% SDS lysis buffer is quite standard. If you do not have specific reason
to avoid it, such as studying
chromatin binding complex, 1% SDS is fine for most of transfection factor
binding studies.
deoxycholate
【在 m***o 的大作中提到】
: chromatin immunoprecipitation做了一个多月了，可是在最开始的步骤上就迈不开步
: 子。我是用的SDS free lysis buffer：1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
: . 超声后离心,14000 rpm 10min，DNA 总是在离心后的沉淀里，上清很少。但是DNA的
: 大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗， 因为DNA上有蛋白，比较大？还是
: 说细胞核没有裂好？因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核，再超声，离心就没这个问题
: 。如果DNA 大小在几百个bp了，是不是说明核已经裂了呢？我可以干脆省掉离心这步吗
: ？或者就用4000rpm 离心beads的速度离？有哪位知道吗？怎么我老是碰到一些看起来
: 对别人根本不是问题的问题呢？十分十分感谢您的任何建议回答！
g*m
8 楼
搞笑吧你。谁管你。能入境离境就可以了。
【在 t*m 的大作中提到】
: 暑假小孩回北京探究。抵京后到哪个机关备案呢？接待人（小孩父亲）所在街道的派出
: 所？
: 如果抵京后，入住涉外酒店，是否酒店就能代外籍客人备案了？
: 谢谢
【在 t*m 的大作中提到】
: 暑假小孩回北京探究。抵京后到哪个机关备案呢？接待人（小孩父亲）所在街道的派出
: 所？
: 如果抵京后，入住涉外酒店，是否酒店就能代外籍客人备案了？
: 谢谢
s*o
9 楼
JUDGE一个一个像欠了他们钱似的，没有一点娱乐感
s*e
10 楼
Avoiding SDS in the lysis step is an ridiculous idea. The first-time to see. It is obviously against basic knowledge of ChIP, you should trash that protocol.
【在 b********i 的大作中提到】
: Not sure why you have to use SDS-free lysis buffer. I assume that someone
: told you, maybe your PI, right?
: 1% SDS lysis buffer is quite standard. If you do not have specific reason
: to avoid it, such as studying
: chromatin binding complex, 1% SDS is fine for most of transfection factor
: binding studies.
:
: deoxycholate
【在 b********i 的大作中提到】
: Not sure why you have to use SDS-free lysis buffer. I assume that someone
: told you, maybe your PI, right?
: 1% SDS lysis buffer is quite standard. If you do not have specific reason
: to avoid it, such as studying
: chromatin binding complex, 1% SDS is fine for most of transfection factor
: binding studies.
:
: deoxycholate
r*8
11 楼
1 是
2 是
2 是
d*0
12 楼
高晓松，孙楠都挺SB的。
【在 s**********o 的大作中提到】
: JUDGE一个一个像欠了他们钱似的，没有一点娱乐感
【在 s**********o 的大作中提到】
: JUDGE一个一个像欠了他们钱似的，没有一点娱乐感
m*o
13 楼
谢谢楼上两位。但是我们实验室以前的一个postdoc确实是用SDS free的裂解液做出的
很多结果。刚开始也是用1%SDS，结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
stardard,I think I will try this. Thank you all!
很多结果。刚开始也是用1%SDS，结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
stardard,I think I will try this. Thank you all!
r*1
14 楼
个人经验，没人管你，住店也好，回家也好
p*n
15 楼
chip 这玩意忒容易瞎搞作假了，对前人的结果别太信任
【在 m***o 的大作中提到】
: 谢谢楼上两位。但是我们实验室以前的一个postdoc确实是用SDS free的裂解液做出的
: 很多结果。刚开始也是用1%SDS，结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
: stardard,I think I will try this. Thank you all!
【在 m***o 的大作中提到】
: 谢谢楼上两位。但是我们实验室以前的一个postdoc确实是用SDS free的裂解液做出的
: 很多结果。刚开始也是用1%SDS，结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
: stardard,I think I will try this. Thank you all!
C*t
16 楼
外国人在内地暂住期间不依法向公安机关办理登记手续的，常有被边防检查机关惩处罚
款后方放行。
不法分子被查获的总体比例不高。
【在 g*m 的大作中提到】
: 搞笑吧你。谁管你。能入境离境就可以了。
款后方放行。
不法分子被查获的总体比例不高。
【在 g*m 的大作中提到】
: 搞笑吧你。谁管你。能入境离境就可以了。
m*o
17 楼
容易造假？是吗？我觉得比较模糊的一点是它没有个很好的CONTROL。大部分是开始的
时候用等量的细胞，但是那么多步骤，有一点没有搞好，就不是等量的input了。
另外，我还发现，超声后，同一样品，离心前取的样，和离心后取的样，跑胶的时候
DNA的大小不一样。离心后DNA总是比离心前的DNA小。是不是核膜会跟DNA交联一起，一
离心把些核膜给甩掉了？有谁可以帮解释一下吗？谢谢！
时候用等量的细胞，但是那么多步骤，有一点没有搞好，就不是等量的input了。
另外，我还发现，超声后，同一样品，离心前取的样，和离心后取的样，跑胶的时候
DNA的大小不一样。离心后DNA总是比离心前的DNA小。是不是核膜会跟DNA交联一起，一
离心把些核膜给甩掉了？有谁可以帮解释一下吗？谢谢！
h*9
18 楼
IgG control, input control, non-related AB control, non-related DNA control.
Repeats.
【在 m***o 的大作中提到】
: 容易造假？是吗？我觉得比较模糊的一点是它没有个很好的CONTROL。大部分是开始的
: 时候用等量的细胞，但是那么多步骤，有一点没有搞好，就不是等量的input了。
: 另外，我还发现，超声后，同一样品，离心前取的样，和离心后取的样，跑胶的时候
: DNA的大小不一样。离心后DNA总是比离心前的DNA小。是不是核膜会跟DNA交联一起，一
: 离心把些核膜给甩掉了？有谁可以帮解释一下吗？谢谢！
Repeats.
【在 m***o 的大作中提到】
: 容易造假？是吗？我觉得比较模糊的一点是它没有个很好的CONTROL。大部分是开始的
: 时候用等量的细胞，但是那么多步骤，有一点没有搞好，就不是等量的input了。
: 另外，我还发现，超声后，同一样品，离心前取的样，和离心后取的样，跑胶的时候
: DNA的大小不一样。离心后DNA总是比离心前的DNA小。是不是核膜会跟DNA交联一起，一
: 离心把些核膜给甩掉了？有谁可以帮解释一下吗？谢谢！
a*e
19 楼
how long did you fix that, at what concentration?
deoxycholate
【在 m***o 的大作中提到】
: chromatin immunoprecipitation做了一个多月了，可是在最开始的步骤上就迈不开步
: 子。我是用的SDS free lysis buffer：1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
: . 超声后离心,14000 rpm 10min，DNA 总是在离心后的沉淀里，上清很少。但是DNA的
: 大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗， 因为DNA上有蛋白，比较大？还是
: 说细胞核没有裂好？因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核，再超声，离心就没这个问题
: 。如果DNA 大小在几百个bp了，是不是说明核已经裂了呢？我可以干脆省掉离心这步吗
: ？或者就用4000rpm 离心beads的速度离？有哪位知道吗？怎么我老是碰到一些看起来
: 对别人根本不是问题的问题呢？十分十分感谢您的任何建议回答！
deoxycholate
【在 m***o 的大作中提到】
: chromatin immunoprecipitation做了一个多月了，可是在最开始的步骤上就迈不开步
: 子。我是用的SDS free lysis buffer：1% Triton-X 100, 0.1% sodium deoxycholate
: . 超声后离心,14000 rpm 10min，DNA 总是在离心后的沉淀里，上清很少。但是DNA的
: 大小都超声的大概300bp 了。是我离心速度太快吗， 因为DNA上有蛋白，比较大？还是
: 说细胞核没有裂好？因为我用1%SDS buffer 裂解细胞核，再超声，离心就没这个问题
: 。如果DNA 大小在几百个bp了，是不是说明核已经裂了呢？我可以干脆省掉离心这步吗
: ？或者就用4000rpm 离心beads的速度离？有哪位知道吗？怎么我老是碰到一些看起来
: 对别人根本不是问题的问题呢？十分十分感谢您的任何建议回答！
m*o
20 楼
10 min with 1% paraformaldehyde. It looks most protocols use this condition.
Thank you!
Thank you!
a*e
21 楼
change that to 0.4% and try again.
a*o
22 楼
you can try 0.1-1% SDS. If you worry about SDS, you can dilute when you do
IP.
【在 m***o 的大作中提到】
: 谢谢楼上两位。但是我们实验室以前的一个postdoc确实是用SDS free的裂解液做出的
: 很多结果。刚开始也是用1%SDS，结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
: stardard,I think I will try this. Thank you all!
IP.
【在 m***o 的大作中提到】
: 谢谢楼上两位。但是我们实验室以前的一个postdoc确实是用SDS free的裂解液做出的
: 很多结果。刚开始也是用1%SDS，结果总是不好才改的。不过既然大家认为1%SDS is
: stardard,I think I will try this. Thank you all!
m*o
23 楼
Thanks ahche and amedio! but what is the side effect of over crosslinking.
Is it better than less crosslinking?
Is it better than less crosslinking?
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